張歲 柳立平 馬文波 段衛(wèi) 解從君 佟立新 李保欣

·論著·

臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療乙型肝炎肝硬化的療效比較

張歲 柳立平 馬文波 段衛(wèi) 解從君 佟立新 李保欣

目的 比較經(jīng)外周靜脈移植臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療乙型肝炎肝硬化患者的臨床療效。方法 乙型肝炎肝硬化患者42例，分為臍血干細(xì)胞組20例，給予臍血干細(xì)胞治療；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞組22例，給予臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療，2組均給予內(nèi)科綜合治療。比較2組移植前及移植后2、4、12、24周生化指標(biāo)、臨床癥狀的改善情況及不良反應(yīng)。結(jié)果 2組干細(xì)胞移植后白蛋白、膽堿酯酶及凝血酶原活動度均較移植前升高(P<0.05)，移植后24周總膽紅素較移植前降低(P<0.05)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶移植后各時(shí)間點(diǎn)與移植前比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組間各時(shí)間點(diǎn)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。干細(xì)胞移植4周后，2組食欲、乏力、腹脹及腹水情況均較移植前改善，2組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組患者均未發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)和并發(fā)癥。結(jié)論 臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療乙型肝炎肝硬化患者安全有效，療效差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

臍血干細(xì)胞；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞；移植；乙型肝炎肝硬化

肝硬化是指彌漫性肝臟纖維化伴有異常結(jié)節(jié)形成，為肝病的終末期階段，常并發(fā)上消化道出血、肝性腦病、繼發(fā)感染等而死亡。其中，由乙型肝炎病毒導(dǎo)致的肝硬化占肝病患者總?cè)藬?shù)的80%左右。目前有效的治療方法為肝移植，但由于肝源缺乏、價(jià)格昂貴及移植后長期服用免疫抑制劑等阻礙其臨床廣泛應(yīng)用。近年來，干細(xì)胞移植技術(shù)的發(fā)展為肝硬化的治療提供了一條新途徑。臨床試驗(yàn)證實(shí)干細(xì)胞移植治療肝硬化患者是安全有效的[1-7]。其中臍血干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源豐富、繁殖速度快、繁殖能力強(qiáng)、具有強(qiáng)大的組織器官修復(fù)能力及多向分化潛能，在臨床應(yīng)用中越來越受到重視。本文經(jīng)外周靜脈輸注臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療乙型肝炎肝硬化患者，對其安全性和療效進(jìn)行了觀察比較，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年11月至2015年11月于我科住院的乙型肝炎肝硬化患者42例，符合2000年《病毒性肝炎防治方案》中肝硬化的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：嚴(yán)重腦、心、肺疾病以及衰竭狀態(tài)病人；確診肝臟或其他臟器腫瘤；重型肝炎急性期；嚴(yán)重感染；消化道大出血；肝腎綜合征；中重度肝性腦病；有精神疾病者；高度過敏體質(zhì)者。所有患者采用單盲、平行對照分為臍血干細(xì)胞組和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞組，其中臍血干細(xì)胞組20例，男13例，女7例;年齡34～73歲，平均(55.8±11.9)歲；Child-Pugh分級A級5例，B級10例，C級5例，給予臍血干細(xì)胞移植；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞組22例，男15例，女7例;年齡34～74歲，平均(54.8±10.8)歲；Child-Pugh分級A級6例，B級10例，C級6例，給予臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植。2組患者均口服核苷類藥物抗病毒，并給予內(nèi)科綜合治療。2組患者的性別比、年齡、Child-Pugh分級無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本研究獲醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 臍血干細(xì)胞制備 選擇健康產(chǎn)婦，獲產(chǎn)婦知情同意。胎兒娩出斷臍后，用裝有ACD-B保存液的一次性采血袋用封閉式采血法采血，每袋采臍血約60～140 ml。采用細(xì)胞處理試劑盒分離臍血干細(xì)胞，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞表型確定為臍血干細(xì)胞，細(xì)胞活性檢測大于95%，細(xì)胞內(nèi)毒素檢測陰性。

1.3 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞制備 選擇健康產(chǎn)婦，獲產(chǎn)婦知情同意。采用貼壁培養(yǎng)法分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞傳代到第三代，鏡下觀察，可見細(xì)胞貼壁良好，融合密度達(dá)85%。進(jìn)行流式染色后，流式細(xì)胞儀上機(jī)檢測細(xì)胞表型確定為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。收集培養(yǎng)至第4代的干細(xì)胞。

1.4 干細(xì)胞移植 經(jīng)外周靜脈回輸干細(xì)胞，2組輸注前20 min均給予肌內(nèi)注射苯海拉明注射液20 mg，輸注前后均給予0.9%氯化鈉溶液100 ml沖管。每次回輸?shù)母杉?xì)胞數(shù)量為(1.4～2.3)×106/kg，用0.9%氯化鈉溶液稀釋至100 ml，靜脈滴注。每半月輸注1次，共回輸2次。

1.5 觀察指標(biāo) 檢測干細(xì)胞移植前及移植后2、4、12、24周患者丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase,AST)、總膽紅素(total bilirubin,TBIL)、白蛋白(albumin,ALB)、膽堿酯酶(cholinesterase,CHE)、凝血酶原活動度(prothrombin activity,PTA)水平變化，觀察臨床癥狀(食欲、乏力、腹脹、腹水)改善情況、移植后不良反應(yīng)及肝癌的發(fā)生率、病死率。

2 結(jié)果

2.1 生化指標(biāo)改善情況 2組患者ALB、CHE移植后12、24周較移植前升高(P<0.05或P<0.01)，PTA移植后4、12、24周較移植前升高(P<0.05或<0.01)，TBIL移植后24周較移植前降低(P<0.05或<0.01)，ALT、AST移植后各時(shí)間點(diǎn)與移植前比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組間各時(shí)間點(diǎn)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

組別ALT(U/L)AST(U/L)TBIL(μmol/L)ALB(g/L)CHE(U/L)PTA(%)臍血干細(xì)胞組(n=20) 移植前34．7±15．735．4±15．038．3±14．734．0±5．03562．7±1269．863．5±14．0 移植后2周31．3±13．834．2±15．236．3±13．434．7±5．73695．0±1251．365．5±14．6 移植后4周30．0±9．131．7±12．935．8±13．036．2±5．03752．3±1367．169．9±16．5# 移植后12周27．4±10．130．4±12．733．7±13．238．3±6．0#4032．2±1365．7#75．3±18．8# 移植后24周29．0±12．832．5±17．031．2±11．6#38．0±6．5#4266．9±1122．7#77．7±18．5#臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞組(n=22) 移植前34．2±15．435．7±9．537．8±13．032．3±5．73440．7±1274．762．4±14．1 移植后2周33．5±14．634．4±9．336．7±13．033．4±3．93558．0±1271．264．6±12．7 移植后4周33．2±11．935．1±8．535．3±10．333．7±4．13637．0±1228．868．3±15．9? 移植后12周32．5±11．733．8±8．735．1±12．636．1±5．1#3977．9±1251．4?73．3±16．1# 移植后24周31．3±10．432．6±7．732．7±9．5?36．1±5．5#4100．8±1280．5#74．6±18．5#

注：與移植前比較，*P<0.05與移植前比較，#P<0.01

2.2 臨床癥狀改善情況 2組患者移植后4周，食欲、乏力、腹脹、腹水情況均較移植前改善，但2組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 2組臨床癥狀改善情況 例

2.3 不良反應(yīng) 2組患者在移植及隨訪24周過程中均無與干細(xì)胞移植相關(guān)的不良反應(yīng)發(fā)生，無肝癌發(fā)生，無死亡病例。

3 討論

肝硬化是一類嚴(yán)重威脅人們健康的肝臟疾病，是所有肝病的終末期階段，肝移植是其最有效的治療方法，但由于供肝缺乏、高額的費(fèi)用及移植后免疫排斥反應(yīng)等限制了其廣泛開展。干細(xì)胞是指具有自我更新能力、多向分化潛能、免疫調(diào)節(jié)作用和靶向治療功能的原始細(xì)胞，越來越多的被應(yīng)用于器官損傷的治療。干細(xì)胞移植技術(shù)在肝病方面的研究應(yīng)用，為肝硬化的治療提供了一種新的治療方法。目前臨床上用來治療肝硬化的干細(xì)胞主要是骨髓干細(xì)胞、外周血干細(xì)胞、臍血干細(xì)胞和臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。但有報(bào)道指出骨髓干細(xì)胞移植取材相對不易，對于體弱和老年患者不適用，外周血干細(xì)胞移植在骨髓干細(xì)胞動員期間，白細(xì)胞明顯增加，存在形成心腦血管血栓的風(fēng)險(xiǎn)[8]，臨床應(yīng)用均受到一定限制。臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞以其自身優(yōu)點(diǎn)，比如來源廣泛、取材方便、干細(xì)胞含量豐富、自身繁殖能力強(qiáng)、繁殖速度快、表面抗原性弱、無需配型，受到廣泛關(guān)注。臍血干細(xì)胞來源于臍帶血，有造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞；臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞來源于臍帶，主要是間充質(zhì)干細(xì)胞。臨床試驗(yàn)證實(shí)這兩種不同來源的干細(xì)胞移植治療肝硬化患者均可改善患者的臨床癥狀及肝功能，安全可靠[5-7]。但此兩種干細(xì)胞治療肝硬化患者的療效是否存在差異，仍需進(jìn)一步探討。本研究通過對比臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療乙型肝炎肝硬化患者的臨床療效，為肝硬化的臨床治療提供進(jìn)一步指導(dǎo)。

研究結(jié)果顯示2組間干細(xì)胞移植治療乙型肝炎肝硬化患者的療效比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但2組在臨床上均取得了一定療效。2組患者移植后ALB、CHE、PTA均較移植前升高，TBIL較移植前降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞均可發(fā)揮修復(fù)病損肝臟的作用，改善肝臟的合成功能，其可能機(jī)制為：(1)干細(xì)胞通過“歸巢”到達(dá)肝臟后在肝臟的微環(huán)境中分化為功能性肝細(xì)胞[9,10]； (2)干細(xì)胞可分泌營養(yǎng)因子，抑制炎性反應(yīng)，抑制肝細(xì)胞凋亡，促進(jìn)肝細(xì)胞再生[11]，抑制肝纖維化形成[12]；(3)氧化應(yīng)激活性氧激發(fā)的氧化應(yīng)激反應(yīng)，能夠誘發(fā)肝損傷，干細(xì)胞的抗氧化活性起到了降低肝損傷的作用[13]；(4)干細(xì)胞可表達(dá)各種可溶性因子，例如前列腺素E2、吲哚胺2,3雙加氧酶、白介素-6、白介素-10和人白細(xì)胞抗原G，這些可溶性因子可調(diào)節(jié)各種免疫細(xì)胞的增殖和功能，并可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞[14]，干細(xì)胞的這種免疫調(diào)節(jié)潛能在肝硬化的治療中起到了重要的作用。本研究顯示兩組患者ALT、AST移植前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，考慮與肝硬化患者干細(xì)胞移植前ALT、AST在正常范圍內(nèi)或升高不明顯有關(guān)。

2組患者食欲、乏力、腹脹癥狀改善，腹水減輕，無與干細(xì)胞移植相關(guān)的不良反應(yīng)發(fā)生，安全性好。既往有研究指出干細(xì)胞可通過直接轉(zhuǎn)化、抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)和對腫瘤細(xì)胞的營養(yǎng)作用等導(dǎo)致腫瘤發(fā)生[15]。但也有報(bào)道認(rèn)為干細(xì)胞可能對肝硬化患者起到了更好的保護(hù)作用，防止了肝癌的發(fā)生[16]。本試驗(yàn)所有患者隨訪24周，均無肝癌發(fā)生，進(jìn)一步說明了臍血干細(xì)胞與臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療的安全性。

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10.3969/j.issn.1002-7386.2017.16.011

項(xiàng)目來源：河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(編號：20150636)

050031 石家莊市，河北醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病診療中心

R 575.2

A

1002-7386(2017)16-2448-03

2017-04-06)