余傳辛，高秀秀，萬梓成，梁 旺,3，王 蕭

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510405； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，廣州 510405；3.梅州市第二中醫(yī)醫(yī)院針灸科，廣東 梅州 514011)

公路運輸對新西蘭兔血液及生化指標(biāo)的影響

余傳辛1，高秀秀1，萬梓成1，梁 旺1,3，王 蕭2*

(1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510405； 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，廣州 510405；3.梅州市第二中醫(yī)醫(yī)院針灸科，廣東 梅州 514011)

目的 觀察公路運輸對新西蘭兔血液常規(guī)和生化指標(biāo)的影響。方法 選用12只健康普通級新西蘭兔進行2 h公路運輸，分別在運輸前，運輸后0、24、48、72、96 h采集血液獲得檢測樣本。通過血液分析儀檢測血常規(guī)指標(biāo)：白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白量(HGB)、紅細胞壓積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)、血小板(PLT)。通過全自動生化分析儀檢測：肝功能指標(biāo)：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)；腎功能指標(biāo)：尿素氮(UREA)、肌酐(CREA)、尿酸(UA)；脂代謝指標(biāo)：甘油三酯(TG)、總膽固醇(COHL)；糖代謝指標(biāo)：葡萄糖(GLU)；炎性指標(biāo)：超敏感C-反應(yīng)蛋白(CRP)；血清酶：α-淀粉酶(AMYL)、肌酸激酶(CK)。結(jié)果 與運輸前比較，運輸結(jié)束后：血常規(guī)指標(biāo)中，WBC先升高(P< 0.05或P< 0.01)后降低，RBC、HGB、HCT、PLT均先降低(P< 0.05或P< 0.01)后升高，MCV在運輸結(jié)束96 h時顯著高于運輸前(P< 0.05)；肝功能指標(biāo)中，ALT、AST先升高(P< 0.05或P< 0.01)后降低，TP、ALB先降低(P< 0.05或P< 0.01)后升高；腎功能指標(biāo)中，BUN先升高(P< 0.05或P< 0.01)后降低，CREA先降低(P< 0.01)后升高；脂代謝指標(biāo)中，TG先降低(P< 0.01)后升高；糖代謝指標(biāo)GLU在運輸結(jié)束24 h時顯著低于運輸前(P< 0.01)；除MCV外，各項指標(biāo)均在運輸結(jié)束96 h時與運輸前無明顯差異。結(jié)論 公路運輸會引起新西蘭兔血液常規(guī)、肝腎功能指標(biāo)、脂代謝指標(biāo)、糖代謝指標(biāo)及肌酸激酶指標(biāo)的變化，且各指標(biāo)在96 h內(nèi)基本恢復(fù)至運輸前水平。

公路運輸；新西蘭兔；血常規(guī)；生化指標(biāo)

運輸在實驗動物行業(yè)必不可少，運輸應(yīng)激是動物機體在運輸過程中禁食、環(huán)境變化、顛簸、心理壓力等應(yīng)激源的綜合作用后所產(chǎn)生的適應(yīng)性和防御性反應(yīng)[1]，是在普通級實驗兔生產(chǎn)與實驗過程中最常見的一種應(yīng)激[2]。且運輸過程中環(huán)境溫濕度、裝載密度、運輸時間、裝卸過程、禁食飲水等對實驗兔產(chǎn)生的各種不利影響都會影響實驗動物的福利，影響實驗動物的生理生化指標(biāo)。

新西蘭兔作為常用實驗動物應(yīng)用越來越廣泛[3]，在實驗過程中保持其生理和生化客觀指標(biāo)的穩(wěn)定對保證科研實驗結(jié)果的確定性與穩(wěn)定性意義重大。因在廣州周邊市區(qū)運輸新西蘭兔至本校車程約1.5 ～ 2 h，故本實驗通過對新西蘭兔在運輸前及經(jīng)過2 h公路運輸后的適應(yīng)性飼養(yǎng)期間的血液常規(guī)和部分生理生化指標(biāo)的檢測，探討新西蘭兔在運輸前后血液指標(biāo)的影響及變化規(guī)律，以期為選用新西蘭兔作為實驗動物進行科學(xué)實驗提供適應(yīng)性飼養(yǎng)時間的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗動物

健康的普通級新西蘭兔12只，雌雄各半，體重3.0 ～ 3.5 kg，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供【SCXK(粵)2013-0020】，【SYXK(粵)2013-0001】。在動物飼養(yǎng)和實驗過程中，嚴格遵循實驗動物倫理條例，并經(jīng)廣州中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物倫理委員會倫理審查通過后進行，申請表編號：S2015060。

1.2 實驗方法

選用12只健康的普通級新西蘭兔，進行2 h公路運輸，運輸時間：2016年1月13日上午9：00 ～ 11：00。運輸前一天對新西蘭兔進行耳中動脈采集血液標(biāo)本供檢測，運輸過程禁食禁水，運輸密度約為4只/m2，運輸過程中采用自動溫濕度記錄儀記錄在行車過程中車內(nèi)的溫濕度變化。在運輸結(jié)束后0、24、48、72、96 h分別進行血液標(biāo)本采集以供檢測。

1.3 試劑

生化試劑：甘油三酯(TG)試劑盒，批號：20150112；總膽固醇(COHL)試劑盒，批號：20150622；葡萄糖(GLU)試劑盒，批號：20150512；白蛋白(ALB)試劑盒，批號：20150322；總蛋白(TP)試劑盒，批號：20150622；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒，批號：20150722；天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒，批號：20150512；肌酸激酶(CK)試劑盒，批號：20150722；尿素氮(UREA)試劑盒，批號：20150622；肌酐(CREA)試劑盒，批號：20150622；尿酸(UA)試劑盒，批號：20150422；α-淀粉酶(AMYL)測定試劑盒，批號：20150412；超敏感C-反應(yīng)蛋白(CRP)定量測定試劑盒，批號：20150612，均購自廣州瑞宇生物科技有限公司。

血常規(guī)試劑：稀釋液，批號：D15042301；溶血劑，批號：L14102301；清洗液，批號：C15050401；濃縮清洗液，批號：C15020301，均購自廣州市貝立醫(yī)學(xué)科技有限公司。

1.4 主要儀器設(shè)備

7060全自動生化分析儀(日本Hitachi公司生產(chǎn))；VetABC全自動血液分析儀(法國ABX公司生產(chǎn))；LGR-WSD20自動溫濕度記錄儀(杭州路格科技有限公司生產(chǎn))。

1.5 血液標(biāo)本的采集和檢測

將新西蘭兔固定后用一次性使用靜脈采血針(規(guī)格0.7 × 18 TW)從耳中動脈采血5 mL，其中4 mL注入普通真空采血管，靜置30 min，4 000 r/min離心10 min，收集血清檢測血液生化指標(biāo)：ALT、AST、ALB、TP、UREA、CREA、UA、TG、COHL、GLU、CRP、AMYL、CK。另1 mL注入EDTA-K2抗凝管中檢測血液常規(guī)指標(biāo)：WBC、RBC、HGB、HCT、MCV、MCH、MCHC、PLT。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計處理，統(tǒng)計結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果

2.1 運輸過程中車內(nèi)環(huán)境溫度及濕度變化

在運輸過程中利用溫濕度儀記錄車內(nèi)溫濕度變化，并以曲線圖記錄下來。由圖1和圖2可見，在行車過程中車內(nèi)溫度保持在27℃左右，濕度保持在60%左右。

圖1 運輸過程中車內(nèi)溫度變化Fig.1 Temperature changes in the car during transport

2.2 公路運輸對新西蘭兔血液常規(guī)的影響

從表1可知，與運輸前比較，WBC在運輸結(jié)束0 h時極顯著升高(P< 0.01)，24 h顯著升高(P< 0.05)，在運輸結(jié)束48 h至96 h無顯著差異；RBC在運輸結(jié)束0、24 h有所降低，但差異不顯著，在運輸結(jié)束48、72 h時則顯著降低(P< 0.05)，運輸結(jié)束96 h基本回到運輸前水平；HGB在運輸結(jié)束0 h時差異不顯著，運輸結(jié)束24 h顯著降低(P< 0.05)，運輸結(jié)束48 h極顯著降低(P< 0.01)，運輸結(jié)束72、96 h時基本又回到運輸前水平；HCT、PLT均在運輸結(jié)束后呈降低趨勢，在48 h時有顯著性差異(P< 0.01)，在運輸結(jié)束96 h則基本回到運輸前水平；MCV僅在運輸后96 h時升高(P< 0.05)，其余時間點與運輸前基本持平；MCH、MCHC在運輸結(jié)束后各時間點差異均不顯著。

2.3 公路運輸對新西蘭兔肝功能指標(biāo)的影響

由表2可知，與運輸前比較：TP在運輸結(jié)束0 h有降低趨勢，但差異不明顯，運輸結(jié)束24、48 h時明顯降低(P< 0.05)，至運輸結(jié)束72、96 h時基本恢復(fù)至運輸前水平；ALB在運輸結(jié)束0 h至72 h時顯著降低(P< 0.05或P< 0.01)，在運輸結(jié)束96 h時則無顯著差異；ALT在運輸結(jié)束0 h時顯著性升高(P< 0.01)，之后降低，至96 h時基本降至運輸前水平；AST在運輸結(jié)束0、24 h時均顯著性升高(P< 0.01)，至運輸結(jié)束48、72、96 h均回到運輸前水平。

圖2 運輸過程中車內(nèi)濕度變化Fig.2 Humidity changes in the car during transport

表1 血常規(guī)檢測結(jié)果Tab.1 Changes in hematological parameters during the transport

注：與運輸前比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note.*P< 0.05,**P< 0.01, compared with that before transport.

2.4 公路運輸對新西蘭兔腎功能指標(biāo)的影響

由表3可知，與運輸前比較，BUN在運輸結(jié)束0 h時顯著升高(P< 0.05)，而在運輸結(jié)束24 h時則顯著性降低(P< 0.01)，之后回升，至運輸結(jié)束48、72、96 h時無明顯差異；CREA在運輸結(jié)束0、24 h時顯著性降低(P< 0.01)，至運輸結(jié)束48、72、96 h時基本恢復(fù)至運輸前水平。UA則在運輸前后無顯著差異。

2.5 公路運輸對新西蘭兔糖代謝和脂代謝指標(biāo)的影響

由表4可知，與運輸前比較，GLU在運輸結(jié)束0 h有降低趨勢，差異不顯著，在運輸結(jié)束24 h時極顯著降低(P< 0.01)，在運輸結(jié)束48 h時則升高，之后運輸結(jié)束48、96 h時均略高于運輸前，但均無顯著差異；TG在運輸結(jié)束0、24、48 h時極顯著降低(P< 0.01)，至運輸結(jié)束72、96 h時基本恢復(fù)至運輸前水平。CHOL在運輸前后無顯著差異。

2.6 公路運輸對血清酶和CRP的影響

由表5可見，與運輸前比較，CK、CRP及AMYL在運輸前后差異無顯著性。

表2 肝功能檢測結(jié)果Tab.2 Results of liver function test

注：與運輸前比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note.*P< 0.05,**P< 0.01, compared with that before transport.

表3 腎功能檢測結(jié)果±s)Tab.3 Results of renal function test

注：與運輸前比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note.*P< 0.05,**P< 0.01, compared with that before transport.

表4 糖代謝、脂代謝檢測結(jié)果±s)Tab.4 Results of glycometabolism and lipid metabolism test

注：與運輸前比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note.*P< 0.05,**P< 0.01, compared with that before transport.

表5 血清酶、CRP檢測結(jié)果Tab.5 Results of serum enzyme and CRP test

注：與運輸前比較，*P< 0.05，**P< 0.01。

Note.*P< 0.05,**P< 0.01, compared with that before transport.

3 討論

動物在運輸應(yīng)激狀態(tài)下，體內(nèi)生理及生化代謝會發(fā)生一系列變化，反應(yīng)在血液常規(guī)及生化指標(biāo)上，如造成皮質(zhì)醇、皮質(zhì)酮、加壓素、甲狀腺激素、若干轉(zhuǎn)氨酶、脫氫酶、肌酸磷酸激酶各種酶和激素的異常[4]，而運輸過程中的各種不利的環(huán)境因素會導(dǎo)致實驗動物血糖、尿素以及血液指標(biāo)的變化。但是從前人研究結(jié)果來看有不一致，此次實驗一月份在廣州進行，彼時廣州地區(qū)氣候比同時期國內(nèi)多數(shù)省份舒適，這可能也是影響實驗結(jié)果的重要因素。

動物的生理指標(biāo)是判斷健康動物狀態(tài)和選擇合格動物的標(biāo)準(zhǔn)，也是病理學(xué)、毒理學(xué)研究的重要參考值[5]，本實驗通過檢測運輸前后血液常規(guī)、轉(zhuǎn)氨酶、血清總蛋白、白蛋白、肌酐、尿素氮、尿酸等肝腎功能指標(biāo)和血糖、膽固醇、甘油三酯等代謝指標(biāo)以及肌酸激酶、α-淀粉酶，C-反應(yīng)蛋白等最常用最有意義的指標(biāo)[6]，以期初步反應(yīng)動物應(yīng)激之后的機體狀態(tài)和受損情況。

3.1 公路運輸對新西蘭兔血液常規(guī)的影響

血液是維持生命的重要組成部分，血液中白細胞系具有保護機體的重要作用[7]，白細胞數(shù)量的變化與機體的免疫功能有關(guān)，其數(shù)量多少決定其免疫能力的高低[8]，紅細胞參與氧氣和二氧化碳的運輸，血小板則具有止血功能，可見其組成成分改變往往提示機體處于非健康狀態(tài)。但關(guān)于實驗動物在運輸應(yīng)激前后血常規(guī)的變化有較大爭議，鄧紅雨[9]研究報道在運輸前后牛血液WBC、RBC、HGB、HCT均無明顯差異，王鑫蕾等[10]報道比格犬WBC、RBC、HGB、HCT在運輸后適應(yīng)性飼養(yǎng)前極顯著高于適應(yīng)性后，湯繼順等[11]報道運輸后WBC、RBC、HGB、HCT和MCH的數(shù)值比運輸前顯著增加。韓瑾瑾等[12]報道，與運輸前比較，運輸后WBC升高但差異不顯著，RBC、HGB降低但差異也不顯著。

本實驗研究結(jié)果表明，新西蘭兔在運輸結(jié)束后WBC顯著升高，與湯繼順[11]報道一致，說明在運輸應(yīng)激后，新西蘭兔機體啟動了免疫機制以抵抗不利的外界環(huán)境。而RBC、HGB、HCT、PLT則顯著降低，至運輸結(jié)束96 h時基本恢復(fù)至運輸前水平，與鄧紅雨[9]、湯繼順[11]的報道不一致，與王鑫蕾[10]的報道一致。這可能是在運輸過程造成了動物短暫的營養(yǎng)不良、水分不足等，或者在運輸條件下動物過度煩躁或興奮等影響新西蘭兔的消化吸收功能，這些使得新西蘭兔運輸過程中丟失水分過多、貧血而致。在運輸結(jié)束適應(yīng)性飼養(yǎng)后，消化功能恢復(fù)，營養(yǎng)得到補充，上述指標(biāo)均基本恢復(fù)到運輸前。本實驗結(jié)果中MCV在運輸結(jié)束96 h時顯著升高，運輸結(jié)束0 h至72 h均無顯著變化，鄧紅雨[9]報道禁食長途運輸可致動物脫水，引起MCV升高，MCV是HCT與RBC的比值結(jié)果，在96 h時其余指標(biāo)均正常，單獨MCV升高沒有確切的臨床意義[13]。

3.2 公路運輸對新西蘭兔生化指標(biāo)的影響

肝臟是體內(nèi)合成蛋白的重要器官，其功能指標(biāo)有總蛋白、白蛋白、轉(zhuǎn)氨酶等[14]。據(jù)報道，運輸應(yīng)激會使血清中ALT、AST升高[9,12,15]，TP、ALB變化差異不顯著[15]。本實驗結(jié)果表明，運輸結(jié)束后，ALT、AST均顯著升高，TP、ALB顯著降低，與鄧紅雨[9]報道一致。實驗結(jié)果中肝功能各項指標(biāo)均在運輸結(jié)束96 h時與運輸前無顯著差異，說明運輸引起的劇烈運動、過于勞累導(dǎo)致肝臟有一定程度受損而使其合成蛋白功能下降以及血清中ALT、AST 濃度升高[16]，而不是由于肝臟感染炎癥而引起[9]。同時白蛋白與總蛋白含量降低可能是因為在運輸過程中營養(yǎng)攝入不足，機體蛋白質(zhì)分解代謝加強。AST升高也可能是由于肌肉疲勞、肌細胞受損引起[9]，但本實驗結(jié)果中CK在運輸前后無顯著差異，因此不能證明新西蘭兔在2 h短途運輸過程中有肌細胞損傷。

腎臟是重要的排泄器官，能調(diào)節(jié)機體內(nèi)水電平衡、酸堿平衡[17]。肌酐、尿素氮和尿酸是臨床常見的腎功能檢測指標(biāo)，在一定程度上反應(yīng)腎小球濾過功能[18]。本實驗結(jié)果表明，BUN在運輸結(jié)束后0 h時顯著高于運輸前，在運輸結(jié)束24 h時則顯著低于運輸前，運輸結(jié)束48 h及以后則與運輸前無顯著差異，CREA在運輸結(jié)束后顯著降低，UA在運輸結(jié)束后無明顯變化。關(guān)于運輸前后BUN變化的報道頗有爭議，王鑫蕾[10]報道比格犬BUN在運輸后適應(yīng)性飼養(yǎng)前低于適應(yīng)性飼養(yǎng)后，CREA則高于適應(yīng)性飼養(yǎng)后，韓瑾瑾[12]報道BUN在運輸后極顯著降低，盧春蓮[15]報道，運輸后BUN有一定程度升高，但差異不顯著，湯繼順[11]報道運輸后BUN顯著升高，本實驗中BUN先升高后降低但CREA降低，不能證明新西蘭兔在本實驗運輸過程中腎功能受損，可能是運輸過程中蛋白質(zhì)分解增加導(dǎo)致運輸結(jié)束0 h時BUN升高，運輸結(jié)束后蛋白質(zhì)又補充不足則致運輸結(jié)束24 h時BUN下降，而CREA短暫降低可能是由于運輸過程中營養(yǎng)攝入不足、肌肉營養(yǎng)不良所致。

血糖和甘油三酯是反應(yīng)機體能量代謝的生化指標(biāo)，糖類是機體能量的重要來源或直接來源[19]，脂類是體內(nèi)的供能和儲能物質(zhì)[20]，已有文獻中對GLU和TG在運輸前后變化報道不一[9，10,21，22]，可能與動物的種類和對能量的需求與消耗基礎(chǔ)不同有關(guān)，本實驗結(jié)果中GLU和TG均在運輸后顯著降低，提示新西蘭兔在運輸應(yīng)激時能量消耗增加，對能量的需求也增加。

CK主要存在于骨骼肌、心肌等組織細胞中，其活性變化可以判斷組織在應(yīng)激使是否受損[23]。CRP是肝臟合成的急性期蛋白，主要與炎癥和損傷有關(guān)[24]。AMYL是唾液與胰腺分泌的消化淀粉及多糖的消化酶，臨床多用于輔助診斷消化性疾病。本實驗結(jié)果中CK、CRP、AMYL在運輸前后均無顯著變化，不能說明新西蘭兔在此實驗運輸過程中有組織損傷。

綜上所述，運輸應(yīng)激對新西蘭兔血液常規(guī)及生化指標(biāo)均有一定影響，本次實驗結(jié)果表明在運輸過程中各種不利因素導(dǎo)致的指標(biāo)變化除MCV以外，均在96 h時恢復(fù)至與運輸前無顯著差異。

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Effects of road transport on hematological and biochemical parameters innew zealand rabbits

YU Chuan-xin1， GAO Xiu-xiu1， WAN Zi-cheng1, LIANG Wang1, 3， WANG Xiao2*

(1.Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510405, China； 2.Laboratory Animal Center,Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou 510405； 3.Acupuncture Division, MeizhouSecond Chinese Medicine Hospital, Meizhou 514011)

Objective To observe the effects of road transport on hematological and biochemical parameters in New Zealand rabbits. Methods A total of 12 healthy New Zealand rabbits were selected for 2 h road transport. Blood samples were collected at 0, 24, 48, 72 and 96 h after transport, respectively. White blood cells (WBC), red blood cells (RBC), hemoglobin (HGB), hematocrit (MCV), mean erythrocyte hemoglobin content (MCH), mean erythrocyte hemoglobin concentration (MCHC) and platelets (PLT) were measured using a blood analyzer. Blood alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), albumin (ALB), total protein (TP), urea nitrogen (UREA), creatinine, uric acid (UA), triglycerides (TG), total cholesterol (COHL), glucose (GLU), hypersensitive C-reactive protein (CRP), α-amylase (AMYL), and creatine kinase (CK) were detected by an automatic biochemical analyzer. Results Compared the parameters before and after transport, The WBC count was increased first (P< 0.05 orP< 0.01) and then decreased after transport, the levels of RBC, HGB, HCT and PLT were decreased first (P< 0.05 orP< 0.01) and then increased after transport, and MCV was significantly high at 96 h after transport (P< 0.05). Among the clinical biochemical parameters, ALT, AST and BUN were firstly elevated (P< 0.05 orP< 0.01) and then decreased. TP, ALB as well as CREA and TG were firstly decreased (P< 0.05 orP< 0.01) and then increased. GLU was significantly low at 24 h after transport (P< 0.05). All parameters except MCV at 96 h after transport were not significantly different from those before transport. Conclusions Changes of blood routine, liver and kidney function indexes, lipid metabolism indexes, glucose metabolism index and creatine kinase index are observed in the New Zealand rabbits after 2-hour road transportation, and all the indicators except MCV return to pre-transport levels within 96 h.

Road transport; New zealand rabbits; Blood routine parameters; Clinical biochemical parameters

廣東省科技廳科技計劃項目(2015A030302073)；廣東省科技廳科技計劃項目(2013B040200033)。

余傳辛(1991-)，女，碩士研究生在讀。Email: 1149102050@qq.com

王蕭(1972-)，男，博士，研究員。Email: xwang72@gzucm.edu.cn

研究報告

R-33

A

1671-7856(2017) 07-0053-06

10.3969.j.issn.1671-7856. 2017.07.010

2017-01-13