黃燕瓊，張 森，何淑華，姚靜雯，戴 金，鄧 艷，柏建山

（1.廣州機(jī)場(chǎng)出入境檢驗(yàn)檢疫局國(guó)家水產(chǎn)品檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510470；2.華南理工大學(xué)食品學(xué)院，廣東 廣州 510640）

廣州白云機(jī)場(chǎng)口岸入境海魚(yú)感染異尖線(xiàn)蟲(chóng)鑒定研究

黃燕瓊1，張 森2，何淑華1，姚靜雯1，戴 金1，鄧 艷1，柏建山1

（1.廣州機(jī)場(chǎng)出入境檢驗(yàn)檢疫局國(guó)家水產(chǎn)品檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州 510470；2.華南理工大學(xué)食品學(xué)院，廣東 廣州 510640）

對(duì)2012—2015年從白云機(jī)場(chǎng)口岸入境的214批海魚(yú)進(jìn)行剖檢鑒定異尖線(xiàn)蟲(chóng)，取內(nèi)臟和魚(yú)肉進(jìn)行酶消化，在10批次海魚(yú)中分離出蟲(chóng)體，用苯酚乳酸透明液進(jìn)行透明處理及形態(tài)學(xué)鑒定，確定所分離出的蟲(chóng)體有異尖線(xiàn)蟲(chóng)三期幼蟲(chóng)I型和Ⅱ型。用線(xiàn)蟲(chóng)rDNA ITS區(qū)通用引物NC5和NC2對(duì)蟲(chóng)體進(jìn)行PCR擴(kuò)增，并對(duì)蟲(chóng)體的核糖體基因間隔區(qū)ITS1和ITS2進(jìn)行序列和進(jìn)化分析，確定分離出來(lái)的異尖線(xiàn)蟲(chóng)三期幼蟲(chóng)包括簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)（Anisakia simple）、抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)（Anisakia physeteris）和典型異尖線(xiàn)蟲(chóng)（Anisakia typica）。調(diào)查結(jié)果對(duì)公共安全的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估有重要意義，同時(shí)為口岸的進(jìn)境水產(chǎn)品食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供參考數(shù)據(jù)。

異尖線(xiàn)蟲(chóng)；形態(tài)學(xué)鑒定；PCR擴(kuò)增；序列分析

異尖線(xiàn)蟲(chóng)成蟲(chóng)寄生于海洋哺乳類(lèi)動(dòng)物的消化道內(nèi)，幼蟲(chóng)則廣泛寄生于不同品種的海魚(yú)體內(nèi)［1］。如果人食用生的或未熟的含有異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)的海魚(yú)，如壽司、生魚(yú)片等，則可引起異尖線(xiàn)蟲(chóng)病，感染的異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)可以鉆入消化道，或移行到其他組織，從而引起人的急腹癥癥狀，如劇烈腹痛、惡心、嘔吐、腹瀉等［2-4］。近年來(lái)，隨著生食海鮮魚(yú)類(lèi)的飲食習(xí)慣日漸流行，異尖線(xiàn)蟲(chóng)病對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成嚴(yán)重危害，已成為影響我國(guó)海產(chǎn)品食用安全性的重要危害因素之一。目前，已報(bào)道的全球感染異尖線(xiàn)蟲(chóng)病病例達(dá)3萬(wàn)余例，僅日本就有2萬(wàn)人感染此病，且以每年2 000多例的速度遞增［5］。異尖線(xiàn)蟲(chóng)病是重要的人獸共患寄生蟲(chóng)病，被我國(guó)列為禁止入境的二類(lèi)寄生蟲(chóng)病。

異尖屬線(xiàn)蟲(chóng)隸屬于蛔目異尖科，能引起人類(lèi)異尖線(xiàn)蟲(chóng)病的主要有4個(gè)屬，分別為異尖線(xiàn)蟲(chóng)屬、對(duì)盲囊線(xiàn)蟲(chóng)屬、宮脂線(xiàn)蟲(chóng)屬和偽地新線(xiàn)蟲(chóng)屬。異尖線(xiàn)蟲(chóng)病主要是由異尖屬線(xiàn)蟲(chóng)的第三期幼蟲(chóng)引起的，包括簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)（Anisakia simple）、抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)（Anisakia physeteris）和典型異尖線(xiàn)蟲(chóng)（Anisakia typica）3種［6］。異尖屬線(xiàn)蟲(chóng)的成蟲(chóng)和幼蟲(chóng)廣泛分布在世界各大海域，據(jù)報(bào)道已有20多個(gè)國(guó)家100多種魚(yú)類(lèi)感染異尖屬線(xiàn)蟲(chóng)［7-9］。葛卜峰等［10］對(duì)在南通口岸進(jìn)境的來(lái)自150個(gè)國(guó)家和地區(qū)的78批共255尾海魚(yú)進(jìn)行了異尖屬線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)檢驗(yàn)，其中有100尾海魚(yú)檢出異尖屬線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)感染，共檢出幼蟲(chóng)1 554條。我們對(duì)2012—2015年從白云機(jī)場(chǎng)口岸入境的214批海魚(yú)進(jìn)行異尖線(xiàn)蟲(chóng)感染情況調(diào)查和鑒定研究，為口岸進(jìn)境水產(chǎn)品的食品安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供參考數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品來(lái)源 調(diào)查樣本為2012—2015年白云機(jī)場(chǎng)口岸從36個(gè)國(guó)家和地區(qū)入境的整條帶內(nèi)臟的海魚(yú)，不同種類(lèi)，共214批，每批海魚(yú)數(shù)為1～40條不等。

1.1.2 主要儀器 生物顯微鏡（L e c i a DM5000B）、體視顯微鏡（Lecia S8APO）、恒溫振蕩器（T H Z-D）、冷凍離心機(jī)（Siama 3K15）、梯度PCR儀（BIOMETRA TRRADIENT） 、電泳儀（BIA-RAD、PowerPac Basic）、凝膠成像系統(tǒng)（VILBER）、手術(shù)刀、小鑷子、昆蟲(chóng)針、載玻片、蓋玻片。

1.1.3 主要試劑 8.5 g/L生理鹽水、胃蛋白酶-濃鹽酸消化液、酒精、乳酸-酚-甘油混合透明液，試劑配制方法參照《異尖線(xiàn)蟲(chóng)病診斷規(guī)程》和《魚(yú)類(lèi)簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)檢測(cè)方法》。TaKaRa Universal Genomic DNA Extraction Kit試劑盒、Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0試劑盒、Plasmid Purification Kit Ver.4.0試劑盒、10 ×PCR buffer、dNTP、Taq酶、pMD18-T載體、DH5α感受態(tài)細(xì)胞，購(gòu)自寶生物工程（大連）有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 蟲(chóng)體樣本分離 剖開(kāi)海魚(yú)的內(nèi)臟和肌肉，肉眼檢查海魚(yú)腹腔、內(nèi)臟、腸系膜和肌肉組織，觀察有無(wú)蟲(chóng)體和包囊。發(fā)現(xiàn)有蟲(chóng)體或包囊的，用昆蟲(chóng)針和鑷子剔除包囊和周?chē)s質(zhì)，把蟲(chóng)體分離出來(lái)。肌肉和內(nèi)臟仍可能有肉眼未觀察到的蟲(chóng)體，將肌肉和內(nèi)臟用消化液進(jìn)行消化，料液比按1∶10配制后，于恒溫振蕩器內(nèi)，37℃、150 r/min放置4～5 h使其充分消化后，將消化液濾過(guò)孔徑2.0 mm的篩，吸去上清液，攪拌后沉淀20～30 min，再吸去上清液，用生理鹽水反復(fù)清洗幾次，直至上清液透明為止，分離出蟲(chóng)體，置于有生理鹽水的培養(yǎng)皿中。

1.2.2 蟲(chóng)體形態(tài)學(xué)鑒定 用體視顯微鏡觀察，疑似異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)的蟲(chóng)體呈乳白色，在生理鹽水中卷曲或有包囊包住，體長(zhǎng)約10～30 mm，將部分蟲(chóng)體放入苯酚-乳酸-甘油透明液中進(jìn)行透明處理后置于載玻片上，蓋上蓋玻片在生物顯微鏡下觀察，參照《異尖線(xiàn)蟲(chóng)病診斷規(guī)程》進(jìn)行鑒定。異尖屬幼蟲(chóng)：蟲(chóng)體頭部頂端有一鉆孔齒，Ⅰ型幼蟲(chóng)腸腔呈Y型，胃長(zhǎng)，尾短，尾端有棘；Ⅱ型幼蟲(chóng)胃短，尾長(zhǎng)，尾端無(wú)棘，腸腔呈Y型或Ⅰ型。觀察鑒定后將蟲(chóng)體放入裝有75%酒精的離心管中放-20℃保存。

1.2.3 蟲(chóng)體DNA提取 將單條蟲(chóng)體從75%酒精的離心管中取出 ，置于滅菌的1.5 mL 離心管中，用純水洗凈后用研磨棒研磨，后根據(jù)TaKaRa Universal Genomic DNA Extraction Kit試劑盒的步驟提取蟲(chóng)體基因組DNA。將基因組DNA置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 PCR擴(kuò)增 引物為異尖科線(xiàn)蟲(chóng)ITS序列的通用引物，上游引物NC5（5′GTAGGTGA ACCTGCGGAAGGATCATF3′），下游引物NC2（5′TTAGTTTCTTTTCCTCCGCT3′）［11］，由英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司合成。以NC5、NC2引物擴(kuò)增ITS序列片段，擴(kuò)增體系為25 μL：2.5 μL 10×PCR buffer，2.5μL Mg2+，1 μL dNTP，1 μL NC5引物，1 μL NC2引物，0.5 μLTaq酶，1 μL DNA模板，用超純水補(bǔ)足至25 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性4 min；94℃變性30 s、55℃退火30 s、72℃延伸30 s，30個(gè)循環(huán)；最后72℃延伸10 min。取反應(yīng)產(chǎn)物5 μL在1%瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳20 min，在凝膠成像系統(tǒng)中觀察并拍照記錄結(jié)果。

1. 2. 5 擴(kuò)增片段的克隆和測(cè)序 使用Takara公司的Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0試劑盒，按照說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行PCR擴(kuò)增片段的純化回收，將純化產(chǎn)物連接到pMD 18-T載體上，然后轉(zhuǎn)化至感受態(tài)細(xì)胞DH5α中培養(yǎng)，將DH5α感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)液涂布到含有氨芐青霉素、IPTG、X-gal的LB瓊脂平板上，37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12 h，再進(jìn)行藍(lán)白斑篩選（方法參照《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》第3版），挑取單個(gè)白色菌落，按照Takara公司的Plasmid Purification Kit Ver.4.0試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行質(zhì)粒提取。將質(zhì)粒置于-20℃冰箱保存。

1.2.6 構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù) 將陽(yáng)性克隆質(zhì)粒送英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司進(jìn)行測(cè)序，測(cè)序獲得的序列經(jīng)校正處理后使用NCBI的BLAST在線(xiàn)工具（ http：//blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast. cgi）進(jìn)行序列比對(duì)，為了進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化分析，于GenBank 中獲取以下各蟲(chóng)種的ITS1、5.8S、ITS2基因序列，包括：簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)（Anisakis simplex登錄號(hào)為JN005757、A. pegreffii登錄號(hào)為JN005768、A. simplex‘C’ 登錄號(hào)為AY826722）、典型異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. typical登錄號(hào)為KC928262）、短棘異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. brevispiculata，登錄號(hào)為AY826719）、劍吻鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. ziphidarum登錄號(hào)為JN005766）、抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. physeteris登錄號(hào)為AY826721）、小抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. paggiae登錄號(hào)為GU295974）、A. nascettii（A. nascettii登錄號(hào)為JQ912692）、內(nèi)彎宮脂線(xiàn)蟲(chóng)（Hysterothylacium aduncum登錄號(hào)為AB277826）。將測(cè)序結(jié)果與下載的ITS序列用ClustalX軟件進(jìn)行差異性分析，并進(jìn)行必要調(diào)整，然后用MEGA5.0（Molecular Evolutionary Genetic Analysis 5.0 version）軟件，使用最大似然法M-L法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)，自展值重復(fù)1 000次。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同種類(lèi)海魚(yú)異尖線(xiàn)蟲(chóng)感染情況

本研究對(duì)2012—2015年白云機(jī)場(chǎng)口岸進(jìn)境的214批海魚(yú)進(jìn)行剖檢，每批海魚(yú)數(shù)1～40尾不等，其中有10批次的海魚(yú)剖檢出感染異尖線(xiàn)蟲(chóng)三期幼蟲(chóng)（圖1，封三）。10批次海魚(yú)有63尾，感染異尖線(xiàn)蟲(chóng)陽(yáng)性的有59尾，陽(yáng)性率為93.7%；檢獲異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)817條，平均感染強(qiáng)度13.8條，對(duì)每一批次的1～2條蟲(chóng)體進(jìn)行編號(hào)，如表1所示。

2.2 形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果

經(jīng)苯酚-乳酸-甘油透明液透明后，在生物顯微鏡下對(duì)蟲(chóng)體進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，10種海魚(yú)感染異尖線(xiàn)蟲(chóng)三期幼蟲(chóng)。AN1、AN3、AN4、AN5、AN6、AN7、AN9、AN10、AN11在鏡下的形態(tài)基本一致，蟲(chóng)體不易透明，體表具有明顯的角質(zhì)環(huán)紋。蟲(chóng)體頭部鈍圓，頂端口近似三角形，有一鉆齒（圖2A，封三），食道前端細(xì)，向后逐漸膨大，胃黑色而不透明，胃長(zhǎng)、柱形，與腸以斜線(xiàn)相連（圖2B，封三）。尾短，周?chē)泻芏鄼M紋，頂端有一尾圖，呈圓塔形（圖2C，封三），鑒定為異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)Ⅰ型；AN2、AN8在鏡下的形態(tài)基本一致，蟲(chóng)體不易透明，體表具有明顯的角質(zhì)環(huán)紋。頭部鈍圓，頂端有一鉆齒，其尖端的下方有一長(zhǎng)圓形的孔，為排泄孔（圖3A，封三）。胃短，柱形，與腸交界處呈一曲面（圖3B，封三）。尾長(zhǎng)，呈圓錐形，周?chē)臋M紋較少，尾端無(wú)棘（圖3C，封三），鑒定為異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)Ⅱ型。

2.3 ITS序列PCR擴(kuò)增結(jié)果

以編號(hào)為AN1～AN11的線(xiàn)蟲(chóng)基因組DNA為模板，使用異尖線(xiàn)蟲(chóng)ITS通用引物NC5、NC2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳分析。10種海魚(yú)感染的異尖線(xiàn)蟲(chóng)均能擴(kuò)增出ITS序列片段，得到大小為1 000 bp左右的片段，與預(yù)期片段大小相符（圖4）。

圖4 10種海魚(yú)感染的異尖線(xiàn)蟲(chóng)ITS序列的PCR擴(kuò)增結(jié)果

2.4 序列比對(duì)分析結(jié)果

樣品測(cè)序結(jié)果經(jīng)Blast分析比對(duì)，AN1、AN3、AN4、AN6、AN7、AN9的ITS序列與GenBank中已知的簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. simplexs.s）相應(yīng)基因序列（GenBank上登錄號(hào)為JN005757）同源性達(dá)99%～100%；樣品AN5與派氏異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. pegreffii）同源性達(dá)100%（GenBank上登錄號(hào)為JN005768）；樣品AN2和AN8的序列比對(duì)結(jié)果與抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. physeteris）同源性達(dá)100%（GenBank上登錄號(hào)為KP313727）；樣品AN10和AN11與典型異尖線(xiàn)蟲(chóng)（A. typica）同源性達(dá)99%（GenBank上登錄號(hào)為KC928262）。

2.5 系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)構(gòu)建結(jié)果

對(duì)10個(gè)樣品的ITS序列進(jìn)行多重比對(duì)后，進(jìn)行必要的調(diào)整，經(jīng)M-L法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)，從系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)拓?fù)鋱D（圖5）可以看到，異尖線(xiàn)蟲(chóng)屬構(gòu)成一個(gè)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，AN1、AN3、AN4、AN6、AN7、AN9與A. simplexs.s構(gòu)成自展值為93%的獨(dú)立分支，AN5與派氏異尖線(xiàn)蟲(chóng)構(gòu)成自展值為90%的獨(dú)立分支，以上兩個(gè)分支又與A. simplexC構(gòu)成一個(gè)自展值為99%的分支；AN2和AN8與抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)構(gòu)成自展值為100%的獨(dú)立分支，又與短棘異尖線(xiàn)蟲(chóng)構(gòu)成一個(gè)自展值為99%的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)分支，AN10和AN11與典型異尖線(xiàn)構(gòu)成自展值為100%的獨(dú)立分支。

3 討論

圖5 基于ITS序列與以最大似然法構(gòu)建的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)

本次調(diào)查研究的樣本來(lái)自36個(gè)國(guó)家和地區(qū)，涵蓋大西洋、太平洋和印度洋，具有代表性。調(diào)查結(jié)果與其他學(xué)者的調(diào)查研究相符合，如簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)多分布在中高緯度地區(qū)［12-13］，而本次調(diào)查中來(lái)自新西蘭、加拿大、塞班、中國(guó)臺(tái)灣的樣本多為簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)；典型異尖線(xiàn)蟲(chóng)廣泛分布于熱帶地區(qū)［14-15］，來(lái)自孟加拉和澳大利亞的樣本多為典型異尖線(xiàn)蟲(chóng)；抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)則來(lái)自于加拿大和新西蘭的樣本，豐富了抹香鯨異尖線(xiàn)蟲(chóng)地理分布的數(shù)據(jù)。不同品種海魚(yú)的感染率也各不相同，鯛魚(yú)、石斑魚(yú)、比目魚(yú)、鯧魚(yú)等的感染率較高，與本次調(diào)查的結(jié)果相符，同時(shí)在馬鮫魚(yú)、紅魚(yú)、金槍魚(yú)、珍鲹魚(yú)、鰣魚(yú)體內(nèi)發(fā)現(xiàn)了異尖線(xiàn)蟲(chóng)的存在。

異尖線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)體較大，體壁厚，活體時(shí)在水中作波浪形運(yùn)動(dòng)，較其他線(xiàn)蟲(chóng)活躍。大多數(shù)可以從外觀與其他線(xiàn)蟲(chóng)區(qū)分開(kāi)。但異尖線(xiàn)蟲(chóng)種內(nèi)以形態(tài)特征來(lái)鑒定線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)是很困難的，往往只能鑒定到屬。1961年Berland［16］首次將異尖屬線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)分為Ⅰ型和Ⅱ型兩個(gè)型。1968年Otsuru等［17］報(bào)道了Ⅲ型幼蟲(chóng)的存在，描述Ⅲ型幼蟲(chóng)和Ⅰ型幼蟲(chóng)形態(tài)上的區(qū)別只是胃長(zhǎng)短的區(qū)別。但本研究在做異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)形態(tài)鑒定的時(shí)候，發(fā)現(xiàn)Ⅲ型幼蟲(chóng)和Ⅰ型幼蟲(chóng)在形態(tài)上很難區(qū)分。因此，本研究采用了先用形態(tài)學(xué)鑒定做篩查，后結(jié)合分子生物學(xué)檢測(cè)和序列分析的方法，該方法更能迅速、準(zhǔn)確和特異地鑒定異尖線(xiàn)蟲(chóng)。

本次調(diào)查研究中，10批海魚(yú)感染了異尖線(xiàn)蟲(chóng)三期幼蟲(chóng)，其中包括5批次A. simplexs.s.和1批次派氏異尖線(xiàn)蟲(chóng)，而這兩種簡(jiǎn)單異尖線(xiàn)蟲(chóng)幼蟲(chóng)是人類(lèi)異尖線(xiàn)蟲(chóng)病的最主要病原，說(shuō)明進(jìn)口的海魚(yú)中存在使消費(fèi)者患異尖線(xiàn)蟲(chóng)病的風(fēng)險(xiǎn)。盡管烹飪和冷凍可以使異尖線(xiàn)蟲(chóng)蟲(chóng)體死亡，但此方法不能破壞蟲(chóng)體的過(guò)敏蛋白［18］，從而存在著廣泛的致過(guò)敏反應(yīng)，需要消費(fèi)者提高警惕。近年，隨著國(guó)內(nèi)生食魚(yú)肉的風(fēng)氣越來(lái)越盛，感染異尖線(xiàn)蟲(chóng)病的風(fēng)險(xiǎn)也在急劇增加，因此，口岸應(yīng)該加強(qiáng)對(duì)來(lái)自異尖線(xiàn)蟲(chóng)高感染率海域和易感魚(yú)種的進(jìn)境風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并提高進(jìn)境口岸樣品抽查檢測(cè)力度，為人民群眾的身體健康保駕護(hù)航。

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（責(zé)任編輯 崔建勛）

Identification on the infection of Anisakis from marine fishes imported by Baiyun Airport

HUANG Yan-qiong1，ZHANG Sen2，HE Shu-hua1，YAO Jing-wen1，DAI Jin1，DENG Yan1，BAI Jan-shan1
（1.State Key Testing Laboratory of Aquatic Products，Guangzhou Airport Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Guangzhou 510470，China； 2.School of Food Science and Technology，South China University of Technology，Guangzhou 510640，China）

214 batches of marine fish imported in 2012-2015 from Baiyun Airport in Guangzhou were examined forAnisakislarvae by dissection and digest. 10 batches ofAnisakislarvae were isolated from marine fishes by enzymatic degradation. SomeAnisakislarvae isolated from imported marine fish were identified via morphology as the third larvae ofAnisakisType I and the rest were identified as the third larvae ofAnisakisType Ⅱ. Sequencing and phylogenetic analysis of the ribosomal internal transcribed spacer （ITS） gene identified nematodes asA. simplex，A. physeterisandA. typica. The study has an important impact on the public health risk assessment，and also provides the reference for food safety risk assessment of imported marine fish and aquatic products.

Anisakis； morphological identification； PCR amplification； sequence analysis

S851.34+5.2

A

1004-874X（2017）04-0146-06

黃燕瓊，張森，何淑華，等.廣州白云機(jī)場(chǎng)口岸入境海魚(yú)感染異尖線(xiàn)蟲(chóng)鑒定研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（4）：146-151.

2017-02-23

廣東省科技廳科技專(zhuān)項(xiàng)（2014A040401063）

黃燕瓊（1979-），女，獸醫(yī)師，E-mail：1012502668@qq.com

柏建山（1976-），男，博士，高級(jí)獸醫(yī)師，E-mail：57205984@qq.com