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        URSA患者絨毛組織中細胞凋亡及血管新生異常與m iR-1 55表達的關(guān)系

        2017-07-25 09:19:12陳湘玲董明慧王維香

        畢 穎,陳湘玲,董明慧,王維香

        (武漢市紅十字會醫(yī)院婦產(chǎn)科,武漢 430012)

        URSA患者絨毛組織中細胞凋亡及血管新生異常與m iR-1 55表達的關(guān)系

        畢 穎,陳湘玲,董明慧,王維香

        (武漢市紅十字會醫(yī)院婦產(chǎn)科,武漢 430012)

        目的:探究URSA患者絨毛組織中細胞凋亡及血管新生異常與miR-1 55表達的關(guān)系。方法:選擇2014年1月~2015年1月來我院婦產(chǎn)科行清宮術(shù)后的孕婦的標本64例,其中URSA患者38例,剩余26例,將64例患者按照是否為URSA患者分為兩組,即URSA組、對照組。對miR-155的表達量與細胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl及血管新生分子VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表達量記錄,并與miR-155的表達量進行對比。結(jié)果:miR-155的表達量與細胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表達量呈正相關(guān),與血管新生分子VEGF、HIF-1α的表達量呈正相關(guān),與sFlt-1的表達量呈負相關(guān),且兩組患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表達量不同,URSA組顯著低于對照組,且URSA組miR-155、VEGF、HIF-1α的表達量顯著低于對照組,sFlt-1的表達量則顯著高于對照組。結(jié)論:URSA絨毛組織中細胞的凋亡及血管新生與miR-155存在關(guān)系,且miR-155的表達量下降則會導(dǎo)致絨毛組織中的細胞過度凋亡。

        URSA患者;絨毛組織;細胞凋亡;血管新生;miR-1 55

        復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(RSA)是指適齡女性發(fā)生自然流產(chǎn)的的次數(shù)在兩次以上,通常超過40%[1]的產(chǎn)婦發(fā)生復(fù)發(fā)性流產(chǎn)的原因明確,主要是由手術(shù)、遺傳、激素紊亂、細菌感染以及自身抵抗力差等原因[2]引起的。而另外低于60%的復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者則原因尚未明確,這類患者流產(chǎn)通常被稱為不明原因復(fù)發(fā)性流產(chǎn)(URSA)。相關(guān)報道指出URSA的發(fā)病機制是由較多因素參與的,較為復(fù)雜。而且URSA的相關(guān)發(fā)病機制與URSA的治療效果間的相關(guān)聯(lián)系也沒有確切報道。但是有學(xué)者指出[3],URSA發(fā)生時會出現(xiàn)絨毛組織中細胞凋亡或新生血管障礙等現(xiàn)象。微小RNA-155(miR-155)是一類近年來才發(fā)現(xiàn)的微小RNA,研究發(fā)現(xiàn),m iR-155可以參與多種生物學(xué)反應(yīng)[4]。包括參與細胞的細胞增值以及血管新生等,有報道指出[5],在多種癌組織中均可發(fā)現(xiàn)m iR-155,并且證實miR-155與腫瘤組織中的血管新生、細胞凋亡等反應(yīng)均有關(guān),而妊娠期往往滋養(yǎng)細胞的浸潤能力較強,其生物活性與腫瘤細胞的一系列變化具有相似之處,因此筆者認為miR-155在URSA患者的絨毛組織中的表達與URSA患者絨毛組織中細胞凋亡及血管新生存在一定關(guān)系,為了探討miR-155與URSA患者絨毛組織中細胞凋亡,及血管新生的關(guān)系,筆者對絨毛組織中的miR-155以及細胞凋亡分子和血管新生分子進行了分析,現(xiàn)報道如下:

        1 資料與方法

        1.1 臨床資料選擇2014年1月~2015年1月來我院婦產(chǎn)科行清宮術(shù)后的孕婦的標本64例,其中URSA患者38例,剩余26例為產(chǎn)婦因非疾病因素通過人工流產(chǎn)術(shù)終止妊娠的的患者。所有患者年齡在23~33歲,孕齡50~66d。將64例患者按照是否為URSA患者分為兩組,即URSA組、對照組,URSA組患者38例,年齡23~32歲,平均年齡(28.4±3.5)歲,孕齡50~64d,平均孕齡(57.3±7.4)d.該組患者均表現(xiàn)為腹痛、或者伴有陰道流血,經(jīng)B超診斷為無原始心管搏動,且經(jīng)臨床診斷為難免流產(chǎn)。另外入選該組的URSA患者自然流產(chǎn)次數(shù)超過兩次,并且排除明確原因?qū)е碌闹貜?fù)性流產(chǎn)患者。其中連續(xù)流產(chǎn)兩次的患者16例,連續(xù)流產(chǎn)3次化妝你和10例,連續(xù)流產(chǎn)四次患者12例。對照組患者26例,年齡24~33歲,平均年齡(28.5±3.4)歲,孕齡52~66d,平均孕齡(57.5±7.3)d.該組患者經(jīng)臨床確診為正常懷孕且胚胎發(fā)育正常,同時不存在先兆流產(chǎn)癥狀。兩組患者在年齡、孕齡等方面不存在統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)具有可比性。

        1.2 方法將兩組患者經(jīng)清宮術(shù)后獲得的絨毛組織標本使用生理鹽水多次清洗后,即刻放入液氮中進行冷凍。然后置零下負80度冰箱中保存待用。

        1.2.1 儀器與試劑RNA提取和PCR反應(yīng)試劑盒來自于北京百奧森泰生物技術(shù)有限公司PCR儀來自于賽飛有限公司.

        1.2.2 mRNA表達量檢測方法取處理過的絨毛組織標本適量,抽提總mRNA及總miRNA,并將兩類RNA進行反轉(zhuǎn)錄為cDNA標本。其中經(jīng)mRNA轉(zhuǎn)錄而來的cDNA標本則用于與凋亡分子及血管新生分子(Bcl-2、Bcl-xl、VEGF、HIF-1、sFlt-1)有關(guān)的PCR擴增,其中內(nèi)參照選用B-actin基因;經(jīng)miRNA轉(zhuǎn)錄而來的cDNA標本則用于與miR-155有關(guān)的PCR擴增,內(nèi)參照基因為U6基因。PCR擴增反應(yīng)后計算相應(yīng)基因或miRNA的含量。

        1.3 評價指標(1)對miR-155的表達量與細胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表達量進行記錄并對比;

        (2)記錄VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表達量,并與miR-155的表達量進行對比;

        1.4 統(tǒng)計分析本次研究所獲得數(shù)據(jù)均使用分析軟件SPSS17.0進行統(tǒng)計分析,計量資料用(±s)表示,組間比較采用t檢驗,以P<0.05為統(tǒng)計學(xué)存在差異。

        2 結(jié)果

        2.1 兩組婦女絨毛組織中m iR-155與細胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-x l的表達量分別對兩組患者絨毛組織中的miR-155的表達量以及Bcl-2、Bcl-xl的表達量進行了測定,結(jié)果顯示miR-155的表達量與細胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表達量呈正相關(guān),且兩組患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表達量不同,URSA組顯著低于對照組(P<0.05),詳見表1.

        表1 兩組婦女絨毛組織中m iR-155與細胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表達量

        2.2 兩組婦女絨毛組織中m iR-155與血管新生分子VEGF、HIF-1α、sFlt-1的表達量兩組患者miR-155的表達量與血管新生分子VEGF、HIF-1α的表達量呈正相關(guān),與sFlt-1的表達量呈負相關(guān),且URSA組miR-155、VEGF、HIF-1α的表達量顯著低于對照組(P<0.05),sFlt-1的表達量則顯著高于對照組(P<0.05),詳見表2.

        表2 兩組婦女絨毛組織中m iR-155與血管新生分子VEGF、H IF-1α、sFlt-1的表達量

        3 討論

        相關(guān)報道指出,超過40%的重復(fù)流產(chǎn)患者(RSA)主要是由解剖因素、染色體因素、生殖道感染、自身免疫機制等因素引起的。而并無確定原因引起的RSA則被稱為URSA。因為治病因素不明確,所以URSA患者治療起來也相對麻煩,并且由于致病因無法確定,所以很難在根本上阻止患者重復(fù)流產(chǎn)的發(fā)生,進而加重了患者再次妊娠時流產(chǎn)發(fā)生的風(fēng)險。近年來,有關(guān)URSA的病因及病理研究主要集中在絨毛組織有關(guān)的細胞改變方面,因為有學(xué)者發(fā)現(xiàn)URSA發(fā)生是會伴有絨毛組織細胞的凋亡及血管新生等生化反應(yīng)發(fā)生[7]。這一生化反應(yīng)恰好與腫瘤組織的發(fā)展存在共同點,腫瘤組織在增生時會伴有細胞的增值及凋亡以及血管新生等。

        相關(guān)研究指出,在多數(shù)腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)了微小RNA(miRNA),miRNA是一類長度及短的RNA,但是其功能卻相當強大,它具有調(diào)控基因表達,并且還會參與細胞的凋亡及增值,以及血管新生等一系列生化調(diào)控反應(yīng)。有報道指出MiR-155的異常表達會促進腫瘤組織中細胞的異常增殖以及血管的新生。由于URSA患者的絨毛組織中也存在細胞的增值與凋亡以及血管新生等,可以推斷URSA的產(chǎn)生也可能與miR-155表達異常有關(guān)。為了證實該推測,筆者分別對URSA患者,以及自愿人工流產(chǎn)的健康女性的組織進行了MiR-155含量測定,以及細胞凋亡分子(Bcl-2、Bcl-xl)及血管新生分子(VEGF、HIF-1α、sFlt-1)的測定。細胞凋亡分子具有抑制細胞凋亡的作用[7],因此如果某組織中出現(xiàn)細胞過度凋亡的現(xiàn)象發(fā)生,則說明該組織中細胞凋亡分子(Bcl-2、Bcl-xl)的表達量下降。而血管新生分子(VEGF、HIF-1α、sFlt-1)則與血管的生成有關(guān),HIF-1α與VEGF具有協(xié)同作用,當二者表達量高時則會促進血管新生,而sFlt-1與VEGF具有拮抗作用,即當sFlt-1表達量較高時則會抑制血管新生。

        本次研究結(jié)果顯示,兩組患者絨毛組織中的miR-155的表達量細胞凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl的表達量呈正相關(guān),與血管新生分子VEGF、HIF-1α的表達量呈正相關(guān),與sFlt-1的表達量呈負相關(guān)。該結(jié)果說明患者URSA絨毛組織中細胞的凋亡及血管新生與miR-155存在關(guān)系,該結(jié)論與杜宏英等人的研究結(jié)果相一致。另外,本研究結(jié)果還顯示兩組患者的miR-155、Bcl-2、Bcl-xl的表達量不同,URSA組顯著低于對照組,兩組患者miR-155的表達量且URSA組miR-155、VEGF、HIF-1α的表達量顯著低于對照組,sFlt-1的表達量則顯著高于對照組。這進一步證明了URSA患者絨毛組織中細胞的凋亡及血管新生與miR-155存在關(guān)系,而且URSA患者絨毛組織中的細胞過度凋亡,且新生血管量減少,從而使胎兒無法生存。

        綜上所述,URSA絨毛組織中細胞的凋亡及血管新生與miR-155存在關(guān)系,且miR-155的表達量下降則會導(dǎo)致絨毛組織中的細胞過度凋亡,新生血管減少。從而影響胎兒的生存環(huán)境。

        [1] 王婷, 叢林, 朱立新, 等. 原因不明性復(fù)發(fā)性流產(chǎn)91例主動免疫治療效果分析[J]. 安徽醫(yī)學(xué), 2013, 34(8): 1085-1088.

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        The relationship between apoptosis and angiogenesis in and m iR-1 55 expression in the villi of patients w ith URSA

        Bi Ying, Chen Xiang-ling, Dong Ming-hui, Wang Wei-xiang
        (Department of Obstetrics and Gynecology, Wuhan Red Cross Hospital, Wuhan 430012, China)

        Objective To explore the relationship between cell apoptosis and proliferation and miR-1 55 expression in URSA patients. M ethods Choose 2014 January to 2015 years 1 month to my courtyard department of gynaecology and obstetrics, pregnant women after curettage specimens from 64 patients with, including 38 cases of patients with Ursa, rest of 26 cases, 64 patients according to whether Ursa patients were divided into two groups, namely Ursa patients group and control group. The expression amount of miR-155 and the expression of Bcl-2, Bcl-xl, sFlt-1, HIF-1 and VEGF were recorded and compared with the expression of miR-155. Results The expression level of miR-155 was positively correlated with the expression of Bcl-2 and Bcl-xl, There was a positive correlation between the expression of VEGF and HIF-1, and negatively correlated with the expression of sFlt-1, And the expression of miR-155, Bcl-2 and Bcl-xl were different in the two groups. The URSA group was significantly lower than the control group, and the expression of miR-155, VEGF and HIF-1 in URSA group was significantly lower than that in control group, and the expression of sFlt-1 was significantly higher than that in control group. Conclusion The apoptosis and angiogenesis of URSA were related to the presence of miR-155, and the decreased expression of miR-155 could lead to excessive cell apoptosis in the chorionic villi;

        URSA patients; chorionic villi; apoptosis; angiogenesis; miR-1 55

        R714.21

        A

        1673-016X(2017)03-0067-03

        2017-01-22

        畢穎,E-mail:2239574779@qq.com

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