邵明清,邵南齊,劉旭光

(1臨汾市第四人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科,臨汾 041000;2鄭州澍青醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室;3安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;*通訊作者,E-mail:liuxuguang@ahau.edu.cn)

不同培養(yǎng)體系對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響

邵明清1,邵南齊2,劉旭光3*

(1臨汾市第四人民醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)科,臨汾 041000;2鄭州澍青醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室;3安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院;*通訊作者,E-mail:liuxuguang@ahau.edu.cn)

目的 探討不同的培養(yǎng)液、不同培養(yǎng)方法及培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響。 方法 將小鼠胚胎按不同品牌的培養(yǎng)液分為Cook,Quinns,Vitrolife組,這3個(gè)組以體外受精的方式獲得胚胎,比較小鼠胚胎受精率、卵裂率、囊胚率;按不同的培養(yǎng)方法分為:單胚培養(yǎng)組、WOW(又叫滴中孔)組、群胚培養(yǎng)組,這3個(gè)組以體內(nèi)受精的方式獲得胚胎,比較小鼠胚胎卵裂率、囊胚率;按培養(yǎng)氣相分為兩氣組、三氣組,這2個(gè)組以體內(nèi)受精的方式獲得胚胎,比較小鼠胚胎卵裂率、囊胚率、碎片率。 結(jié)果 在培養(yǎng)液方面,Quinns組的受精率(90.7%)最高,Quinns,Cook,Vitrolife三組培養(yǎng)液在卵裂率方面差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(85.4%,84.0%,84.9%，P>0.05)；在囊胚率上,Vitrolife組(89.6%)最高,三組差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在培養(yǎng)方法上,三組卵裂率(85.5%，91.1%，89.3%)差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),群胚培養(yǎng)組和WOW組囊胚率(89.1%，88.1%)顯著高于單胚培養(yǎng)組(77.5%，P<0.05)。在氣相方面,兩組卵裂率(74.7%，92.6%)和囊胚率(76.4%，90.9%)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論 不同的培養(yǎng)液、不同培養(yǎng)方法及培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育有不同的影響,選用Quinns培養(yǎng)液受精和Vitrolife培養(yǎng)液做后續(xù)培養(yǎng),使用群胚培養(yǎng)法在三氣(6%CO2、5%O2和89%N2)的氣相環(huán)境里培養(yǎng),小鼠胚胎體外發(fā)育可以獲得較高的囊胚率和較低的碎片率。

胚胎發(fā)育; 培養(yǎng)體系; 小鼠

影響胚胎發(fā)育的培養(yǎng)體系包括:培養(yǎng)液、培養(yǎng)密度、氣相、受精方式等[1]。如何建立最佳的體外胚胎發(fā)育培養(yǎng)體系是目前生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)之一。近幾年在培養(yǎng)體系方面有了一定的改進(jìn),但是受精率低、胚胎培養(yǎng)過(guò)程中碎片多、優(yōu)質(zhì)囊胚率低、妊娠率低等問(wèn)題依然存在,這些問(wèn)題依然困擾著臨床醫(yī)生和實(shí)驗(yàn)室工作人員,是臨床促排卵的問(wèn)題,還是實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的問(wèn)題，值得深入研究。

目前商品化的培養(yǎng)液主要有Quinns、Cook、Vitrolife等品牌,本次研究以昆明小鼠為試驗(yàn)材料,探討不同的培養(yǎng)液、不同培養(yǎng)密度及培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響,目的在于尋找一種適合昆明小鼠胚胎的培養(yǎng)液及培養(yǎng)環(huán)境,優(yōu)化小鼠胚胎體外培養(yǎng)體系,進(jìn)而為人類胚胎的體外培養(yǎng)提供相關(guān)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

4-6周齡雌性昆明小鼠80只,10-12周齡雄性昆明小鼠20只,購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,微生物級(jí)別:SPF,生產(chǎn)許可證號(hào)(SCXK(豫)2015-0005)。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周,排除應(yīng)激反應(yīng),將精神狀態(tài)欠佳者剔除。

1.2 主要試劑與儀器

孕馬血清(PMSG),寧波第二激素廠生產(chǎn);人絨毛膜促性腺激素(HCG),南京動(dòng)物激素廠生產(chǎn);培養(yǎng)液:Quinns、Cook、Vitrolife公司生產(chǎn);血清白蛋白代用品(HSA),Cook公司生產(chǎn)。培養(yǎng)皿及圓底試管由美國(guó)Falcon公司生產(chǎn);移液管及錐形試管由美國(guó)BD公司生產(chǎn);CO2培養(yǎng)箱(Galaxy 48)由英國(guó)Galaxy生產(chǎn);倒置顯微鏡(NikonTi)由日本Nikon生產(chǎn);IVF工作站(K-systems 426Dual)由丹麥Sterile生產(chǎn)。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)共分8個(gè)組,按不同品牌的培養(yǎng)液分為Cook,Quinns,Vitrolife組,這3個(gè)組研究培養(yǎng)液對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響;按不同的培養(yǎng)方法分為:單胚培養(yǎng)組(每個(gè)微滴30 μl,每個(gè)微滴放一枚胚胎)、WOW(well of the well,WOW,又叫滴中孔,每孔一個(gè)胚胎)組、群胚培養(yǎng)組(每個(gè)微滴10個(gè)胚胎),這3個(gè)組研究不同培養(yǎng)方法對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響;按培養(yǎng)氣相分為兩氣組(6%CO2和94%空氣的混合氣體)、三氣組(6%CO2、5%O2和89%N2的混合氣體),這2個(gè)組研究不同培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響。

本文中涉及到的公式如下:受精率=(受精卵數(shù)/獲卵總數(shù))×100%,卵裂率=(受精卵裂胚胎數(shù)/受精卵數(shù))×100%,囊胚率=(形成囊胚數(shù)/所有囊胚培養(yǎng)的胚胎數(shù))×100%。

1.4 小鼠體外受精胚胎在不同培養(yǎng)液里的發(fā)育

1.4.1 小鼠體外受精胚胎的準(zhǔn)備 13:00時(shí)取雌性小鼠,每批取6只,每只雌鼠腹腔內(nèi)注射PMSG 10 IU,經(jīng)過(guò)48 h腹腔內(nèi)注射HCG 10 IU,再經(jīng)過(guò)17 h頸椎脫臼法處死雌鼠,無(wú)菌條件下取出輸卵管,將卵丘卵細(xì)胞復(fù)合體收集到500 μl分別含有Quinns、Cook、Vitrolife品牌的受精液的培養(yǎng)皿中,放入37 ℃、6.0% CO2、90%以上相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中。

頸椎脫臼法處死雄鼠,在無(wú)菌條件下取出附睪尾,放入Quinns、Cook、Vitrolife液中,用1 ml注射器刺破附睪尾,精子自由游出,放入37 ℃、6.0% CO2、90%以上相對(duì)濕度的培養(yǎng)箱中獲能60 min。

將獲能的精子加入卵丘卵細(xì)胞復(fù)合體液滴內(nèi),精卵結(jié)合6 h,取出受精卵,分別放進(jìn)提前平衡過(guò)的含Quinns、Cook、Vitrolife品牌的卵裂液的培養(yǎng)皿培養(yǎng)。

1.4.2 小鼠體外受精胚胎的觀察 第1天把含胚胎的培養(yǎng)皿放在倒置顯微鏡的載物臺(tái)上,觀察卵裂情況并記錄,每隔24 h觀察一次,直至囊胚的形成。

1.5 小鼠受精卵在不同培養(yǎng)方法中的發(fā)育

1.5.1 小鼠受精卵的采集及培養(yǎng) 超排方法同1.4.1,HCG注射后按雌雄比例1 ∶1合籠,次日8:00時(shí)檢查陰栓,將陰栓陽(yáng)性小鼠處死,取出受精卵,隨機(jī)分為3組,分別是單胚培養(yǎng)組、群胚培養(yǎng)組和WOW組進(jìn)行培養(yǎng),放進(jìn)提前平衡過(guò)的Quinns、Cook、Vitrolife液滴內(nèi)。

1.5.2 受精卵的觀察 第1天把含胚胎的培養(yǎng)皿放在倒置顯微鏡的載物臺(tái)上,觀察卵裂情況并記錄,每隔24 h觀察一次,直至囊胚的形成。

1.6 小鼠受精卵在不同的培養(yǎng)氣相中的發(fā)育

受精卵獲得同1.5.1,自然受精后的形態(tài)正常的原核胚隨機(jī)分為兩組,分別使用6% CO2和94 %空氣的混合氣體;另一種培養(yǎng)氣相是6% CO2、5% O2和89% N2的氣體環(huán)境,觀察小鼠原核胚體外發(fā)育情況,統(tǒng)計(jì)分析不同組別胚胎的卵裂率、囊胚率、碎片率。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS16.0軟件的One-Way ANOVA模塊對(duì)不同組別的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 不同培養(yǎng)液對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響

分別在Quinns,Cook,Vitrolife三組培養(yǎng)液中培養(yǎng)小鼠胚胎,觀察到的發(fā)育情況(見(jiàn)圖1)。Quinns組的卵子受精率最高,Quinns、Cook、Vitrolife三組培養(yǎng)液在卵裂率差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表1),在囊胚率差上Vitrolife組最高,差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，見(jiàn)表1)。三種培養(yǎng)液均適宜培養(yǎng)人類胚胎。

A 原核期胚胎; B 卵裂期胚胎; C 囊胚圖1 小鼠胚胎體外發(fā)育情況(×200)Figure 1 In vitro development of mouse embryos(×200)

表 1 不同培養(yǎng)液對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響

Table 1 Effects of different culture media on the development of mouse embryos

組別n受精率(%)卵裂率(%)囊胚率(%)Cook150847(127/150)840(126/150)850(107/126)Quinns151907(137/151)854(129/151)891(115/129)Vitrolife159862(137/159)849(135/159)896(121/135) P>005>005>005

2.2 不同培養(yǎng)方法對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響

自然受精后的小鼠原核胚隨機(jī)分為3組,分別進(jìn)行單胚培養(yǎng)、WOW組培養(yǎng)、群胚培養(yǎng)(每組10個(gè)胚胎),觀察各組胚胎的發(fā)育情況。卵裂率三組差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);囊胚率群胚培養(yǎng)組和WOW組顯著高于單胚培養(yǎng)組(P<0.05,見(jiàn)表2)。結(jié)果表明,小鼠胚胎使用WOW組和群胚培養(yǎng)法的培養(yǎng)效果較佳。

表 2 不同培養(yǎng)方法對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響

Table 2 Effects of different culture methods on the development of mouse embryos

組別胚胎數(shù)(枚)卵裂率(%)囊胚率(%)單胚培養(yǎng)組83855(71/83)775(55/71)群胚培養(yǎng)組101911(92/101)891(82/92)WOW組75893(67/75)881(59/67) P>005<005

2.3 不同培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響

自然受精后的原核胚隨機(jī)分為兩組,一種培養(yǎng)氣相是兩氣(6% CO2和94%空氣的混合氣體);另一種培養(yǎng)氣相是三氣(6% CO2、5% O2和89% N2)的氣體環(huán)境,觀察各組胚胎的發(fā)育情況。兩組卵裂率和囊胚率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見(jiàn)表3)，三氣組顯著高于兩氣組,結(jié)果表明,小鼠胚胎使用培養(yǎng)氣相是6% CO2、5% O2和89% N2的氣體環(huán)境的培養(yǎng)效果較佳。通過(guò)胚胎碎片的比較,結(jié)果顯示:胚胎中所含碎片比例為0%-5%,6%-20%,>20%在兩組中分別為19.8%與48.4%，36.3%與32.6%，44.0%與18.9%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見(jiàn)表4)。說(shuō)明碎片的多少與氣相有一定的關(guān)系,分裂及生長(zhǎng)速度三氣組明顯優(yōu)于兩氣組。

表 3 不同培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的影響

Table 3 Effects of different gas conditions on the development of mouse embryos

組別胚胎數(shù)(枚)卵裂率(%)囊胚率(%)兩氣組91747(68/91)764(52/68)三氣組95926(88/95)909(80/88)P<005<005

表 4 不同培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎碎片的影響

Table 4 Effects of different gas conditions on the fragmentation of mouse embryos

組別胚胎數(shù)(枚)碎片率(%)0%-5%6%-20%>20%兩氣組91198(18/91)363(33/91)440(40/91)三氣組95484(46/95)326(31/95)189(18/95)P<005>005<005

3 討論

培養(yǎng)液發(fā)展經(jīng)歷了從單一培養(yǎng)基到序貫培養(yǎng)基的發(fā)展歷史[1],簡(jiǎn)單培養(yǎng)基由幾種常規(guī)無(wú)機(jī)鹽類并添加能量底物,而復(fù)雜培養(yǎng)基除這些成分以外,還含有維生素、氨基酸、嘌呤、核苷酸及微量表面活性劑等諸多成分[1]。在體外培養(yǎng)的不同時(shí)間,胚胎對(duì)培養(yǎng)液的成分會(huì)有不同的要求,使用單一培養(yǎng)液顯然是不夠的。

培養(yǎng)液的穩(wěn)定性直接決定胚胎培養(yǎng)結(jié)局,因此,選擇生產(chǎn)工藝成熟廠家的培養(yǎng)液至關(guān)重要,由于商業(yè)機(jī)密的原因,大多培養(yǎng)液的具體配方?jīng)]有公開(kāi),因此,新進(jìn)培養(yǎng)液必須進(jìn)行質(zhì)控,只有質(zhì)控合格的培養(yǎng)液才能用于人類胚胎的培養(yǎng),否則,一時(shí)的疏忽,可能給患者帶來(lái)意想不到的后果。本研究涉及的三個(gè)品牌的培養(yǎng)液Quinns、Cook、Vitrolife培養(yǎng)液在卵裂率、囊胚率上差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),Quinns組的受精率最高,三組培養(yǎng)液均適宜培養(yǎng)人類胚胎,與宋冰冰等[2]的結(jié)果類似。

目前常用的胚胎培養(yǎng)方法主要有:微滴法、WOW法、群胚培養(yǎng)法等[3],微滴法原理是將胚胎聚集在一個(gè)較小的區(qū)域以達(dá)到充分利用自分泌和旁分泌效應(yīng)的目的,微滴的體積一般為10-50 μl。WOW培養(yǎng)法,由于胚胎之間相互隔離,且每枚都位于WOW中,不但可以使胚胎分泌的一些因子不被稀釋以自分泌方式作用于自身,還可以阻止有毒物質(zhì)作用于正常胚胎。本次研究結(jié)果表明:單胚培養(yǎng)組、WOW組、群胚培養(yǎng)組胚胎的發(fā)育情況在卵裂率水平上,三組差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);在囊胚率上,群胚培養(yǎng)組和WOW組顯著高于單胚培養(yǎng)組(P<0.05)。在多種動(dòng)物模型上的研究表明[4],增加培養(yǎng)密度可以提高胚胎的發(fā)育潛能,可能與胚胎自分泌或旁分泌效應(yīng)有關(guān)?；谏鲜鲂?yīng),培養(yǎng)過(guò)程中使用體積較小的培養(yǎng)液滴并縮小液體表面積促使?fàn)I養(yǎng)因子盡可能聚集濃縮可顯著提高胚胎的發(fā)育潛能[5]。

但是對(duì)于人類胚胎,需要對(duì)每個(gè)胚胎都要進(jìn)行細(xì)致的觀察,群胚培養(yǎng)無(wú)法區(qū)別多精受精的情況,因此還是單胚培養(yǎng),從本次研究看,群胚培養(yǎng)組和WOW組顯著高于單胚培養(yǎng)組,有報(bào)道用WOW系統(tǒng)培養(yǎng)牛的胚胎[6],兼有單胚培養(yǎng)與群胚培養(yǎng)的優(yōu)勢(shì),WOW培養(yǎng)體系的半開(kāi)放環(huán)境不僅稀釋了培養(yǎng)過(guò)程中堆積的代謝產(chǎn)物(如氨、自由基等)的毒性作用,而且還在每個(gè)微孔內(nèi)的胚胎周圍聚集了胚胎自分泌或者旁分泌的生長(zhǎng)因子,進(jìn)而促進(jìn)胚胎的發(fā)育。此法能否用于人的胚胎培養(yǎng),仍需要進(jìn)行更加深入的研究。鑒于自制WOW培養(yǎng)皿時(shí),燒燙塑料培養(yǎng)皿會(huì)有有害物質(zhì)產(chǎn)生,如果有商品化的WOW培養(yǎng)皿,效果會(huì)好一點(diǎn)。

除培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法外,培養(yǎng)氣相也是影響胚胎培養(yǎng)效果的一個(gè)重要因素。本次研究表明:在卵裂率和囊胚率上,兩氣組和三氣組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),原因在于三氣組中低氧可減少培養(yǎng)中自由基和活性氧(ROS)的形成,而活性氧對(duì)細(xì)胞有毒害作用,易造成DNA損傷和脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)[7]。而高氧環(huán)境(體積分?jǐn)?shù)20% O2)會(huì)產(chǎn)生更多的活性氧,從而影響胚胎的發(fā)育潛能[8]。

低氧除要求氣相中氧氣含量低外,還要求實(shí)驗(yàn)室人員操作胚胎時(shí)要迅速,減少胚胎在空氣中的暴露時(shí)間,特別是做卵泡漿內(nèi)單精子注射(ICSI)時(shí),應(yīng)該先把精子制動(dòng)后,再把卵子轉(zhuǎn)移到ICSI皿中,再者,觀察胚胎要迅速。胚胎在體外培養(yǎng)時(shí),要盡量減少培養(yǎng)液pH的變化,pH與CO2存在一定的關(guān)系,適宜的酸堿度是維持胚胎正常發(fā)育的重要條件,一旦環(huán)境的pH值發(fā)生改變,將會(huì)影響胚胎的發(fā)育。碎片是胚胎體外培養(yǎng)中經(jīng)常出現(xiàn)的現(xiàn)象,產(chǎn)生原因可能與配子的質(zhì)量、實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境質(zhì)量如溫度或pH變化及促排卵用藥方案有關(guān)。本次研究顯示,在三氣組的氣相環(huán)境中,碎片較兩氣組中少,可能與低氧環(huán)境產(chǎn)生更少的活性氧有關(guān)。龍鼎新等[9]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,較低或較高的pH環(huán)境均可以降低胚胎的存活率,增加致畸率和死亡率,最終表現(xiàn)為胚胎發(fā)育異?；蛩劳?。因此,胚胎培養(yǎng)的外界環(huán)境要盡量與體內(nèi)環(huán)境一致,本次實(shí)驗(yàn)表明胚胎在6% CO2、5% O2和89% N2的氣相環(huán)境中可以取得較好的發(fā)育效果。

由于受實(shí)驗(yàn)條件的限制,本實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)體系還是靜態(tài)培養(yǎng)體系,今后研究的方向應(yīng)該是動(dòng)態(tài)培養(yǎng)體系,如搖動(dòng)/轉(zhuǎn)動(dòng)體系、傾斜培養(yǎng)體系、振動(dòng)培養(yǎng)體系、控制液體流動(dòng)培養(yǎng)體系等,時(shí)差成像系統(tǒng)(time-lapse imaging,TLI)作為一種新的動(dòng)態(tài)觀察胚胎培養(yǎng)體系,越來(lái)越受到臨床醫(yī)生與胚胎學(xué)家的青睞。胚胎學(xué)家應(yīng)用這一系統(tǒng)后,可以通過(guò)視頻圖像連續(xù)觀察其整個(gè)動(dòng)態(tài)發(fā)育過(guò)程,而不需將胚胎從培養(yǎng)箱中取出。但TLI系統(tǒng)的安全性有待進(jìn)一步評(píng)估[10]。再者儀器昂貴,限制了在一般生殖中心的推廣。因此,對(duì)大多數(shù)剛開(kāi)展的生殖中心來(lái)說(shuō),還是應(yīng)該采用成熟的培養(yǎng)體系。

本研究的結(jié)果表明,不同的培養(yǎng)液、不同培養(yǎng)方法及培養(yǎng)氣相對(duì)小鼠胚胎體外發(fā)育的有不同的影響,選用Quinns培養(yǎng)液受精和Vitrolife培養(yǎng)液做后續(xù)培養(yǎng),使用群胚培養(yǎng)法在三氣(6%CO2、5%O2和89%N2)的氣相環(huán)境里培養(yǎng)小鼠胚胎,可以獲得較高的囊胚率和較低的碎片率。

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Effect of different culture systems oninvitrodevelopment of mouse embryos

SHAO Mingqing1,SHAO Nanqi2,LIU Xuguang3*

(1ReproductiveCenterofLinfenFourthPeople’sHospital,Linfen041000,China;2DepartmentofPharmacologyofZhengzhouShuqingMedicalCollege;3CollegeofAnimalScienceandTechnologyofAnhuiAgriculturalUniversity;*Correspondingauthor,E-mail:liuxuguang@ahau.edu.cn)

ObjectiveTo investigate the effects of different culture media, different culture methods and culture gas on theinvitrodevelopment of mouse embryos.MethodsThe mouse embryos was divided into Cook group, Quinns group, Vitrolife group according to different brands of culture medium. The embryos were obtained byinvitrofertilization among three groups, and the fertilization rate, cleavage rate and blastocyst rate were compared. According to different culture methods, the experiment was divided into single embryo culture group, WOW group and multiple embryos group. The embryos were obtained byinvivofertilization among these groups to compare cleavage rate and blastocyst rate.According to the culture phase, the experiment was divided into two gas group and three gas group. The embryos were obtained byinvivofertilization in the two groups to compare the cleavage rate, blastocyst rate and Fragmentation rate.ResultsThe fertilization rate was the highest in Quinns group(90.7%).There was no significant difference in cleavage rate among three groups(85.4%,84.0%,84.9%,P>0.05).The blastocyst rate was the highest in Vitrolife group(89.6%), and there was no significant difference among three groups(P>0.05). There was no significant difference in cleavage rate among three culture methods(P>0.05). Blastocyst rates in multiple embryos group and WOW group were significantly higher than that of single embryo culture(89.1%,88.1%vs77.5%,P<0.05). There was significant difference in cleavage rate(74.7%,92.6%) and blastocyst rate(76.4%,90.9%) between two culture gas groups(P<0.05).ConclusionThe different culture medium, different culture methods and culture gas have different effects on mouse embryo developmentinvitro.The results suggest that Quinns medium as fertilization media,Vitrolife media as the following culture media, multiple embryos group culture method and three gas(6%CO2, 5%O2and 89%N2) as culture environment can have higher blastocyst rate and lower fragmentation rateinvitrodevelopment of mouse embryos.

embryo development; culture system; mouse

安徽省科研資助計(jì)劃項(xiàng)目(自然科學(xué))(2006jq1128)

邵明清,男,1982-02生,碩士,實(shí)驗(yàn)師,E-mail:shaomingqing@126.com

2017-03-19

S814.8

A

1007-6611(2017)07-0654-05

10.13753/j.issn.1007-6611.2017.07.004