蘭玉菲，安秀榮，王慶武，唐麗娜

（泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 泰安 271000）

雙孢蘑菇蛛網(wǎng)病病菌生物學(xué)特性研究*

蘭玉菲，安秀榮，王慶武，唐麗娜

（泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東 泰安 271000）

研究結(jié)果表明雙孢蘑菇蛛網(wǎng)病病原Cladobotryum mycophilum菌絲最適生長(zhǎng)條件為溫度25℃，pH5，最適碳源為蔗糖，最適氮源為蛋白胨和牛肉膏。菌絲的致死溫度為49℃。

雙孢蘑菇；蛛網(wǎng)病病原；生物學(xué)特性

雙孢蘑菇（Agaricus bisporus） 是全世界廣泛消費(fèi)的食用菌，也是目前世界上栽培最廣泛、年產(chǎn)量最高的食用菌，在全世界的70多個(gè)國(guó)家和地區(qū)進(jìn)行栽培[1]。

近年來(lái)，雙孢蘑菇蛛網(wǎng)病在歐洲、美國(guó)、澳大利亞和韓國(guó)等大面積發(fā)生并造成嚴(yán)重的損失[2]。2014年，在鄒城雙孢菇工廠化廠房?jī)?nèi)發(fā)現(xiàn)類似蛛網(wǎng)病的病害，該病害首先在覆土層表面長(zhǎng)出絨毛狀的菌絲體，并逐漸沿菌柄向菌蓋蔓延。病原菌菌絲體漸呈棉絮狀，同時(shí)產(chǎn)生大量孢子，發(fā)病雙孢蘑菇子實(shí)體出現(xiàn)褐色斑點(diǎn)，最后腐爛。通過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定其病原為Cladobotryum mycophilum (teleomorph Hypomyces odoratus)，在國(guó)內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)該病原引起雙孢蘑菇蛛網(wǎng)病[3]。本研究進(jìn)一步對(duì)該病原菌的生物學(xué)特性進(jìn)行研究，以期為該病害發(fā)生規(guī)律和綜合防治措施的制定提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株為泰安市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院實(shí)驗(yàn)室分離的病原菌ZC。

1.2 培養(yǎng)基

1．2．1 PDA培養(yǎng)基

馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂粉20 g，水定容至1 L。

1．2．2 基礎(chǔ)培養(yǎng)基

葡萄糖20 g、蛋白胨10 g、磷酸二氫鉀1 g、硫酸鎂0．5 g、瓊脂粉20 g，水定容至1 L。

1.3 溫度對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響

病原菌ZC菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)6 d后，用打孔器打取菌落，然后接種到PDA平板上并分別置于15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃下黑暗培養(yǎng)，每個(gè)處理5次重復(fù)。采用“十字交叉”法測(cè)量菌落直徑，計(jì)算菌絲日生長(zhǎng)速度并進(jìn)行方差分析。具體方法參照文獻(xiàn)[4]。

1.4 pH對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響

用HCl或NaOH溶液將PDA培養(yǎng)基的pH分別調(diào)節(jié)成4～10，并制成平板，接入菌絲塊置于25℃恒溫黑暗培養(yǎng)。結(jié)果測(cè)量和分析方法同1．3。

1.5 碳源篩選試驗(yàn)

按照基礎(chǔ)培養(yǎng)基的配制方法，分別用蔗糖、麥芽糖、乳糖、果糖替代葡萄糖。制成平板后分別接入菌絲塊，25℃恒溫黑暗培養(yǎng)，每個(gè)處理5次重復(fù)。結(jié)果測(cè)量和分析方法同1．3。

1.6 氮源篩選試驗(yàn)

供試氮源分別為蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、硫酸銨、硝酸銨，試驗(yàn)方法同1．5。

1.7 病原菌菌絲致死溫度的測(cè)定

參照文獻(xiàn)[5]的方法，取培養(yǎng)好的新鮮菌絲分裝于離心管中水浴10 min，水浴溫度分別設(shè)為35℃、40℃、45℃、50℃、55℃和60℃，無(wú)菌條件下將水浴處理的菌絲塊移至PDA平板培養(yǎng)基上，25℃黑暗培養(yǎng)，每個(gè)處理5次重復(fù)。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步按1℃梯度設(shè)計(jì)溫度梯度，進(jìn)行相同處理，確定菌絲的致死溫度。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響

不同溫度對(duì)ZC菌株菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表1。

表1 不同溫度對(duì)ZC菌株菌絲生長(zhǎng)的影響Tab．1 Effect of different temperature on mycelia growth of ZC strain

試驗(yàn)結(jié)果表明，該病原菌菌絲在15℃～30℃條件下均可生長(zhǎng)，25℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)最快，達(dá)0．73 cm·d-1，且長(zhǎng)勢(shì)好，其次為20℃，兩者菌絲生長(zhǎng)速度差異顯著；15℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)一般，長(zhǎng)勢(shì)較弱；30℃培養(yǎng)6 d菌絲剛萌發(fā)；35℃以上菌絲停止生長(zhǎng)。該病原菌適宜生長(zhǎng)溫度為20℃～25℃，最適溫度為25℃。

2.2 不同pH對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響

不同pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)圖1。

圖1 pH對(duì)ZC菌株菌絲生長(zhǎng)的影響Fig．1 Effect of pH on mycelia growth of ZC strain

從圖1中可以看出，病原菌菌絲在pH4～10范圍內(nèi)均能生長(zhǎng)，pH為5時(shí)菌絲生長(zhǎng)最快，日生長(zhǎng)速度達(dá)0．85 cm·d-1，且長(zhǎng)勢(shì)好，其次是pH8、pH6和pH7，pH為4時(shí)菌絲長(zhǎng)勢(shì)弱，pH大于9時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度明顯減慢。因此確定該病原菌生長(zhǎng)的適宜pH為5～8，最適pH為5。

2.3 不同碳源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響

不同碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表2。

表2 不同碳源對(duì)ZC菌株菌絲生長(zhǎng)的影響Tab．2 Effect of carbon sources on mycelia vigor of ZC strain

試驗(yàn)結(jié)果表明，病原菌可利用供試的5種碳源。在以乳糖為碳源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最快，達(dá)0．69 cm·d-1，但菌絲長(zhǎng)勢(shì)差；在以蔗糖為碳源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)較乳糖稍慢，為0．66 cm·d-1，菌絲濃密、健壯，長(zhǎng)勢(shì)好，兩者菌絲生長(zhǎng)速度差異不顯著；其次是果糖和葡萄糖，菌絲生長(zhǎng)速度分別為0．63 cm·d-1和0．61 cm·d-1；在以麥芽糖為碳源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)最慢，僅為0．56 cm·d-1。綜合菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲長(zhǎng)勢(shì)，該病原菌菌絲生長(zhǎng)最適宜的碳源為蔗糖。

2.4 不同氮源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響

不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響見(jiàn)表3。

表3 不同氮源對(duì)ZC菌株菌絲生長(zhǎng)的影響Tab．3 Effect of nitrogen sources on mycelia vigor of ZC strain

試驗(yàn)結(jié)果表明，在以蛋白胨為氮源的培養(yǎng)基上病原菌菌絲生長(zhǎng)最快，達(dá)到0．60 cm·d-1，且菌絲粗壯，長(zhǎng)勢(shì)好，其次為牛肉膏，為0．59 cm·d-1，病原菌在上述2種氮源上菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)差異均不顯著；在以酵母膏和NH4NO3為氮源的培養(yǎng)基上菌絲濃密健壯，但生長(zhǎng)速度較慢；在以 (NH4)2SO4為氮源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)速度最慢，長(zhǎng)勢(shì)也較差。說(shuō)明菌絲生長(zhǎng)適宜的氮源為蛋白胨和牛肉膏。

2.5 病原菌菌絲致死溫度

病原菌C.mycophilum菌絲在35℃～45℃水浴處理10 min后能夠在PDA培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)，但當(dāng)溫度高于50℃時(shí)均不能生長(zhǎng)。進(jìn)一步在45℃～50℃范圍內(nèi)按1℃梯度設(shè)計(jì)6個(gè)溫度梯度，處理后發(fā)現(xiàn)45℃、46℃、47℃和48℃水浴處理的菌絲能夠繼續(xù)生長(zhǎng)，而49℃、50℃水浴處理的菌絲不能生長(zhǎng)。由此確定病原菌菌絲的致死溫度是49℃。

3 討論

蛛網(wǎng)病是由Cladobotryum屬或者Hypomyces屬真菌侵染引起的食用菌病害，已對(duì)雙孢蘑菇生產(chǎn)造成了重大損失。該病害可為害多種食用菌，已在歐洲、美洲和亞洲等地區(qū)都有報(bào)道[6]。前人研究結(jié)果表明C.mycophilum可以為害雙孢蘑菇[2，7]、杏鮑菇[8-9]、靈芝[10]等，食用菌生產(chǎn)者和管理部門都應(yīng)該引起高度重視。

C.mycophilum菌絲生長(zhǎng)速度極快，且易產(chǎn)生大量的孢子，傳播速度快，一旦發(fā)病很難控制。

本文對(duì)引起中國(guó)雙孢蘑菇蛛網(wǎng)病的病原C.mycophilum進(jìn)行生物學(xué)特性研究，結(jié)果表明C.mycophilum菌絲體最適生長(zhǎng)溫度為25℃，最適pH為5，最適碳源為蔗糖，最適氮源為蛋白胨和牛肉膏，菌絲致死溫度為49℃。研究結(jié)果能夠?yàn)樯钊胙芯吭摬『Φ陌l(fā)生規(guī)律、流行動(dòng)態(tài)及綜合防治提供理論參考。

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Biological Characteristics of Cladobotryum mycophilum Causing Cobweb Disease on Agaricus bisporus

LAN Yu-fei,AN Xiu-rong,WANG Qing-wu,TANG Li-na
(Tai'an Academy of Agricultural Sciences,Tai'an 271000,China)

The biological test showed that the optimum culture conditions for the Cladobotryum mycophilum were 25°C,pH5, sucrose as carbon source and peptone and beef extract as nitrogen source．The lethal temperature was 49℃for hypha of C.mycophilum.

Agaricus bisporus;Cladobotryum mycophilum;biological characteristics

S646.1

A

1003-8310（2017）04-0062-04

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．04．015

山東省食用菌創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)病蟲害防控與質(zhì)量控制崗位（SDAIT-07-04）；國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)（食用菌）產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)專項(xiàng)（CARS-24）。

蘭玉菲（1980-），女，博士，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事食（藥）用菌遺傳多樣性分析、新品種選育、馴化栽培、病蟲害防控及技術(shù)開(kāi)發(fā)推廣。E-mail:lanyufei526＠163．com

2017-05-13