紀(jì)雯婷 潘利葉 劉 敏 范盎然 于 雪 胡京紅

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

小青龍湯對(duì)單純型和復(fù)合型變應(yīng)性鼻炎豚鼠模型Th1/Th2失衡的影響

紀(jì)雯婷 潘利葉 劉 敏 范盎然 于 雪 胡京紅

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京，100029)

目的：建立單純型和腎陽(yáng)虛復(fù)合型2種不同變應(yīng)性鼻炎模型，探討小青龍湯對(duì)2種變應(yīng)性鼻炎模型Th1/Th2失衡作用的異同。方法：將105只雄性豚鼠隨機(jī)分7組，每組15只：空白對(duì)照組(A組)，單純模型對(duì)照組(B1組)，小青龍湯干預(yù)單純模型組(B2組)，息斯敏干預(yù)單純模型組(B3組)，腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)，小青龍湯干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C2組)，息斯敏干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C3組)。B1、B2、B3組進(jìn)行單純變應(yīng)性鼻炎造模；C1、C2、C3組在單純變應(yīng)性鼻炎的模型上進(jìn)行腎陽(yáng)虛復(fù)合模型造模。造模成功后，模型組進(jìn)行用藥觀察，記錄各組局部過(guò)敏反應(yīng)；ELISA法(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法)檢測(cè)血清中IFN-γ、IL-4、IL-2和IL-10等細(xì)胞因子含量；熒光定量PCR法測(cè)脾組織中IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA、T-bet mRNA、GATA-3 mRNA等轉(zhuǎn)錄因子的相對(duì)含量。結(jié)果：變應(yīng)性鼻炎單純模型和腎陽(yáng)虛復(fù)合模型均出現(xiàn)IFN-γ降低(P<0.01)，IL-4升高(P<0.01)，IFN-γ/IL-4比值降低(P<0.01)，IFN-γ mRNA降低(P<0.01)，IL-4 mRNA升高(P<0.01)，IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值降低(P<0.01),T-bet mRNA降低(P<0.01)，但可使GATA-3 mRNA升高(P<0.01)，因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相對(duì)降低(P<0.01)。小青龍湯可使單純模型IFN-γ升高(P<0.01)，IL-4降低(P<0.01)，IFN-γ/IL-4比值升高(P<0.01)；升高IFN-γ mRNA(P<0.01)，降低IL-4 mRNA(P<0.01)，使IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值升高(P<0.01)；使T-bet mRNA升高(P<0.01)，但可使GATA-3 mRNA降低(P<0.01)，從而使T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相對(duì)升高(P<0.01)。小青龍湯可降低腎陽(yáng)虛復(fù)合模型中IL-4的含量(P<0.01)，對(duì)IFN-γ作用不明顯，升高IFN-γ/IL-4比值(P<0.01)；可使IFN-γ mRNA升高(P<0.01)，但對(duì)IL-4 mRNA變化不大，IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值升高(P<0.01)；對(duì)T-bet mRNA作用不明顯，但可使GATA-3 mRNA降低(P<0.05)，因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值也相對(duì)升高(P<0.01)。結(jié)論：小青龍通過(guò)調(diào)節(jié)IFN-γ/IL-4比值、IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值和T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值，來(lái)調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡，對(duì)單純變應(yīng)性鼻炎模型的過(guò)敏反應(yīng)的改善更為明顯。

小青龍湯;Th1/Th2;變應(yīng)性鼻炎

變應(yīng)性鼻炎(Allergic Rhinitis，AR)全球發(fā)病近年來(lái)呈現(xiàn)急劇上升的趨勢(shì)，臨床主要表現(xiàn)為鼻癢、噴嚏、流涕、遇寒而犯等癥。中醫(yī)學(xué)者在面對(duì)人類(lèi)疾病時(shí)，進(jìn)行臨床辨治的入手與著眼點(diǎn)是證候，而不僅僅是疾病，這是中醫(yī)學(xué)與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不同之處，是中醫(yī)學(xué)的特色，更是其優(yōu)勢(shì)。根據(jù)中醫(yī)理論，變應(yīng)性鼻炎的證候?qū)傩援?dāng)為腎陽(yáng)虛損、外受風(fēng)寒之證。中醫(yī)認(rèn)為其屬于“鼻鼽”范疇，小青龍湯外散寒邪、內(nèi)化水飲，為臨床干預(yù)變應(yīng)性鼻的常用方和代表方[1-3]。在實(shí)驗(yàn)室研究中，我們一方面要挖掘闡明小青龍湯發(fā)揮抗過(guò)敏效應(yīng)治療過(guò)敏性鼻炎的藥理機(jī)制與作用靶點(diǎn)，另一方面，觀察評(píng)價(jià)本方療效是否對(duì)證型具有選擇性亦具有十分重要的意義。本研究擬通過(guò)觀察該方對(duì)單純型和腎陽(yáng)虛復(fù)合型2種變應(yīng)性鼻炎動(dòng)物模型的過(guò)敏癥狀和調(diào)節(jié)Th1/Th2平衡的影響，評(píng)價(jià)該方對(duì)不同模型組的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 選用3～4月齡SPF級(jí)雄性豚鼠105只，體重300～350 g，購(gòu)于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

1.1.2 試劑 卵清蛋白(OVA)，購(gòu)自Sigma-Aldrich(上海)貿(mào)易有限公司(貨號(hào)A5503)；氫氧化鋁佐劑，40 mg/mL，購(gòu)自北京百諾威生物科技有限公司(貨號(hào)PI77161)；羥基脲片，由山西遠(yuǎn)景康業(yè)制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)20140101)；中藥飲片，購(gòu)自北京中醫(yī)藥大學(xué)國(guó)醫(yī)堂；IFN-藥ELISA試劑盒(SEA033Gu)、IL-4ELISA試劑盒(SEA077Gu)購(gòu)于武漢優(yōu)而生商貿(mào)有限公司，RNA快速提取試劑盒(74104)購(gòu)于德國(guó)Qiagen公司，RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(K1622)購(gòu)于美國(guó)Thermo Scientific公司，引物(IFN-γ mRNA，IL-4 mRNA，T-bet mRNA，GATA-3 mRNA)由生工生物工程(上海)股份有限公司設(shè)計(jì)及生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將105只雄性豚鼠隨機(jī)分7組，每組15只：空白對(duì)照組(A組)，單純模型對(duì)照組(B1組)，小青龍湯干預(yù)單純模型組(B2組)，息斯敏干預(yù)單純模型組(B3組)，腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)，小青龍湯干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C2組)，息斯敏干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C3組)。適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后進(jìn)行造模。

造模[4-6]與給藥：?jiǎn)渭兡Ｐ驮炷＝M(B1組、B2組、B3組):每只動(dòng)物給予卵清蛋白(OVA)0.9 mg+鋁佐劑0.3 mL混懸液，腹腔內(nèi)注射，隔日1次，共7次。腹腔注射完成后第2天，行被動(dòng)皮膚過(guò)敏試驗(yàn)(PCA)，確定OVA IgE抗體升高后，將OVA 8 mg+生理鹽水20 μL用微量加樣器滴入雙側(cè)鼻腔，每側(cè)10 μL，1次/d，共7次激發(fā)。

造模成功后，小青龍湯干預(yù)單純模型組(B2)給予藥液0.5 mL/d，息斯敏干預(yù)單純模型組(B3)給予息斯敏50 μg+0.5 mL生理鹽水。單純模型對(duì)照組(A組)則給予等量生理鹽水。每天1次灌胃給藥，共14 d。腎陽(yáng)虛復(fù)合模型造模組(C1組、C2組、C3組)：在單純模型造模的基礎(chǔ)上，同時(shí)給予羥基脲混懸液灌胃，劑量為300 mg/kg+0.5 mL生理鹽水，每天1次灌胃造模，共14 d。小青龍湯干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C2組)給予藥液0.5 mL/d，息斯敏干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C3組)給予50 μg+0.5 mL生理鹽水，腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)給予等量生理鹽水。每天1次灌胃給藥，共14 d。空白對(duì)照組(A組)：造模過(guò)程與治療過(guò)程均給予生理鹽水。

1.2.2 中藥湯劑制備 小青龍湯(成人常用量)：麻黃9 g、桂枝6 g、白芍9 g、細(xì)辛3 g、五味子3 g、干姜3 g、半夏9 g、甘草6 g。換算成豚鼠用量的2倍，按傳統(tǒng)方法煎煮，并濃縮，生藥濃度約2.51 g/mL。

1.2.3 觀察與檢測(cè) 1)動(dòng)物的一般生命體征[7]:每日觀察記錄動(dòng)物的一般外觀癥狀，如消瘦、體重下降或生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，毛松、豎毛、毛發(fā)無(wú)光澤，攝食減少，自主活動(dòng)減少，蜷縮，精神萎靡，呼吸急促等。以上癥狀出現(xiàn)四項(xiàng)為腎陽(yáng)虛模型組成功。2)過(guò)敏反應(yīng)行為學(xué)評(píng)分[8-9]:給卵清蛋白致敏后，動(dòng)物鼻部逐漸出現(xiàn)擦鼻、噴嚏、流涕等過(guò)敏癥狀，滴鼻激發(fā)后癥狀明顯增加。每次滴鼻后20 min內(nèi)，將上述行為記錄并作出評(píng)分，總分達(dá)5分者為過(guò)敏模型組成功。標(biāo)準(zhǔn)如表1。

表1 過(guò)敏反應(yīng)行為評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

將動(dòng)物麻醉后，行腹主動(dòng)脈取血，然后離心取血清，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清中IL-10、IL-2、FN-γ和IL-4等細(xì)胞因子含量。剝?nèi)∑⑴K后，進(jìn)行RNA提取、逆轉(zhuǎn)錄，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)脾組織中IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA、T-bet mRNA、GATA-3 mRNA等轉(zhuǎn)錄因子的相對(duì)含量。

2 結(jié)果

2.1 小青龍湯對(duì)2種模型過(guò)敏行為評(píng)分的影響 與空白對(duì)照組比較，單純模型組(B組)和腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C1組)的過(guò)敏行為評(píng)分明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。藥物干預(yù)后，與空白對(duì)照組比較，各組仍存在過(guò)敏行為，但小青龍湯可以使單純模型過(guò)敏評(píng)分降低(P<0.01)(B2組)，但對(duì)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型過(guò)敏評(píng)分無(wú)影響(P>0.05)(C2組)。2.2 小青龍湯對(duì)2種模型IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4的影響 與空白對(duì)照組比較，單純模型對(duì)照組(B1組)和腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)IFN-γ降低，IL-4升高，IFN-γ/IL-4比值降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

與單純模型對(duì)照組(B1組)比較：小青龍湯干預(yù)單純模型組(B2組)IFN-γ升高(P<0.01)，IL-4降低(P<0.01)，IFN-γ/IL-4的比值升高(P<0.01)；息斯敏干預(yù)單純模型組(B3)，IFN-γ升高(P<0.01)，IL-4降低(P<0.01)IFN-γ/IL-4的比值升高(P<0.01)。

與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)比較：小青龍湯干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C2組)IFN-γ無(wú)明顯變化,IL-4降低(P<0.01)，IFN-γ/IL-4比值升高(P<0.01)；息斯敏干預(yù)單純模型組(B3)，IFN-γ升高(P<0.01)，IL-4降低(P<0.01)IFN-γ/IL-4的比值升高(P<0.01)。見(jiàn)表3。

2.3 小青龍湯對(duì)2種模型IL-2與IL-10的影響 與空白組比較，其他組IL-10的含量明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；IL-2含量無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與單純模型對(duì)照組(B1組)比較，小青龍湯干預(yù)單純模型組(B2組)和息斯敏干預(yù)單純模型組(B3組)的IL-10的含量無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)比較，小青龍湯干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C2組)和息斯敏干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C3組)IL-10的含量無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表2 小青龍湯對(duì)2種模型過(guò)敏行為評(píng)分的影響±s)

注：滴鼻激發(fā)后，第5，6，7天，各組動(dòng)物的過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)較穩(wěn)定，比較3 d的平均評(píng)分；與空白對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與單純模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

表3 小青龍湯對(duì)2種模型IFN-γ、IL-4及IFN-γ/IL-4的影響

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與單純模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

表4 小青龍湯對(duì)2種模型IL-2、IL-10的影響

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01；與單純模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

2.4 小青龍湯對(duì)2種模型IFN-γ mRNA、IL-4 mRNA和IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA的影響 與空白組比較，單純模型對(duì)照組(B1組)和腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)IFN-γ mRNA降低，IL-4 mRNA升高，IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值降低，其差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

與單純模型對(duì)照組(B1組)比較，小青龍湯干預(yù)單純模型組(B2組)與息斯敏干預(yù)單純模型組(B3組)的IFN-γ mRNA均升高(P<0.01)，IL-4 mRNA均降低(P<0.01)，IFN-γ mRN/IL-4 mRNA比值均升高(P<0.01)。

與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)比較：小青龍湯干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C2組)的IFN-γ mRNA升高(P<0.01)，IL-4 mRNA變化不大，IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值升高(P<0.01)；息斯敏干預(yù)單純模型組(B3組)IFN-γ mRNA升高(P<0.01)，IL-4 mRNA降低(P<0.01)，IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值升高(P<0.01)。見(jiàn)表5。

2.5 小青龍湯對(duì)2種模型T-bet mRNA、GATA-3 mRNA和T-bet mRNA/GATA-3 mRNA的比值的影響 與空白組比較，單純模型對(duì)照組(B1組)和腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)T-bet mRNA降低，GATA-3 mRNA升高，T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

與單純模型對(duì)照組(B1組)比較，小青龍湯干預(yù)單純模型組(B2組)與息斯敏干預(yù)單純模型組(B3組)T-bet mRNA升高(P<0.01)，GATA-3 mRNA均顯著降低(B2組P<0.01)，T-bet mRNA/GATA-3 mRNA均比值升高(P<0.01)。

與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組(C1組)比較：小青龍湯干預(yù)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組(C2組)T-bet mRNA無(wú)明顯變化，GATA-3 mRNA降低(P<0.05)，T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值升高(P<0.01)；息斯敏干預(yù)單純模型組(B3)T-bet mRNA升高(P<0.01)，GATA-3 mRNA降低(P<0.01)，T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值升高(P<0.01)。見(jiàn)表6。

表5 小青龍湯對(duì)2種模型IFN-γ mRN、IL-4 mRNA及IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA的影響

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01;與單純模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

表6 小青龍湯對(duì)2種模型T-bet mRNA、GATA-3 mRNA及T-bet mRNA/ GATA-3 mRNA的影響

注：與空白對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與腎陽(yáng)虛復(fù)合模型對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01;與單純模型組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

3 討論

變應(yīng)性鼻炎以噴嚏頻發(fā)、鼻塞清涕、易受寒引發(fā)并反復(fù)發(fā)作為臨床主癥，根據(jù)中醫(yī)理論當(dāng)辨為腎陽(yáng)虛損、外受風(fēng)寒之證[10-11]。在實(shí)際臨床過(guò)程中，會(huì)由于患者個(gè)體差異或者所處病程階段不同而表現(xiàn)為陽(yáng)虛與感寒2個(gè)方面?zhèn)戎夭煌Ｐ∏帻垳鲎浴秱摗?，其功效為解表散寒、蠲化水飲。?dāng)變應(yīng)性鼻炎發(fā)作，以風(fēng)寒外束、水飲內(nèi)停為臨床主要證型時(shí)，小青龍湯是其常用經(jīng)方[12-13]。

實(shí)驗(yàn)研究中，學(xué)者常采用OVA進(jìn)行致敏誘導(dǎo)以建立變應(yīng)性鼻炎模型，該模型可以表現(xiàn)出鼻癢鼻塞、噴嚏鼻涕等癥狀。從中醫(yī)角度進(jìn)行辨識(shí)，該模型體現(xiàn)其外感風(fēng)寒的一面，但腎陽(yáng)虛的病機(jī)特點(diǎn)在OVA模型中體現(xiàn)不突出。本研究中，我們利用OVA致敏誘發(fā)建立了單純型變應(yīng)性鼻炎模型。并在此基礎(chǔ)上以羥基脲作為腎陽(yáng)虛誘導(dǎo)劑建立了腎陽(yáng)虛型變應(yīng)性鼻炎復(fù)合模型。羥基脲是一種核苷酸還原酶抑制劑，可抑制DNA的合成，并可抑制核酸代謝，使得脂肪、蛋白質(zhì)、能量代謝下降，出現(xiàn)一系列虛損的表現(xiàn)。

本研究提示，單純模型組表現(xiàn)出擦鼻、噴嚏、流涕等局部過(guò)敏癥狀，而腎陽(yáng)虛復(fù)合模型在此基礎(chǔ)上還出現(xiàn)毛發(fā)枯槁疏松、堆疊，攝食及活動(dòng)減少，蜷縮、消瘦，精神萎靡甚至呼吸急促，死亡等一系列癥狀和體征，提示腎陽(yáng)虛復(fù)合過(guò)敏模型造模成功。另外，從各組過(guò)敏評(píng)分可以看出，單純模型組鼻部過(guò)敏評(píng)分升高，而腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組過(guò)敏評(píng)分升高更為明顯，表明過(guò)敏嚴(yán)重程度與腎陽(yáng)虛之間存在相關(guān)性。2種模型動(dòng)物給予小青龍湯灌胃治療后，單純模型組的過(guò)敏癥狀可以得到明顯改善，而腎陽(yáng)虛復(fù)合模型癥狀緩解并不明顯。臨證過(guò)程中，小青龍湯適用于變應(yīng)性鼻炎外寒內(nèi)飲型而非腎陽(yáng)虛型，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與臨床實(shí)際保持一致，為變應(yīng)性鼻炎的中醫(yī)辨證論治提供了科學(xué)依據(jù)。

我們進(jìn)一步從Th1/Th2細(xì)胞的平衡偏移入手來(lái)挖掘相關(guān)現(xiàn)代藥理機(jī)制。Th1/Th2細(xì)胞的平衡偏移是一系列免疫炎性反應(yīng)的病理生理基礎(chǔ)[14-15]。在變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制中，活化的樹(shù)突狀細(xì)胞分泌IL-12與IFN-γ，促進(jìn)幼稚Th細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化，表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子T-bet，分泌大量IL-12與IFN-γ，形成正反饋。當(dāng)Th細(xì)胞被抗原激活后，IL-4誘導(dǎo)幼稚Th細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化，表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子GATA-3，分泌大量IL-4，形成正反饋[16-17]。大量的炎性反應(yīng)細(xì)胞和炎性反應(yīng)因子進(jìn)一步引發(fā)IgE合成、嗜酸性粒細(xì)胞增多、肥大細(xì)胞脫顆粒等過(guò)敏反應(yīng)的產(chǎn)生。袁穎等[18]、王守璽等[19]認(rèn)為，Th1/Th2與中醫(yī)證候虛實(shí)存在相關(guān)性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小青龍湯可使單純模型IFN-γ升高，IL-4降低，IFN-γ mRNA升高，IL-4 mRNA降低，因而IFN-γ/IL-4比值、IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值皆升高；同時(shí)，小青龍湯可以使腎陽(yáng)虛復(fù)合模型IL-4降低，對(duì)IFN-γ作用不明顯，IFN-γ/IL-4比值也升高；使IFN-γ mRNA升高，對(duì)IL-4 mRNA影響不大，最終IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA比值也升高。并且，小青龍湯還可以使單純模型T-bet mRNA升高，GATA-3 mRNA降低，因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值升高；對(duì)腎陽(yáng)虛復(fù)合模型組的T-bet mRNA作用不明顯，可使GATA-3 mRNA降低，因而T-bet mRNA/GATA-3 mRNA比值升高。

從本研究我們可以得出，一方面，Th1細(xì)胞代表性細(xì)胞因子IFN-γ，Th2細(xì)胞代表性細(xì)胞因子以及其轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA-3mRNA表達(dá)的影響應(yīng)是小青龍湯治療變應(yīng)性鼻炎發(fā)揮抗過(guò)敏效應(yīng)的重要藥理學(xué)機(jī)制；另一方面，對(duì)單純模型與復(fù)合模型2種不同模型，小青龍湯的效應(yīng)確實(shí)存在差異，顯然本方干預(yù)作用在單純模型中要優(yōu)于在腎陽(yáng)虛復(fù)合模型中，因此，而小青龍湯藥效的發(fā)揮與證型之間的相關(guān)性顯而易見(jiàn)[20-21]。這提示我們，中醫(yī)辨證論治具有一定的現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)，病機(jī)與治法對(duì)應(yīng)契合的程度直接影響藥效的發(fā)揮，藥理機(jī)制的挖掘，中醫(yī)藥臨床所強(qiáng)調(diào)的辨證論治在實(shí)驗(yàn)研究中同樣應(yīng)該受到重視。闡明解釋古典經(jīng)方治療現(xiàn)代疾病的藥理機(jī)制，同樣應(yīng)考慮到證型這一影響因素。

[1]王樹(shù)鵬,郭曉東,李海波,等.加味小青龍湯及其拆方對(duì)變應(yīng)性鼻炎大鼠鼻黏膜病理形態(tài)和IL-4含量的影響[J].環(huán)球中醫(yī)藥,2012,5(3):170-174.

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(2016-12-12收稿 責(zé)任編輯：楊覺(jué)雄)

第十四屆世界中醫(yī)藥大會(huì)暨“一帶一路”中醫(yī)藥文化周第二輪會(huì)議通知2017年10月*東南亞

各位專(zhuān)家、各位同仁：

由世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì)主辦的世界中醫(yī)藥大會(huì)是全球中醫(yī)藥領(lǐng)域規(guī)模大、參與廣、層次高的學(xué)術(shù)盛會(huì)。至今已在中國(guó)、法國(guó)、加拿大、新加坡、中國(guó)澳門(mén)、澳大利亞、荷蘭、英國(guó)、馬來(lái)西亞、美國(guó)、俄羅斯、西班牙、新西蘭成功舉辦了十三屆。第十三屆世界中醫(yī)藥大會(huì)期間舉辦“一帶一路”中醫(yī)藥文化周系列活動(dòng)，為中醫(yī)藥在大洋洲的發(fā)展搭建了廣闊的平臺(tái)。

“第十四屆世界中醫(yī)藥大會(huì)暨‘一帶一路’中醫(yī)藥文化周”，將于2017年10月下旬在東南亞舉行?；顒?dòng)期間，來(lái)自世界各地的中醫(yī)藥專(zhuān)家學(xué)者、政府官員、企業(yè)家將分享他們的理論研究和臨床經(jīng)驗(yàn)、科研成果和新發(fā)明新創(chuàng)造，大會(huì)附設(shè)中醫(yī)藥服務(wù)貿(mào)易展覽會(huì)。活動(dòng)期間將組織多種形式的學(xué)術(shù)考察調(diào)研活動(dòng)。

現(xiàn)就有關(guān)事宜通知如下：

一、地點(diǎn)：泰國(guó)、柬埔寨、尼泊爾、越南

二、主題：助力一帶一路，服務(wù)民眾健康

三、會(huì)議安排：10月20-24日，第十四屆世界中醫(yī)藥大會(huì)，泰國(guó)·曼谷；

10月23-27日，“一帶一路”中醫(yī)藥文化周柬埔寨專(zhuān)場(chǎng)，吳哥；

10月24-27日，“一帶一路”中醫(yī)藥文化周尼泊爾專(zhuān)場(chǎng)，加德滿(mǎn)都；

10月26-29日，“一帶一路”中醫(yī)藥文化周越南專(zhuān)場(chǎng)，胡志明；

四、會(huì)議主要議題及征文內(nèi)容：

1.中醫(yī)藥基礎(chǔ)理論研究；

2.中醫(yī)藥臨床實(shí)踐：臨床研究方法創(chuàng)新與進(jìn)展、臨床療效評(píng)估體系研究、老中醫(yī)臨證經(jīng)驗(yàn)總結(jié)、特色療法體會(huì)及推廣、中醫(yī)養(yǎng)生保健治未病研究等；

3.針灸推拿研究實(shí)踐：針?biāo)幣浜吓R床研究、特殊針?lè)ㄅR床經(jīng)驗(yàn)介紹、中醫(yī)針灸治療在區(qū)域性疾病治療中的特色與優(yōu)勢(shì)等；

4.中藥研究：中藥方劑學(xué)、臨床配伍研究、中藥應(yīng)用及研究等；

5.中西醫(yī)結(jié)合研究：理論創(chuàng)新、最新進(jìn)展、實(shí)踐創(chuàng)新、經(jīng)驗(yàn)總結(jié)；

6.中醫(yī)手法流派的傳承與發(fā)展；

7.中醫(yī)藥國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化、信息化研究；

8.中醫(yī)藥在世界各國(guó)的發(fā)展及立法情況，各國(guó)中醫(yī)教育動(dòng)態(tài)、教育制度現(xiàn)狀及科研情況；

9.中醫(yī)藥文化與非物質(zhì)文化遺產(chǎn)保護(hù)；

10.道地藥材與瀕危珍稀動(dòng)植物保護(hù)；

11.中醫(yī)藥服務(wù)貿(mào)易理論研究與實(shí)踐及經(jīng)驗(yàn)交流。

五、參會(huì)人員：

相關(guān)國(guó)家政府官員，各國(guó)中醫(yī)藥、傳統(tǒng)醫(yī)藥、中西醫(yī)結(jié)合、現(xiàn)代醫(yī)藥及相關(guān)領(lǐng)域從事醫(yī)療、教育、科研、管理、生產(chǎn)、貿(mào)易的專(zhuān)家學(xué)者和企業(yè)家，世界中聯(lián)各國(guó)各地區(qū)會(huì)員。

六、會(huì)議安排：

1.學(xué)術(shù)會(huì)議：開(kāi)、閉幕式，主題演講，分會(huì)場(chǎng)專(zhuān)題報(bào)告，現(xiàn)場(chǎng)演示工作坊，歡迎晚宴。

2.中醫(yī)藥服務(wù)貿(mào)易展覽會(huì)：每個(gè)展位3*3 m，1張桌子，2把座椅，1個(gè)插座，基本照明，免2人參會(huì)注冊(cè)費(fèi)。

3.參會(huì)者可授予中國(guó)國(guó)家級(jí)繼續(xù)教育二類(lèi)學(xué)分證書(shū)6分，如有需要，請(qǐng)?zhí)崆案嬷髸?huì)組委會(huì)。

4.“一帶一路”中醫(yī)藥國(guó)際交流考察：具體安排請(qǐng)咨詢(xún)世界中聯(lián)國(guó)際聯(lián)絡(luò)部。

七、重要日期：

2017年7月1日大會(huì)注冊(cè)費(fèi)優(yōu)惠截止。

2017年8月31日大會(huì)論文投稿截止。

八、會(huì)議注冊(cè)：

即日起接受報(bào)名，采用網(wǎng)上會(huì)議平臺(tái)注冊(cè)，網(wǎng)址如下：

http://wccm2017.medmeeting.org/cn

或微信掃描右側(cè)會(huì)議平臺(tái)二維碼，點(diǎn)擊“報(bào)名參會(huì)”即可。

九、會(huì)議咨詢(xún)聯(lián)系方式如下：

《世界中醫(yī)藥》雜志社：魏金明、徐暉、徐穎、王明

電子郵箱：sjzyyzz@vip.126.com，電話(huà)：010-58650236/58650023/58239055

泰國(guó)中醫(yī)師總會(huì)咨詢(xún)處(僅接受泰國(guó)、新加坡、馬來(lái)西亞、印度尼西亞、菲律賓、越南、緬甸、老撾、柬埔寨、文萊地區(qū)等東盟十國(guó)地區(qū)的參會(huì)專(zhuān)家報(bào)名)：

聯(lián)系人：張永發(fā)、楊秀專(zhuān)、賈宗亢、葉峰

電子郵箱：wctcm2017@hotmail.com，電話(huà)：+66-814350636/896641681/890739192

更多會(huì)議信息，歡迎掃描右方二維碼，關(guān)注世界中醫(yī)藥大會(huì)官方微信公眾平臺(tái)

世界中醫(yī)藥大會(huì)組委會(huì)

2017年7月12日

Different Functions of Xiaoqinglong Decoction of Regulating the Imbalance of Th1/Th2 in the Simple Type of Allergic Rhinitis Model and the Complex Type

Ji Wenting,Pan Liye,Liu Min，F(xiàn)an Angran,Yu Xue,Hu Jinghong

(BeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100029,China)

Objective:To establish the simple type of allergic rhinitis model and the complex type of kidney yang deficiency of allergic rhinitis model,and to study the different effects of Xiaoqinglong decoction on the two models of allergic rhinitis,evaluating the difference functions of correcting the imbalance of Th1/Th2.Methods:The simple type of allergic rhinitis model was induced with ovalbumin (OVA) in guinea pigs.Based on this,the complex type of kidney yang deficiency of allergic rhinitis model was established with hydroxyurea administration.Both of the two models were evaluated by observing the weight，survival state and local allergic reaction of guinea pigs,testing the contents of INF-γ,IL-4,IL-2 and IL-10 cytokine in serum by ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay),and carrying on real-time fluorescence quantitative PCR method for measuring the relative content of IFN-γ mRNA,IL-4 mRNA,T-bet mRNA and GATA-3 mRNA in spleen tissue.Results:In all models,IFN-γ was reduced,IL-4 increased and the ratio of IFN-γ/IL-4 reduced.In the simple type of allergic rhinitis model,Xiaoqinglong decoction could increase IFN-γ and reduce IL-4,increasing the ratio of IFN-γ/IL-4.As to the complex type of kidney yang deficiency of allergic rhinitis model,the effect on IFN-γ was not obvious.Xiaoqinglong decoction could reduce the IL-4 so that the ratio of IFN-γ/IL-4 of both was reduced,as well as IFN-γ mRNA and IL-4 mRNA was increased.Xiao Qinglong decoction could increase IFN-γ mRNA and decrease IL-4 mRNA in both Simple type of allergic rhinitis model and complex type of kidney yang deficiency of allergic rhinitis model,so that it made the ratio of IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA increased,and the role in simple type of allergic rhinitis model was more obvious.Both the simple type of allergic rhinitis model and the complex type of kidney yang deficiency of allergic rhinitis model were found T-bet mRNA decreased,GATA-3 mRNA increased,and the ratio of T-bet mRNA/GATA-3 mRNA decreased.Xiaoqinglong decoction could increase T-bet mRNA and reduce the GATA-3 in the simple type of allergic rhinitis model and thus the ratio of T-bet mRNA/GATA-3 mRNA was increased.In the complex type of kidney yang deficiency of allergic rhinitis model,Xiaoqinglong decoction had no obvious effect on T-bet mRNA,but it also could reduce the GATA-3 mRNA,increasing the ratio of T-bet mRNA/GATA-3 mRNA.Conclusion:Xiaoqinglong decoction can significantly improve the local allergic reaction of the simple type of allergic rhinitis model,but has relatively small effect on the complex type of kidney yang deficiency of allergic rhinitis model.Xiaoqinglong decoction regulates the balance of Th1/Th2 by increasing the ratio of IFN-γ mRNA/IL-4 mRNA and T-bet mRNA/GATA-3 m RNA.Also,it has more obvious effect on the simple type of allergic rhinitis model.

Xiaoqinglong decoction; Models of allergic rhinitis; Th1/Th2; Allergic rhinitis

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81202728);北京中醫(yī)藥大學(xué)自主課題(2016-JYB-JSMS-001；2016-JYB-XS011)

紀(jì)雯婷(1990.10—)，女，在讀研究生，研究方向：中醫(yī)臨床基礎(chǔ)

劉敏(1978.04—)，女，博士，副教授，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師,研究方向:經(jīng)方防治常見(jiàn)病、疑難病研究。E-mail:liumin78@126.com

R259；R289.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2017.07.039