夏冰清 朱晶宇 阮巍山 高燕萍 葉建明 張秋生 曾志榮

手術(shù)對(duì)結(jié)直腸癌患者腸道菌群的影響及微生態(tài)制劑治療腸道菌群失調(diào)的效果

夏冰清 朱晶宇 阮巍山 高燕萍 葉建明 張秋生 曾志榮

目的觀察手術(shù)對(duì)結(jié)直腸癌患者腸道菌群的影響及微生態(tài)制劑治療腸道菌群失調(diào)的效果。方法74例結(jié)直腸癌擇期手術(shù)患者, 按照治療方式差異分為對(duì)照組和觀察組, 各37例。對(duì)照組患者術(shù)后進(jìn)行常規(guī)基礎(chǔ)治療, 觀察組患者在對(duì)照組基礎(chǔ)上采用三聯(lián)活菌制劑治療, 觀察兩組患者術(shù)前術(shù)后腸道菌群情況和腸道屏障功能情況。結(jié)果①觀察組術(shù)前雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌和雙歧桿菌/大腸桿菌比值(B/E)分別為(9.3±0.6)、(9.1±0.7)、(8.2±0.4)、(8.1±0.6)copies/g和(1.4±0.2),術(shù)后10 d分別為(8.4±0.5)、(7.9±0.6)、(9.4±0.7)、(9.3±0.8)copies/g和(0.8±0.2), 術(shù)后60 d分別為(9.1±0.6)、(8.9±0.7)、(8.7±0.5)、(8.3±0.5)copies/g和(1.3±0.2)；對(duì)照組術(shù)前雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌和B/E值分別為(9.3±0.6)、(9.0±0.8)、(8.1±0.5)、(8.1±0.7)copies/g和(1.4±0.3), 術(shù)后10 d分別為(8.0±0.4)、(4.3±0.6)、(9.9±0.8)、(9.6±0.8)copies/g和(0.6±0.1), 術(shù)后60 d分別為(8.4±0.6)、(6.9±0.5)、(9.2±0.7)、(9.1±0.5)copies/g和(0.9±0.2)。兩組術(shù)前雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌和B/E值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；觀察組術(shù)后10 d與術(shù)前上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 對(duì)照組術(shù)后10、60 d與術(shù)前上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組術(shù)后同時(shí)間上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。②兩組術(shù)前D-乳酸和尿乳果糖/甘露醇值(L/M)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；兩組上述指標(biāo)術(shù)前與術(shù)后比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組術(shù)后相同時(shí)間上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論結(jié)直腸癌患者術(shù)后腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌等益生菌數(shù)量明顯降低, 而大腸桿菌以及糞腸球菌數(shù)量明顯上升, 腸道菌群呈現(xiàn)失調(diào)狀態(tài), 患者腸道屏障功能出現(xiàn)異常；給予患者使用微生態(tài)制劑治療, 可有效改善腸道菌群失調(diào)狀況, 維護(hù)腸道屏障功能情況。

結(jié)直腸癌；腸道菌群；微生態(tài)制劑

近幾年來, 我國人們生活生活習(xí)慣變化巨大, 加之受到環(huán)境因素的影響, 導(dǎo)致結(jié)直腸癌的發(fā)生率表現(xiàn)為遞增狀況［1］。觀察結(jié)直腸癌患者術(shù)前術(shù)后腸道菌群的改變情況, 統(tǒng)計(jì)微生態(tài)制劑治療腸道菌群失調(diào)的臨床效果, 可掌握腸道菌群與患者預(yù)后存在的聯(lián)系, 為臨床治療做鋪墊［2-4］。本研究對(duì)此進(jìn)行分析, 報(bào)告如下。

1 資料與方法

1. 1一般資料 將本院2015～2016年收治的74例結(jié)直腸癌擇期手術(shù)患者按照治療方式差異分為對(duì)照組和觀察組,各37例。其中男44例, 女30例, 平均年齡(67.3±4.1)歲。納入條件：患者術(shù)前1個(gè)月內(nèi)無抗生素、微生態(tài)活菌制劑和導(dǎo)瀉藥使用史；未出現(xiàn)腸道炎癥、梗阻和穿孔癥狀, 無全身性疾病。

1. 2方法 ①由北京博邁斯生物科技有限公司提供的試劑盒有D-乳酸和內(nèi)毒素測定試劑盒；由北京陸橋技術(shù)有限公司提供的有細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增試劑盒、DNA提取液以及瓊脂糖；紫外可見光分光光度計(jì)型號(hào)為德國Eppendorf；熒光定量PCR儀型號(hào)為美國ABI Prism7000。②在兩組患者術(shù)前3 d和術(shù)后10、60 d,收集正常排便新鮮糞便中間部位0.5 g的樣本, 將其保存在-4℃的條件下。③將中國科學(xué)院微生物研究所生產(chǎn)的雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌和糞腸球菌設(shè)為標(biāo)準(zhǔn)菌株, 提取其DNA, 通過紫外可見光分光光度計(jì)給予定量, 通過系統(tǒng)軟件觀察其循環(huán)閾值(Ct)、生成標(biāo)準(zhǔn)曲線以及統(tǒng)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)品PCR片段拷貝數(shù)。④將糞便樣本解凍, 提取0.2 g, 通過磷酸鹽緩沖液進(jìn)行處理, 以1000 r/min的規(guī)格完成10 min的離心運(yùn)動(dòng), 并提取200 μl的上清液, 提取其DNA。給予樣本細(xì)菌DNA提取液完成標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng), 出現(xiàn)樣本細(xì)菌Ct值, 最終得出樣本拷貝數(shù)；統(tǒng)計(jì)B/E, 對(duì)腸道菌群進(jìn)行分析。⑤收集兩組患者術(shù)前3 d和術(shù)后1、10 d清晨的空腹外周靜脈血液,血漿D-乳酸通過酶學(xué)分光光度法檢驗(yàn)；保存中段尿, L/M通過高效液相色譜法檢驗(yàn), 分析腸道屏障情況。⑥對(duì)照組患者術(shù)后進(jìn)行常規(guī)基礎(chǔ)治療, 觀察組患者在對(duì)照組的前提下采用三聯(lián)活菌制劑治療, 患者在肛門排氣后食用流食, 同時(shí)給予雙歧桿菌乳桿菌三聯(lián)活菌制劑(國藥準(zhǔn)字S19980004), 由內(nèi)蒙古雙奇藥業(yè)股份有限公司提供；雙歧桿菌的活菌數(shù)需＞1.0×107CFU/g, 保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌的活菌數(shù)需＞1.0×106CFU/g；按照4片/次、2次/d的規(guī)格服用, 連續(xù)服用10 d。

2 結(jié)果

2. 1兩組患者術(shù)前術(shù)后的腸道菌群情況比較 觀察組術(shù)前雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌和B/E值分別為(9.3±0.6)、(9.1±0.7)、(8.2±0.4)、(8.1±0.6)copies/g和(1.4±0.2), 術(shù)后10 d分別為(8.4±0.5)、(7.9±0.6)、(9.4±0.7)、(9.3±0.8)copies/g和(0.8±0.2), 術(shù)后60 d分別為(9.1±0.6)、(8.9± 0.7)、(8.7±0.5)、(8.3±0.5)copies/g和(1.3±0.2)；對(duì)照組術(shù)前雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌和B/E值分別為(9.3±0.6)、(9.0±0.8)、(8.1±0.5)、(8.1±0.7)copies/g和(1.4±0.3), 術(shù)后10 d分別為(8.0±0.4)、(4.3±0.6)、(9.9±0.8)、(9.6±0.8)copies/g和(0.6±0.1), 術(shù)后60 d分別為(8.4±0.6)、(6.9±0.5)、(9.2±0.7)、(9.1±0.5)copies/g和(0.9±0.2)。兩組術(shù)前雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌和B/E值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；觀察組術(shù)后10 d與術(shù)前上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 對(duì)照組術(shù)后10、60 d與術(shù)前上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組術(shù)后同時(shí)間上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2. 2兩組患者術(shù)前術(shù)后的腸道屏障情況比較 觀察組患者術(shù)前D-乳酸和尿L/M值分別為(0.61±0.09)μg/ml、(0.33±0.04),術(shù)后1 d分別為(11.42±0.39)μg/ml、(0.78±0.05), 術(shù)后10 d分別為(1.44±0.23)μg/ml、(0.53±0.03)；對(duì)照組術(shù)前D-乳酸和尿L/M值分別為(0.59±0.11)μg/ml、(0.34±0.02), 術(shù)后1 d分別為(10.62±0.36)μg/ml、(0.69±0.09), 術(shù)后10 d分別為(7.13±0.15)μg/ml、(0.81±0.05)。兩組D-乳酸和尿L/M值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；兩組上述指標(biāo)術(shù)前與術(shù)后比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組術(shù)后相同時(shí)間上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

3 討論

組成腸道保護(hù)屏障不可缺少的部分是腸道菌群, 一般來講腸道菌群主要以厭氧菌為基礎(chǔ), 益生菌主要以雙歧桿菌和乳酸桿菌為基礎(chǔ), 而益生菌和腸上皮細(xì)胞在特異性受體結(jié)合的情況下生存在腸道中, 從而生成一道生物屏障, 該屏障具有一定層次性, 受到占位保護(hù), 一些生物學(xué)效應(yīng)(如生物化學(xué)效應(yīng)和競爭生長等)可有效阻礙有害菌生長發(fā)育, 最終使腸道遠(yuǎn)離病原菌, 避免病原菌的粘附和入侵［5-7］。通過手術(shù)方式清除腫瘤和切除腸道是治療結(jié)直腸癌一種有效手段, 但給患者腸道帶來巨大傷害, 吻合腸道出現(xiàn)缺氧和缺血幾率較高, 同時(shí)手術(shù)應(yīng)激狀態(tài)給腸道屏障造成巨大的影響［8-10］。本院研究中：兩組術(shù)前雙歧桿菌、乳酸桿菌、大腸桿菌、糞腸球菌和B/E值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；觀察組術(shù)后10 d與術(shù)前上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05), 對(duì)照組術(shù)后10、60 d與術(shù)前上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組術(shù)后同時(shí)間上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。兩組D-乳酸和尿L/M值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；兩組上述指標(biāo)術(shù)前與術(shù)后比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組術(shù)后相同時(shí)間上述指標(biāo)比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

綜上所述, 結(jié)直腸癌患者術(shù)后腸道內(nèi)雙歧桿菌和乳酸桿菌等益生菌數(shù)量明顯降低, 而大腸桿菌以及糞腸球菌數(shù)量明顯上升, 腸道菌群呈現(xiàn)失調(diào)狀態(tài), 患者腸道屏障功能出現(xiàn)異常；給予患者使用微生態(tài)制劑治療, 可有效改善腸道菌群失調(diào)狀況, 維護(hù)腸道屏障功能情況。

［1］ 朱達(dá)堅(jiān), 陳小伍, 伍錦浩, 等.結(jié)直腸癌圍手術(shù)期替代應(yīng)用腸道微生態(tài)制劑對(duì)腸道菌群及機(jī)體免疫功能的影響.南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 32(8):1190-1193.

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.13.043

2017-04-21］

510000 中山大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科(夏冰清 曾志榮)；中山大學(xué)附屬中山市人民醫(yī)院消化內(nèi)科(夏冰清朱晶宇 阮巍山 高燕萍 葉建明 張秋生)

曾志榮