郭 尚，徐莉娜，張生萬(wàn)，李艷婷，周 林，劉曉鋼

（1．山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西 太原 030031；2．山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西 太原 030006；3．山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，山西 晉中 030801）

山西木耳蘑學(xué)名考證*

郭 尚1，徐莉娜2，張生萬(wàn)2，李艷婷1，周 林1，劉曉鋼3

（1．山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所，山西 太原 030031；2．山西大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，山西 太原 030006；3．山西農(nóng)業(yè)大學(xué)，山西 晉中 030801）

“木耳蘑”是一種比較好吃的野生子囊菌，在新疆南部和山西北部頗為著名，味道鮮美，質(zhì)地細(xì)膩，在可食的子囊菌中屬上乘之品，但因其學(xué)名比較混亂，給同類研究帶來(lái)諸多不便。采用形態(tài)分類學(xué)和分子生物學(xué)相結(jié)合的方法對(duì)其進(jìn)行分類學(xué)鑒定，證明“木耳蘑”的學(xué)名是棱柄馬鞍菌（Helvella lacunosa）。

山西??；子囊菌；木耳蘑；棱柄馬鞍菌

“木耳蘑”是新疆南部和山西北部常見(jiàn)的野生食用菌，味道鮮美，因菌蓋與木耳相似而得名[1]。目前該菌尚處于野生狀態(tài)。根據(jù)其形態(tài)特征初步鑒定為棱柄馬鞍菌（Helvella lacunosa）。木耳蘑在世界各地均有分布，每年8月中下旬至9月上旬單生、散生或群生于腐殖落葉層[2]。因木耳蘑迄今為止未被馴化成功，隨著人們對(duì)具有特殊香味和鮮味木耳蘑的逐步認(rèn)識(shí)，市場(chǎng)需求量日益增加，價(jià)格大幅升高，致使農(nóng)民野外采集度增高，導(dǎo)致木耳蘑野生數(shù)量急劇減少，這種狀況嚴(yán)重威脅木耳蘑物種的存亡。

近年來(lái)國(guó)內(nèi)有部分研究單位對(duì)木耳蘑進(jìn)行分類鑒定研究。因其外部形態(tài)特征和皺馬鞍菌相似，而被鑒定為皺白馬鞍菌或棱柄白馬鞍菌。圖力古爾在編撰《中過(guò)毒蘑菇名錄》的過(guò)程中，將Helvella crisp（Scop．）Fr．的學(xué)名由棱柄馬鞍菌訂正為皺柄白馬鞍菌[3]；圖力古爾教授的學(xué)生康國(guó)平把Helvella crisp（Bull&Herb）Fr．鑒定為棱柄馬鞍菌[4]；李玉教授的學(xué)生陳越渠把Helvella crisp（Bull&Herb）Fr．鑒定為棱柄白馬鞍菌，把Helvella lacunosa Afzel．鑒定為棱柄馬鞍菌[5]；戴玉成等把Helvella crisp（Scop．）Fr．鑒定為皺馬鞍菌[6]，把Helvella lacunosa Afzel．鑒定為棱柄馬鞍菌[7]，至今木耳蘑有相當(dāng)多的名稱，較為混亂，因此有必要對(duì)其名稱進(jìn)行考證。

近年筆者和馬鞍菌課題組成員對(duì)采自山西省境內(nèi)的馬鞍菌屬樣品進(jìn)行了生態(tài)環(huán)境因子調(diào)查，觀察子實(shí)體形態(tài)以及孢子的微觀形態(tài)，并通過(guò)分子生物學(xué)方法對(duì)子實(shí)體DNA進(jìn)行ITS測(cè)序，采用形態(tài)學(xué)與分子學(xué)相結(jié)合的方法對(duì)木耳蘑進(jìn)行菌種鑒定。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

形態(tài)學(xué)鑒定和分子測(cè)序所用材料均采自于山西省蘆芽山，標(biāo)本保存于山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所菌種庫(kù)（編號(hào)：SYJ-X2016-1）。

1.2 顯微觀察

顯微結(jié)構(gòu)觀察方法參照文獻(xiàn)[8]。

1.3 分子生物學(xué)鑒定

1．3．1 引物設(shè)計(jì)

ITS1（5’-TCC GTA GGT GAA CCT GCGG-3’），ITS4（5’-TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC-3’）。

1．3．2DNA提取

提取方法參照參考文獻(xiàn)[8]。

1．3．3 PCR擴(kuò)增

在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)。

1．3．4 PCR產(chǎn)物的回收

PCR產(chǎn)物用AxyPrep DNA凝膠回收試劑盒回收，具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1．3．5 序列測(cè)定

取各個(gè)菌種純化后的PCR產(chǎn)物，使用測(cè)序儀ABI3730-XL進(jìn)行DNA測(cè)序。

1．3．6 序列分析

用NCBI Blast程序?qū)⑵唇雍蟮男蛄形募cNCBI ribosomal RNA sequence（Bacteria and Archaea） 數(shù)據(jù)庫(kù)中的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)，得到與待測(cè)菌種序列相似性最大的菌種信息，即為鑒定結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 形態(tài)學(xué)特征

子實(shí)體形態(tài)見(jiàn)圖1。

圖1 子實(shí)體形態(tài)Fig．1 Fruiting body morphology

子囊果較小。菌蓋直徑1 cm～4．8 cm，褐色或深褐色，形似馬鞍，表面平整或凸凹不平，布細(xì)小絨毛，邊緣彎曲呈波狀，菌蓋無(wú)菌褶或菌孔，菌肉薄，黑色，與木耳相似。菌蓋邊緣不與菌柄相連，菌柄灰白至灰色，長(zhǎng)1．5 cm～8．8 cm，粗0．4 cm～1 cm，棒狀，下部膨大，具縱向溝槽。氣味和味道較強(qiáng)。

子囊果 (200～280)μm×(14～21)μm，長(zhǎng)棒狀至長(zhǎng)圓柱形，頂端鈍圓，內(nèi)含8個(gè)子囊孢子，單行排列，無(wú)色透明。子囊孢子 (15～22)μm×(10～13) μm，長(zhǎng)橄欖形、橢圓形至寬卵形，光滑，無(wú)色至淺黃色。

2.2 分子生物學(xué)鑒定

2．2．1 PCR產(chǎn)物凝膠電泳

ITS凝膠成像圖見(jiàn)圖2。

圖2 ITS凝膠成像圖Fig．2 Gel-imaging figure of ITS

2．2．2 ITS擴(kuò)增片段序列

ITS擴(kuò)增片段序列（登錄號(hào)：KY865326） 長(zhǎng)度為676個(gè)堿基。

2．2．3 數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)和系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)的建立

將測(cè)序獲得的ITS序列與NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)收錄序列進(jìn)行比對(duì)分析，得到確定種名的近源種，建立系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)，見(jiàn)圖3。

2．2．4 分類鑒定

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)驗(yàn)所選樣本的宏觀形態(tài)特征與棱柄馬鞍菌（Helvella lacunosa）的形態(tài)特征符合[9]；顯微結(jié)構(gòu)方面，木耳蘑除了子囊大小與棱柄馬鞍菌（Helvella lacunosa）有一定差距外，其它顯微特征均一致；從分子生物學(xué)的角度來(lái)說(shuō)，測(cè)序的結(jié)果在NCBI GenBank進(jìn)行Blast比對(duì)，所測(cè)序列與棱柄馬鞍菌 （H.lacunosa） 的 ITS序列 （GenBank ID: KC122820．1） 的query cover達(dá)到了90%，相似度達(dá)100%，分析木耳蘑屬于馬鞍菌屬（Helvella L．）。綜合宏觀形態(tài)、微觀結(jié)構(gòu)和ITS序列，山西木耳蘑鑒定為棱柄馬鞍菌，拉丁學(xué)名為Helvella lacunosa，中文異名為多洼馬鞍菌。棱柄馬鞍菌屬于子囊菌門（Ascomy-cotina） 盤菌綱 （Pezizomycetes） 盤菌目（Pezizales） 馬鞍菌科 （Helvellaceae） 馬鞍菌屬（Helvella）。

圖3 基于ITS構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig．3 Phylogenetic tree using ITS date

3 結(jié)論

棱柄馬鞍菌（H.lacunosa） 俗稱羊肚蘑、木耳蘑，是山西北部常見(jiàn)的極為珍貴的野生食用菌，味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受當(dāng)?shù)厝嗣竦南矏?ài)。分類學(xué)上屬于子囊菌門（Ascomy-cotina） 盤菌綱（Pezizomycetes） 盤菌目（Pezizales） 馬鞍菌科（Helvellaceae）馬鞍菌屬（Helvella）。菌蓋馬鞍形，黑褐色，瓣片不整齊，呈不規(guī)則卷曲狀，與木耳相似。菌柄布溝壑，白色，薄，上小下大。每年4月～5月份于雨后在松樹(shù)林地發(fā)生，此菌現(xiàn)仍處于野生狀態(tài)，沒(méi)有人工馴化栽培成功的報(bào)道。對(duì)于棱柄馬鞍菌的生態(tài)環(huán)境截止目前沒(méi)有研究報(bào)道，而且對(duì)于此菌是否為菌根菌也無(wú)定論。為此筆者以此菌為研究對(duì)象，從分子鑒定開(kāi)始逐步進(jìn)行研究，旨在為開(kāi)發(fā)此菌和人工馴化栽培奠定理論基礎(chǔ)。

[1]戴芳瀾．中國(guó)真菌總匯[J]．北京：科學(xué)出版社，1979：155 -157．

[2]鄭慶珠．亟待開(kāi)發(fā)的一種美味子囊菌--棱柄馬鞍菌的研究[J]．食用菌，1987（6）：1．

[3]圖力古爾，包海鷹，李玉．中國(guó)毒蘑菇名錄[J]．菌物學(xué)報(bào)，2014（3）：517-548．

[4]康國(guó)平．東北地區(qū)市場(chǎng)野生食用菌種類多樣性及資源評(píng)價(jià)[D]．長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011．

[5]陳越渠．吉林老爺嶺大型真菌多樣性研究[D]．長(zhǎng)春：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007．

[6]戴玉成，周麗偉，楊祝良，等．中國(guó)食用菌名錄[J]．菌物學(xué)報(bào)，2010（1）：1-21．

[7]戴玉成，楊祝良．中國(guó)藥用真菌名錄及部分名稱的修訂[J]．菌物學(xué)報(bào)，2008（6）：801-824．

[8]王苗．中國(guó)多洼馬鞍菌（Helvella lacunosa）復(fù)合群物種多樣性研究[D]．昆明：昆明理工大學(xué)，2016．

[9]顧龍?jiān)疲餐?，蒲?xùn)．皺馬鞍菌子囊盤（菌蓋）結(jié)構(gòu)的光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀察[J]．蘭州大學(xué)學(xué)報(bào)，1994（1）：82-86．

《中國(guó)食用菌》聲明

近期，有部分網(wǎng)站盜用《中國(guó)食用菌》期刊的名義，發(fā)布《中國(guó)食用菌》期刊論文，索要審稿費(fèi)或者推薦作者改投他刊，《中國(guó)食用菌》特提醒廣大作者和讀者，目前《中國(guó)食用菌》網(wǎng)站正在建設(shè)中，投稿仍為郵箱投稿，投稿郵箱為zgsyj2005＠163．com，編輯部電話為0871-65151099，以避免上當(dāng)受騙。

本刊受理稿件時(shí)不收取審稿費(fèi)，只有論文被錄用后才收取版面費(fèi)。

中國(guó)食用菌雜志編輯部

2017年7月10日

Critical Comment on“Muer”Mushroom of Shanxi Province

GUO Shang1,XU Li-na2,ZHANG Sheng-wan2,LI Yan-ting1,ZHOU Lin1,LIU Xiao-gang3
(1．Shanxi Academy of Agricultural Sciences,Institute of Edible Fungi,Taiyuan 030031,China;2．College of Life Sciences, Shanxi University,Taiyuan 030006,China;3．Shanxi Agricultural University,Jinzhong 030801,China)

“Muer”mushroom is the local name given to a wild ascomycetes,it is deeply loved by local people in Southern Xinjiang and Northern Shanxi province for its taste and nutrition．However,the mushroom does not have a unified scientific name,which bring some inconvenience to the scholar who do the same research．Although the taxonomic status of this wild edible mushroom is unclear,we suggested that the correct scientific name for“Muer”mushroom is Helvella lacunose based on morphological characteristics and molecular sequences．

Shanxi province;ascomycetes;“Muer”mushroom;Helvella lacunosa

S646.9

A

1003-8310（2017）04-0015-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2017．04．004

2015年新興產(chǎn)業(yè)領(lǐng)軍人才創(chuàng)業(yè)項(xiàng)目。

郭尚（1967-），男，博士，研究員，主要從事野生食用菌馴化栽培工作。E-mail:gs0351＠sohu．com

2017-05-11