湯雅利 李竹月 鄂晶晶 周偉碩 辛樹(shù)權(quán)

（長(zhǎng)春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130032）

一個(gè)野生油蘑菌株的培養(yǎng)基配方研究

湯雅利 李竹月 鄂晶晶 周偉碩 辛樹(shù)權(quán)*

（長(zhǎng)春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130032）

對(duì)吉林長(zhǎng)嶺地區(qū)采集的一個(gè)野生油蘑標(biāo)本進(jìn)行組織分離，比較其試管菌種在不同配方的固體和液體培養(yǎng)基上的菌絲生長(zhǎng)情況。結(jié)果表明，PDA+玉米粉配方的固體培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基為最適合油蘑菌絲生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。

油蘑；組織分離；培養(yǎng)基配方； 菌絲生長(zhǎng)

油蘑（Agaricus campestris）屬于傘菌目、白蘑科、口蘑屬，其顏色外棕內(nèi)黃，因菌蓋表面附有油膜而得名。油蘑口感滑嫩，香氣濃郁，風(fēng)味獨(dú)特，具有很高的食用價(jià)值。野生油蘑發(fā)生于秋季室外溫度18～5 ℃左右，5～10年生的楊樹(shù)林下，喜砂質(zhì)土壤。由于長(zhǎng)期過(guò)度采摘和生態(tài)環(huán)境的不斷惡化，許多地區(qū)的野生油蘑資源日漸減少。有效保護(hù)和合理開(kāi)發(fā)野生油蘑資源，實(shí)現(xiàn)野生油蘑的人工栽培是現(xiàn)階段待解決的問(wèn)題。

人工馴化和母種分離是食用菌栽培生產(chǎn)的前提[1～6]?，F(xiàn)今我國(guó)對(duì)野生油蘑的馴化研究較少，本文為組織分離野生油蘑菌種，并采用不同培養(yǎng)基配方進(jìn)行培養(yǎng)馴化的結(jié)果。

1 材料與方法

母種固體培養(yǎng)基設(shè)5個(gè)配方，不加瓊脂即為相應(yīng)的液體培養(yǎng)基。

A. PDA培養(yǎng)基。馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，自來(lái)水1 000 mL，pH自然。馬鈴薯去皮切成1 cm小塊，稱取200 g煮至八分熟，4層紗布過(guò)濾取濾液，先后加入葡萄糖和瓊脂，加熱至完全溶解后，加水定容至1 000 mL，備用。

B. 麩皮浸出液培養(yǎng)基。麩皮50 g+1 000 mL水煮沸30分鐘4層紗布過(guò)濾后，向?yàn)V液中加入20 g瓊脂，待瓊脂溶解后定容至1 000 mL備用。

C. 玉米粉培養(yǎng)基。玉米粉200～300 g，瓊脂20 g，蒸餾水1 000 mL。將玉米粉加入蒸餾水中，攪勻，文火煮沸1 h，4層紗布過(guò)濾，加瓊脂后加熱溶解，補(bǔ)足水量至1 000 mL，備用。

D. PDA+玉米粉培養(yǎng)基。將以上A和C培養(yǎng)基按1︰1配比混合，備用。

E. PDA+麥麩汁浸出液培養(yǎng)基。將以上A和B培養(yǎng)基按1︰1配比混合，備用。

1.2 儀器設(shè)備

目前，電視媒體與新媒體的融合方式最多的是電子版報(bào)紙、開(kāi)設(shè)官方微信、運(yùn)用二維碼等。這些僅僅是將二者進(jìn)行了簡(jiǎn)單的疊加，并沒(méi)有實(shí)現(xiàn)真正意義上的融合，沒(méi)有將媒介資源、生產(chǎn)要素進(jìn)行有機(jī)的整合。這種簡(jiǎn)單、表面上的疊加并沒(méi)有發(fā)揮其真正的效用，沒(méi)有形成統(tǒng)一的體系機(jī)制。

超凈工作臺(tái)，培養(yǎng)箱，高壓滅菌鍋，電爐，酒精燈，接菌鉤，解剖刀等。

1.3 試驗(yàn)方法

（1）菌種分離。野生油蘑采集自吉林省長(zhǎng)嶺縣三十號(hào)鄉(xiāng)五撮村。將前1天采集的油蘑置于超凈化臺(tái)上，用75%酒精棉球擦拭表面消毒，于紫外線燈下照射20 min后，進(jìn)行分離操作。于菌蓋與菌柄接觸處，用解剖刀和鑷子夾取綠豆粒大小組織塊，分別接種于集中PDA加富培養(yǎng)基中，在25 ℃下黑暗培養(yǎng)，每天觀察菌絲萌發(fā)情況。

（2）固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)基用1.8×20（cm）的玻璃試管分裝，裝液高度為試管長(zhǎng)度的2/5，經(jīng)高壓滅菌鍋滅菌30 min后擺斜面。斜面長(zhǎng)度為試管長(zhǎng)度的3/4。挑取分離得到的試管菌種約綠豆大小接種于5種固體斜面培養(yǎng)基表面。每配方5個(gè)重復(fù)。

（3）液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。將配好的液體培養(yǎng)基分裝于50 mL小三角瓶，每瓶20 mL，經(jīng)高壓滅菌，冷卻后接入活化的斜面培養(yǎng)基的菌絲塊。每配方5個(gè)重復(fù)。

（3）測(cè)定方法。用直尺直接測(cè)量斜面上菌絲生長(zhǎng)長(zhǎng)度。液體培養(yǎng)基中通過(guò)采用真空泵和抽濾瓶抽濾菌絲發(fā)酵培養(yǎng)物，用蒸餾水沖洗多次后收集濕菌絲，置于60 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中烘干至恒重后稱重，得菌絲體生物量干重。

（4）數(shù)據(jù)處理。用Excel2003數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌種的分離情況

菌蓋與菌柄交接處為組織分離最易成活且生長(zhǎng)速度最快部位[7]。本實(shí)驗(yàn)共分離15個(gè)油蘑組織塊接種于PDA加富培養(yǎng)基中，結(jié)果成活5個(gè)，污染8個(gè)，未萌發(fā)2個(gè)，成活率為33.3%。萌發(fā)的菌絲潔白、濃密，氣生菌絲數(shù)量中等。污染和未萌發(fā)可能是因操作過(guò)程滅菌不徹底等原因造成，如菇表面消毒不徹底，接種工具等消毒不干凈或過(guò)熱等。

2.2 菌絲在斜面培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況

接種后第4天開(kāi)始，每隔3天觀察測(cè)量1次菌絲生長(zhǎng)面的長(zhǎng)度（表1），計(jì)算菌絲日均長(zhǎng)速。結(jié)果為，配方D（玉米粉+PDA培養(yǎng)基）菌絲粗壯、濃密，雖前期發(fā)菌慢，但日均長(zhǎng)速快，達(dá)0.72 cm，為理想配方；配方A（PDA培養(yǎng)基）菌絲長(zhǎng)速居次，前期發(fā)菌快，但菌絲稀疏；配方B（麩皮浸出液培養(yǎng)基）和配方C（玉米粉培養(yǎng)基）菌絲生長(zhǎng)較慢且濃密度不高；配方E（PDA+麩皮培養(yǎng)基）菌絲濃密，但菌絲生長(zhǎng)過(guò)慢，并呈波紋狀，氣生菌絲旺盛，不是理想配方（表1）。

表1 菌絲在斜面培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況

2.3 菌絲在液體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況

在接種量一致的情況下，菌絲的產(chǎn)量代表了菌絲對(duì)不同液體培養(yǎng)基的適應(yīng)能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，油蘑菌在5種液體培養(yǎng)基中均可生長(zhǎng)，其中，以配方D（PDA+玉米粉）產(chǎn)生的菌絲量最大，濕重和干重分別為1.5 g和0.360 g，是對(duì)照的3.9倍和1.9倍。其次為配方C，是對(duì)照的2.9倍和1.6倍。以下依次為配方E和配方B（表2）。

表2 菌絲在液體培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況

實(shí)驗(yàn)中含有玉米粉的培養(yǎng)基菌絲量較多，這與玉米粉含糖量高，增加了培養(yǎng)基中的碳源含量密不可分。說(shuō)明油蘑菌絲生長(zhǎng)對(duì)碳源的需求量大，這是選擇油蘑菌栽培配方的重要依據(jù)。

3 結(jié) 論

實(shí)驗(yàn)表明，油蘑菌絲可以在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，其中以玉米粉+PDA配方的培養(yǎng)基菌絲生長(zhǎng)較好；而PDA+麩皮配方較差，后期菌絲基本不生長(zhǎng)。本實(shí)驗(yàn)表明油蘑培養(yǎng)基與松茸等一樣需要碳源的加富[9]。

液體培養(yǎng)還顯示，玉米粉+PDA配方液體培養(yǎng)基油蘑的菌絲生長(zhǎng)量最大，菌球均勻、菌絲粗壯，經(jīng)7天培養(yǎng)達(dá)到最佳狀態(tài)，菌球充滿培養(yǎng)基。

綜上得出，PDA+玉米粉培養(yǎng)基配方為本實(shí)驗(yàn)中的油蘑菌絲培養(yǎng)最佳配方。

[1] 鄧百萬(wàn), 陳文強(qiáng). 美味牛肝菌母種培養(yǎng)基的篩選[J]. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2004, 33(3): 396-399.

[2] 宮志遠(yuǎn), 于淑芳, 曲玲. 阿魏側(cè)耳菌絲生長(zhǎng)對(duì)碳、氮營(yíng)養(yǎng)需求的研究[J]. 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2002,33(4): 418-421.

[3] 胡欣, 姚方杰, 張友民. 珊瑚猴頭母種培育條件對(duì)菌株生長(zhǎng)發(fā)育影響研究[J]. 食藥用菌, 2016, 24(3): 170-172.

[4] 田景花, 李明, 王俊玲, 等. 杏鮑菇菌種培養(yǎng)基配方篩選研究[J]. 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2004, 27(2): 25-28 .

[5] 楊民和, 楊新美, 陳立國(guó). 松茸的營(yíng)養(yǎng)生理及培養(yǎng)基的篩選[J]. 菌物系統(tǒng), 2000, 19(1): 272-277.

[6] 陳友, 胡佳娟, 陳勇敢. 海南尖峰嶺野生靈芝培養(yǎng)基配方篩選[J]. 食藥用菌, 2013, 21(3): 176-179.

[7] 高小朋, 賀曉龍, 任桂梅, 等. 茶樹(shù)菇組織分離母種及培養(yǎng)基的篩選[J]. 北方園藝, 2011(10): 148-151.

[8] 荊瑞勇, 王麗艷, 毛玉梅. 黑木耳液體培養(yǎng)基篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 食用菌, 2008(6): 13-14.

[9] 曹張軍, 張興群, 呂小鷹, 等. 一個(gè)適合松茸菌絲生長(zhǎng)的加富培養(yǎng)基[J]. 食用菌學(xué)報(bào), 2007, 14(3): 41-43.

第十一屆全國(guó)食用菌學(xué)術(shù)研討會(huì)、2017中國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)年會(huì)暨第四屆中國(guó)食用菌博覽會(huì)在太原召開(kāi)

2017年6月23日，由中國(guó)菌物學(xué)會(huì)主辦、山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所、山西農(nóng)業(yè)大學(xué)、山西大學(xué)、易菇網(wǎng)承辦的第十一屆全國(guó)食用菌學(xué)術(shù)研討會(huì)、2017中國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)年會(huì)暨第四屆中國(guó)食用菌博覽會(huì)在山西太原召開(kāi)。

本次會(huì)議有來(lái)自全國(guó)200多個(gè)科研院所、大專院校、企事業(yè)單位、行業(yè)協(xié)會(huì)等400余名代表參加。大會(huì)共進(jìn)行了63場(chǎng)主題報(bào)告，內(nèi)容包括食用菌基礎(chǔ)科學(xué)及生物技術(shù)、食用菌遺傳與育種、食用菌栽培技術(shù)及病蟲(chóng)害防控等。期間，中國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)年會(huì)設(shè)置藥用真菌與開(kāi)發(fā)研討會(huì)、珍稀食用菌發(fā)展研討會(huì)和中國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇等多項(xiàng)活動(dòng)。

同期舉行的“2017 中國(guó)食用菌產(chǎn)業(yè)年會(huì)暨第四屆中國(guó)食用菌博覽會(huì)”，有50余家食用菌企業(yè)帶來(lái)了數(shù)百種食用菌原輔材料、機(jī)械設(shè)備、消殺藥品及數(shù)千種食用菌初級(jí)和精深加工產(chǎn)品。

6月25日，與會(huì)專家、學(xué)者、行業(yè)代表前往位于山西省朔州市山陰縣的山西宇昊蘑菇種植有限公司進(jìn)行參觀訪問(wèn)。該公司是一家煤炭企業(yè)轉(zhuǎn)型的現(xiàn)代農(nóng)業(yè)企業(yè)，成立于2012年。占地1 000畝，總投資5.5億元，日產(chǎn)雙孢蘑菇30多噸，產(chǎn)品銷往全國(guó)各大城市，2015年被山西省授予“省級(jí)龍頭企業(yè)”榮譽(yù)稱號(hào)。

（資料由《易菇網(wǎng)》提供）

S646

碼：A

：2095-0934（2017）04-246-03

2016吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃

湯亞莉（1995—），女，長(zhǎng)春師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院食用菌栽培專業(yè)學(xué)生。E-mail：1829312301@qq.com

*通訊作者：辛樹(shù)權(quán)（1970—），男，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，從事食用菌栽培與微生物學(xué)教學(xué)與研究。E-mail：253154968@qq.com