金 鑫，李文治，何文江，陳祖琴，黃文麗

（1.四川省農(nóng)科院生物技術(shù)核技術(shù)研究所，四川 成都 610066；2.無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529156）

不同靈芝菌株的農(nóng)藝性狀和藥效成分特異性研究

金 鑫1，李文治2，何文江2，陳祖琴1，黃文麗1

（1.四川省農(nóng)科院生物技術(shù)核技術(shù)研究所，四川 成都 610066；2.無限極（中國）有限公司，廣東 江門 529156）

為了滿足四川地區(qū)芝農(nóng)對(duì)靈芝主栽品種的選擇要求，通過對(duì)5個(gè)靈芝菌株的栽培性狀、子實(shí)體特性、多糖和三萜含量進(jìn)行分析比較，篩選出最佳菌株。利用段木栽培，對(duì)靈芝子實(shí)體農(nóng)藝性狀進(jìn)行差異分析，再結(jié)合子實(shí)體內(nèi)多糖和三萜含量進(jìn)行綜合分析。結(jié)果表明，從菌絲長(zhǎng)勢(shì)來看，SLZ-32表現(xiàn)最佳，平均生長(zhǎng)速度達(dá)到4.49 mm/d，菌絲外觀濃密、整齊、潔白；從產(chǎn)量和子實(shí)體農(nóng)藝性狀來看，SLZ-78菌蓋直徑最大為15.79 cm，轉(zhuǎn)化率最大達(dá)到1.32%，表現(xiàn)最好；SLZ-31多糖含量最高為2.45%，SLZ-32三萜含量最高為1.06%，綜合子實(shí)體農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量和藥效成分篩選出SLZ-32為最佳菌株。芝農(nóng)可以根據(jù)市場(chǎng)的不同需求栽培合適的靈芝品種。

靈芝；段木栽培；農(nóng)藝性狀；藥效成分

靈芝是我國傳統(tǒng)的食藥用真菌，素有“仙草”之譽(yù)，具有防癌、抗癌、抗衰老等功效［1-2］，自古至今在中醫(yī)藥界享有極高美譽(yù)。近年來，靈芝的開發(fā)利用越來越受到重視，靈芝產(chǎn)品的消費(fèi)量迅速增長(zhǎng)。由于野生靈芝資源數(shù)量有限，因此人工栽培靈芝的規(guī)模越來越大，靈芝的人工栽培技術(shù)已成為當(dāng)前的研究重點(diǎn)，闊葉段木栽培為靈芝的傳統(tǒng)生產(chǎn)方式［3］。

目前，國內(nèi)栽培的靈芝品種非常豐富，同一靈芝品種在不同基質(zhì)中生長(zhǎng)，其子實(shí)體農(nóng)藝性狀以及營養(yǎng)成分和活性物質(zhì)都會(huì)有很大差異［4-5］。謝麗源等［6］利用青杠、厚樸、桑枝作為靈芝的栽培基質(zhì)，結(jié)果表明不同的栽培基質(zhì)，其靈芝子實(shí)體內(nèi)粗多糖和三萜含量有較明顯差異。鮑文輝等［7］采用不同樹種原木、混合木屑3種培養(yǎng)基質(zhì)進(jìn)行靈芝栽培，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以櫟樹栽培的靈芝子實(shí)體性狀最好，而以混合木屑栽培的靈芝產(chǎn)量最高，靈芝酸成分含量最高。栽培方式不同，同一個(gè)靈芝品種子實(shí)體性狀和活性成分差異較大［8］。袁學(xué)軍等［9］通過5種不同栽培方式對(duì)靈芝活性成分進(jìn)行了研究，結(jié)果表明椰糠栽培的靈芝多糖含量最高，太白山栽培的靈芝多糖含量最低。不同靈芝品種采用相同的栽培技術(shù)和原料，其生長(zhǎng)特性、商品性狀和藥效成分含量等方面差異較大［10-12］。羅瑩等［13］比較了6個(gè)靈芝菌株的栽培特性，發(fā)現(xiàn)菌絲生長(zhǎng)速度較慢的靈芝其產(chǎn)量和商品性狀反而較好；肖自添等［14］對(duì)28個(gè)靈芝菌株進(jìn)行品比研究，發(fā)現(xiàn)不同靈芝菌株的栽培特性差異較大，靈芝菌株的優(yōu)劣不僅與栽培特性有關(guān)，還與其品質(zhì)存在較大關(guān)系。筆者采用段木栽培方式，在四川地區(qū)對(duì)5個(gè)靈芝菌株進(jìn)行品比試驗(yàn)，旨在了解其栽培特性和藥效成分含量，以期篩選出適合本地區(qū)栽培的優(yōu)良菌株。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株來源 5個(gè)靈芝菌株來源，SLZ-3采集于攀枝花仁和區(qū)、SLZ-22來自泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院、SLZ-31來自于福建農(nóng)科院、SLZ-32來自于四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院、SLZ-78來自于無限極（中國）有限公司。

1.1.2 培養(yǎng)基質(zhì) 母種培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，瓊脂20 g，磷酸二氫鉀3 g，硫酸鎂1.5 g，加水至1 L。原種培養(yǎng)基：玉米粒98%，石膏2%。栽培種培養(yǎng)基：棉籽殼60%，玉米芯15%，雜木屑15%，麩皮8%，蔗糖1%，石膏1%。試驗(yàn)地點(diǎn)為四川省德陽市食用菌專家大院，時(shí)間為2015年1～8月。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菌種及段木準(zhǔn)備 菌種：將棉籽殼、玉米芯、麩皮、石膏、蔗糖按以上配方混勻，加水調(diào)和，含水量為65%。栽培基質(zhì)配好拌勻后裝袋，栽培菌包規(guī)格為17 cm×33 cm×0.005 cm的聚乙烯塑料袋，裝栽培料干重0.5 kg，于常壓滅菌15 h。

段木：選用青岡木，砍伐后的樹木剔除細(xì)小枝條，選取10～18 cm的主、側(cè)枝，存放于陰涼地方，防止陽光直射。在砍伐5～15 d內(nèi)，將原木截成長(zhǎng)15 cm的段木，裝入30 cm×42 cm× 0.005 cm低壓聚乙烯有底菌袋內(nèi)。

1.2.2 段木接種 滅菌后待菌袋溫降至30℃以下，無菌條件下接種，每個(gè)處理500 kg，3次重復(fù)。

1.2.3 發(fā)菌期管理 將接種后的菌袋及時(shí)放入發(fā)菌室進(jìn)行管理，發(fā)菌溫度為20～25℃，濕度為55%～65%，保持室內(nèi)清潔衛(wèi)生，每天觀察記錄菌絲生長(zhǎng)情況，及時(shí)清除污染菌棒。當(dāng)段木外表已全部布滿靈芝菌絲體后，弱光下培養(yǎng)25 d，段木間菌絲連接緊密，段木表面出現(xiàn)部分紅褐色菌被，段木輕壓微軟有彈性，部分菌棒有芝芽形成，這樣的段木發(fā)菌達(dá)到成熟，可以覆土出芝。

1.2.4 出芝管理 菌棒覆土應(yīng)按菌棒大小排列，為讓靈芝生長(zhǎng)整齊，對(duì)不同直徑的菌棒分別進(jìn)行排放。菌棒橫埋畦中，菌棒間距5 cm，行距10 cm，邊排菌棒邊覆土，覆土厚3 cm，并使菌棒上表面處在一個(gè)水平面上，菌棒間填滿泥土，整廂覆土完畢，打開噴灌，將泥土徹底澆濕。溫度控制在25～28℃之間，并保持土壤濕潤(rùn)含水量為30%～40%，空氣濕度為80%～90%，定期通風(fēng)，觀測(cè)子實(shí)體的農(nóng)藝性狀。

1.2.5 測(cè)定方法 多糖含量測(cè)定：不同品種（菌株）的靈芝子實(shí)體粉碎后，稱取30 g靈芝樣品，料液比1∶60，100℃浸提1 h，浸提兩次，合并濾液，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，再通過苯酚硫酸法測(cè)定多糖含量［15］

三萜含量測(cè)定：稱取20 g靈芝樣品，按1∶20的料液比加入95%乙醇，攪拌混勻后，300W（30%）超聲1 h，超聲完成后浸泡8 h，抽濾獲得靈芝三萜提取液。以熊果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用香草醛-冰醋酸法測(cè)定三萜含量［16］。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同靈芝菌株的菌絲生長(zhǎng)情況比較

從表1可以看出，菌絲生長(zhǎng)速度最快的為SLZ-32，其次是SLZ-22、SLZ-31、SLZ-3、SLZ-78，5個(gè)菌株之間都存在顯著差異，SLZ-78菌絲生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)落后于其他菌株。從菌絲外觀、長(zhǎng)勢(shì)上看，SLZ-32菌絲生長(zhǎng)濃密、整齊、潔白，且菌絲生長(zhǎng)速度最快，菌絲長(zhǎng)勢(shì)情況也最佳。

表1 不同品種靈芝菌絲生長(zhǎng)情況

2.2 不同菌株靈芝子實(shí)體性狀及產(chǎn)量的影響

從表2可以看出，5個(gè)菌株的菌蓋直徑相互都存在顯著差異，菌蓋最大為SLZ-22。菌蓋大是因?yàn)樵诰L(zhǎng)期間，一個(gè)菌棒上長(zhǎng)出2～3個(gè)菌柄，在菌蓋分化期時(shí)未進(jìn)行修芝，多個(gè)菌蓋長(zhǎng)在一起，導(dǎo)致整個(gè)菌蓋較大，產(chǎn)量卻最低。SLZ-31菌蓋直徑最小，菌柄長(zhǎng)度也最短，產(chǎn)量也較低，但該菌株出芝較快，成熟得也較早，產(chǎn)孢量最大。SLZ-3在菌蓋直徑、厚度、菌柄長(zhǎng)度、產(chǎn)量等性狀上都表現(xiàn)一般，然而該菌株每個(gè)菌柄上都只生長(zhǎng)1朵靈芝，不會(huì)出現(xiàn)連芝現(xiàn)象，外觀整齊，色澤較好，適合嫁接制作盆景。SLZ-32覆土后出芝較晚，會(huì)出現(xiàn)較多連芝現(xiàn)象，菌蓋厚度最小，外觀形狀最差。SLZ-78覆土后出芝較快，菌蓋直徑、菌柄長(zhǎng)度表現(xiàn)一般，其厚度、產(chǎn)量最高，外觀形狀及色澤表現(xiàn)較好。圖1為各菌株子實(shí)體生長(zhǎng)情況圖。

表2 不同菌株靈芝子實(shí)體性狀及產(chǎn)量比較

2.3 不同菌株靈芝子實(shí)體內(nèi)多糖和三萜含量比較

圖1 5個(gè)靈芝菌株的子實(shí)體

多糖和三萜作為靈芝的主要活性成分，是衡量靈芝質(zhì)量的重要指標(biāo)。不同菌株生物活性多糖和三萜的含量由于菌種特性、培養(yǎng)條件及氣候環(huán)境的不同而存在差異。對(duì)采收5個(gè)靈芝子實(shí)體烘干粉碎，然后進(jìn)行多糖和三萜化合物的提取測(cè)量。從圖2可以看出，SLZ-31多糖含量最高、為2.45%，SLZ-3多糖含量最低、為1.80%，SLZ-32三萜含量最高、為1.06%，最低為SLZ-78，三萜含量?jī)H為0.55%。從圖2可以看出，不同子實(shí)體內(nèi)多糖和三萜含量不會(huì)出現(xiàn)協(xié)同關(guān)系，綜合來看，SLZ-31內(nèi)多糖和三萜活性成分最佳。

圖2 不同靈芝菌株子實(shí)體內(nèi)多糖和三萜含量比較

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)對(duì)5個(gè)靈芝菌株進(jìn)行品比篩選試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)SLZ-22和SLZ-32菌株的菌絲生長(zhǎng)速度較快，SLZ-32菌絲長(zhǎng)勢(shì)最好。5個(gè)菌株覆土后出芝時(shí)間不統(tǒng)一，發(fā)現(xiàn)并不是菌絲生長(zhǎng)速度快的菌株出芝就快，子實(shí)體的產(chǎn)量與菌絲的生長(zhǎng)速度不存在正相關(guān)，但菌絲生長(zhǎng)初期長(zhǎng)勢(shì)差、速度慢在栽培過程中易被污染。盡管SLZ-78菌絲生長(zhǎng)速度最慢，但其子實(shí)體農(nóng)藝性狀表現(xiàn)較好，產(chǎn)量也最高。5個(gè)菌株中產(chǎn)量高低順序?yàn)镾LZ-78＞SLZ-32＞SLZ-3＞SLZ-31＞SLZ-32。綜合菌絲生長(zhǎng)速度、長(zhǎng)勢(shì)、農(nóng)藝性狀、色澤、產(chǎn)量、分支情況等發(fā)現(xiàn)SLZ-78在5個(gè)菌株中綜合表現(xiàn)較佳，適合在四川地區(qū)推廣。

5個(gè)菌株子實(shí)體內(nèi)多糖含量大小順序?yàn)镾LZ-31＞SLZ-78＞SLZ-32＞SLZ-22＞SLZ-3，三萜化合物含量大小順序?yàn)镾LZ-32＞SLZ-3＞SLZ-31＞SLZ-22＞SLZ-78，靈芝菌絲體的生長(zhǎng)速度與子實(shí)體產(chǎn)量、多糖和三萜含量之間沒有直接相關(guān)性，菌絲體生長(zhǎng)快，其子實(shí)體產(chǎn)量和藥效成分含量不一定高，只有對(duì)靈芝菌株的各項(xiàng)農(nóng)藝性狀和活性成分指標(biāo)進(jìn)行綜合權(quán)衡才能最終確定優(yōu)勢(shì)菌株，芝農(nóng)可以根據(jù)要求而選擇合適的菌株。

此前研究發(fā)現(xiàn)，不同靈芝品種在相同的地點(diǎn)和以相同的管理方式栽培，其子實(shí)體外觀性狀和多糖含量存在較大差異［17-18］，這與本研究結(jié)果相似。出現(xiàn)這種差異最有可能是由于菌種特性不同而引起的，菌種特性在一定程度上影響靈芝子實(shí)體的特性，至于如何影響還有待進(jìn)一步研究。目前，靈芝品種選育和栽培優(yōu)化試驗(yàn)通常以農(nóng)藝性狀為主，忽視其藥效品質(zhì)指標(biāo)，因而以后在進(jìn)行靈芝優(yōu)良品種的篩選時(shí)要平衡子實(shí)體的各優(yōu)良性狀以及其藥效成分進(jìn)行綜合確定，從而獲得藥效品質(zhì)與農(nóng)藝性狀俱佳的靈芝新品種和栽培新技術(shù)。

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（責(zé)任編輯 白雪娜）

Agronomic traits and bioactive compounds of different strains of Ganoderma lucidum

JIN Xin1，LI Wen-zhi2，HE Wen-jiang2，CHEN Zu-qin1，HUANG Wen-li1
（1.Institute of Biological and Nuclear Technology，Sichuan Academy of Agricultural Sciences，Chengdu 610066，China；2.Research & Development Centre，Infinitus （China） Company Ltd，Jiangmen 529156，China）

In order to meet the requirements of main varieties ofGanoderma lucidumin Sichuan area，through studing the cultivation characteristics，characteristics of fruiting bodies，polysaccharide and content of three terpene ofGanoderma lucidumstrains，the best strains were screened out in the paper. The differences of agronomic characters ofG. lucidumfruiting body were analyzed by the method of section wood cultivation，and then the contents of polysaccharide and three terpene were analyzed. The results showed that for growth of hyphae， SLZ-32 had the best performance，the average growth rate reached 4.49 mm/d，and the appearance of hyphas was dense，neat and white. The output and agronomic traits of fruiting showed that SLZ-78，pileus diameter was 15.79 cm，the maximum conversion rate reached 1.32%. SLZ-78 had the best performance. The highest polysaccharide content was 2.45% in SLZ-31，the highest three terpene content was up to 1.06% in SLZ-32. Through comparing the fruiting body agronomic characters，output and efficacy components，SLZ-32 was the best strain. Accordingly，G. lucidumfarmers can cultivate suitable varieties according to the demands of different market.

Ganoderma lucidum；section wood cultivation；agronomic traits；bioactive compounds

S567.3+1

A

1004-874X（2017）04-0019-05

金鑫，李文治，何文江，等. 不同靈芝菌株的農(nóng)藝性狀和藥效成分特異性研究［J］.廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，44（4）：19-23.

2017-02-24

無限極（中國）有限公司合作項(xiàng)目（HPG/2014/09/1091）

金鑫（1985-），男，碩士，研究實(shí)習(xí)員，E-mail：1535002186@qq.com

黃文麗（1983-），女，博士，助理研究員，E-mail：27826477@qq.com