王佳佳，趙莎莎，楊最素*，余方苗，丁國(guó)芳（浙江海洋大學(xué)食品與醫(yī)藥學(xué)院，浙江省海洋生物醫(yī)用制品工程技術(shù)研究中心，浙江 舟山 316022）

文蛤寡肽對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用

王佳佳，趙莎莎，楊最素*，余方苗，丁國(guó)芳
（浙江海洋大學(xué)食品與醫(yī)藥學(xué)院，浙江省海洋生物醫(yī)用制品工程技術(shù)研究中心，浙江 舟山 316022）

對(duì)文蛤寡肽（Meretrix meretrix oligopeptides，MMO）在小鼠急性肝損傷中的保護(hù)作用進(jìn)行研究。首先通過酶解、超濾、Sephadex G-25柱分離技術(shù)從文蛤中分離純化出具有肝修復(fù)作用的文蛤寡肽，經(jīng)檢測(cè)該目標(biāo)肽的氨基酸序列為Gln-Leu-Asn-Trp-Asp。然后建立四氯化碳（CCl4）致小鼠急性肝損傷模型，測(cè)定小鼠肝臟指數(shù)；檢測(cè)小鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-glutamyltransferase，γ-GT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活力及甘油三酯（triglyceride，TG）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平；蘇木精-伊紅染色觀察肝臟病理學(xué)改變；免疫組化法測(cè)定肝組織TNF-α、NF-κB蛋白表達(dá)量。結(jié)果表明：MMO組與模型組比較，小鼠肝指數(shù)顯著降低（P＜0.05）；血清中ALT、AST、γ-GT活力顯著降低（P＜0.05），γ-GT活力最高降幅達(dá)到47.16%；SOD活力顯著升高（P＜0.05）；TG、MDA水平顯著降低（P＜0.05），最高降幅分別達(dá)到31.88%和28.83%。；蘇木精-伊紅染色觀察肝組織結(jié)構(gòu)明顯好轉(zhuǎn)；TNF-α、NF-κB蛋白表達(dá)量顯著降低。因此，MMO對(duì)CCl4小鼠急性肝損傷有較為明顯的保護(hù)作用。

文蛤寡肽；四氯化碳；急性肝損傷

文蛤（Meretrix meretrix）俗稱蛤蜊，屬于軟體動(dòng)物門、雙殼綱、真瓣鰓目、簾蛤科文蛤?qū)?，是我?guó)重要的海洋貝類之一，主要產(chǎn)區(qū)在遼寧、河北、山東、江蘇沿海[1]。文蛤肉鮮，營(yíng)養(yǎng)豐富，含有人體必需的各種氨基酸、礦物質(zhì)、維生素和其他重要物質(zhì)[2]。近年來(lái)研究表明文蛤有重要的藥用價(jià)值，在抗腫瘤[3]、抗氧化[4-5]和提高免疫力[6]等方面表現(xiàn)出顯著的功效，是一種極具開發(fā)潛力的海洋藥物來(lái)源。如文蛤多肽Mere15具有較好的廣譜抗癌活性，但對(duì)正常細(xì)胞卻沒有明顯的抑制作用，對(duì)人肺癌移植瘤具有顯著的抑制作用[1]。本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明，文蛤內(nèi)臟經(jīng)酶解獲得的分子質(zhì)量為674.6 D，氨基酸序列為Gln-Leu-Asn-Trp-Asp的文蛤寡肽（Meretrix meretrix oligopeptides，MMO），作用于經(jīng)軟脂酸誘導(dǎo)正常肝Chang liver細(xì)胞建立的非酒精性脂肪性肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）細(xì)胞模型后，能使NAFLD細(xì)胞模型中的丙二醛（malondialdehyde，MDA）含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase，AST）和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（γ-glutamyltransferase，γ-GT）活力下降，超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶的活力上升，對(duì)NAFLD細(xì)胞模型具有明顯的修復(fù)作用。而MMO是否能修復(fù)經(jīng)四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷，改善肝的病理結(jié)構(gòu)變化和肝功能相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)，目前鮮見報(bào)道。因此本實(shí)驗(yàn)通過建立小鼠急性肝損傷模型，經(jīng)灌胃給藥途徑，探討MMO對(duì)小鼠急性肝損傷模型的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑

文蛤，購(gòu)于浙江省舟山市定海南珍菜場(chǎng)。

動(dòng)物用清潔級(jí)雄性ICR小鼠30只，體質(zhì)量（20±2）g，購(gòu)于浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（浙）2015-0001，飼養(yǎng)于浙江海洋大學(xué)動(dòng)物房。

文蛤寡肽，本實(shí)驗(yàn)室自制；CCl4、二甲苯、乙醇國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；植物油 西王集團(tuán)；聯(lián)苯雙酯滴丸 浙江萬(wàn)邦藥業(yè)公司；多聚賴氨酸、伊紅 美國(guó)Sigma公司；ALT、AST、甘油三酯（triglyceride，TG）、γ-GT、MDA、SOD試劑盒及蘇木精染液 南京建成生物工程公司；TNF-α、NF-κB抗體、山羊抗兔IgG/HRP聚合物（二抗）、DAB顯色試劑盒北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

CF16RXⅡ型高速低溫離心機(jī) 日本日立公司；Cogent mScale超濾系統(tǒng) 默克密理博公司；752FC紫外分光光度計(jì) 上海光譜儀器有限公司；RM2135切片機(jī)、HI1210攤片機(jī)、H1220烤片機(jī) Leica（萊卡）公司；光學(xué)顯微鏡、CCD-NC6051顯微攝像 日本Olympus公司。

1.3 方法

1.3.1 文蛤寡肽的提取

新鮮文蛤經(jīng)洗凈、去殼、取內(nèi)臟，并用0.1 mol/L的NaOH溶液浸泡去脂，于蒸餾水中輕輕攪拌去雜質(zhì)，調(diào)制中性，勻漿。選用堿性蛋白酶，以料液比1∶2于40 ℃，pH值為9.5的條件下酶解8 h。然后將得到的文蛤酶解液進(jìn)行超濾，取分子質(zhì)量小于5 kD的分子段產(chǎn)物。將小于5 kD酶解液過Sephadex G-25柱進(jìn)行層析分離，收集各管洗脫液于280 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，收集峰Ⅰ，冷凍干燥。經(jīng)檢測(cè)該目標(biāo)肽序列為Gln-Leu-Asn-Trp-Asp，命名為MMO。冷凍干燥后于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 CCl4誘導(dǎo)肝損傷小鼠分組

將30 只成年雄性小鼠隨機(jī)分組，每組6 只，分為正常組、模型組、聯(lián)苯雙酯滴丸陽(yáng)性藥物組（200 mg/kg）、MMO低劑量組（50 mg/kg）、MMO高劑量組（100 mg/kg），均以體質(zhì)量計(jì)。在造模前對(duì)小鼠進(jìn)行預(yù)防灌胃給藥，連續(xù)7 d[7]（正常組與模型組給予等量蒸餾水），第7天末次灌胃2 h后，除正常組小鼠外其他小鼠按照0.1 mL/10 g的劑量腹腔注射含有0.5% CCl4的花生油，造成小鼠急性肝損傷。造模結(jié)束后小鼠禁食不禁水，16 h后對(duì)各組小鼠稱質(zhì)量，摘眼球取血，4 ℃條件下4 000 r/min離心10 min，取血清，用于生化測(cè)定，采血后頸椎脫臼處死小鼠后取肝臟，用4 ℃預(yù)冷生理鹽水沖凈表面浮血，濾紙拭干，稱質(zhì)量，觀察小鼠肝臟的形態(tài)后－80 ℃保存。

1.3.3 小鼠肝臟指數(shù)的計(jì)算及血清中各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定

血液離心后取上清液，按試劑盒說(shuō)明書操作步驟進(jìn)行ALT、AST、γ-GT、SOD活力、TG、MDA含量各項(xiàng)生化指標(biāo)的測(cè)定。

1.3.4 組織病理學(xué)HE染色觀察

取小鼠肝臟1 cm3左右，立即放入4%多聚甲醛溶液，固定24 h后，常規(guī)石蠟包埋后，制備5 μm厚切片，按照蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色順序，中性樹膠封片且光鏡下觀察肝組織病理變化。

1.3.5 免疫組化法檢測(cè)TNF-α、NF-κB蛋白的表達(dá)

將小鼠肝臟切片常規(guī)脫蠟至水；內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑室溫作用10 min；微波爐抗原修復(fù)，冷卻后磷酸鹽溶液洗滌2×5 min/次；滴加封閉用正常山羊血清工作液，室溫作用20 min，甩去多余液體；分別滴加適量稀釋的一抗（1∶300），4 ℃孵育過夜，磷酸鹽溶液洗3×5 min/次；滴加二抗，室溫孵育20 min；滴加適量HRP標(biāo)記的鏈霉親和素, 室溫孵育20 min；DAB顯色，鏡下控制時(shí)間，自來(lái)水沖洗；蘇木素復(fù)染5 min，乙醇梯度脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片。顯微鏡下觀察并拍照。

1.4 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析處理，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以±s表示，且以P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠肝臟形態(tài)觀察

圖1 小鼠肝臟Fig. 1 Liver tissues of mice

由圖1可以看出，正常組小鼠肝臟體積較小呈暗紅色，肝臟色澤鮮亮（圖中均未顯示顏色），紋理致密，質(zhì)地中等有彈性；模型組肝臟顏色呈現(xiàn)不正常的乳白色，體積增大，且肝臟表面可見乳白色的顆粒狀物體，肝臟質(zhì)地較硬彈性差；陽(yáng)性藥物組小鼠肝臟形態(tài)正常組差別不大；MMO藥物處理組肝臟顏色比模型組深，色澤比較鮮亮，且高劑量組更加明顯。說(shuō)明MMO對(duì)急性肝損傷具有一定的修復(fù)作用。

2.2 MMO對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響

由表1可得出，MMO低、高劑量組與陽(yáng)性藥物組均可使小鼠體質(zhì)量增加，其中高劑量組體質(zhì)量高于陽(yáng)性藥物組，達(dá)到（33.46±1.31）g，與模型組差異顯著（P＜0.05）。CCl4模型組比正常組的肝臟指數(shù)顯著增加，說(shuō)明CCl4造成小鼠肝臟腫大。與模型組比較，陽(yáng)性藥物組與MMO高劑量組小鼠肝指數(shù)均顯著降低（P＜0.05）。

表1 MMO對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響（±s，n=6）Table 1 Effect of MMO on liver index in mice with liver injury induced by CCl4(s,n= 6)

表1 MMO對(duì)小鼠肝臟指數(shù)的影響（±s，n=6）Table 1 Effect of MMO on liver index in mice with liver injury induced by CCl4(s,n= 6)

注：*.與模型組比較，差異顯著（P＜0.05）。下同。

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2.3 MMO對(duì)小鼠血清ALT、AST活力的影響

表2 MMO對(duì)小鼠血清ALT、AST活力的影響（s，n=6）Table 2 Effect of MMO on serum ALT and AST activities in mice with liver injury induced by CCl (s,n= 6) 4

表2 MMO對(duì)小鼠血清ALT、AST活力的影響（s，n=6）Table 2 Effect of MMO on serum ALT and AST activities in mice with liver injury induced by CCl (s,n= 6) 4

注：#.與正常組比較，差異顯著（P＜0.05）。下同。

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由表2可得出，與正常組比較，模型組小鼠ALT、AST活力均顯著升高，分別達(dá)到394.89 U/L和1 410.66 U/L。MMO各劑量組和陽(yáng)性藥物組均可降低ALT、AST活力，且以AST高劑量組最為顯著，抑制率達(dá)到33.04%（P＜0.05）。MMO低劑量組ALT、AST活力低于模型組，但高于MMO高劑量組。說(shuō)明隨著MMO水平的增加，小鼠血清中ALT、AST活力逐漸降低，呈現(xiàn)明顯的劑量相關(guān)性。

2.4 MMO對(duì)小鼠血清γ-GT、SOD活力及MDA、TG含量的影響

表3 MMO對(duì)小鼠血清γ-GT、SOD活力及MDA、TG含量的影響（，n=6）Table 3 Effect of MMO on serum γ-GT and SOD activities and MDA and TG contents in mice with liver injury induced by CCls,n= 6) 4

表3 MMO對(duì)小鼠血清γ-GT、SOD活力及MDA、TG含量的影響（，n=6）Table 3 Effect of MMO on serum γ-GT and SOD activities and MDA and TG contents in mice with liver injury induced by CCls,n= 6) 4

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由表3可得出，模型組與正常組比較，γ-GT水平達(dá)到正常組7 倍。MMO低、高劑量、陽(yáng)性藥物組與模型組比較γ-GT活力顯著降低（P＜0.05），MMO高劑量組降幅達(dá)到47.16%。與正常組比較，模型組SOD活力顯著降低，降幅達(dá)到42.86%。MMO低、高劑量組與模型組比較，SOD活力顯著升高，但MMO高劑量組與陽(yáng)性藥物組效果更為顯著（P＜0.05）。模型組MDA、TG含量升高到正常組的2 倍，MMO低、高劑量組與陽(yáng)性藥物組均使MDA含量顯著降低（P＜0.05），其中MMO高劑量組與陽(yáng)性藥物組呈現(xiàn)更加顯著性的差異（P＜0.05），相對(duì)低劑量組，MMO高劑量組MDA、TG含量降幅更加明顯，分別達(dá)到了28.83%和31.88%。

2.5 MMO對(duì)小鼠肝組織的病理學(xué)影響

圖2 小鼠肝組織HE染色（×200）Fig. 2 Observation of liver slices from mice by HE staining (× 200)

由圖2可看出，HE染色后光鏡下觀察，正常組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝索排列整齊，呈放射狀，肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞質(zhì)嗜酸性，核結(jié)構(gòu)清晰。模型組肝小葉紊亂，肝索斷裂，細(xì)胞形態(tài)大小不一，肝細(xì)胞嗜酸性減弱，出現(xiàn)大量空泡，細(xì)胞核聚縮邊緣化，呈現(xiàn)中央型壞死并且肝血竇狹窄。陽(yáng)性藥物組肝小葉結(jié)構(gòu)完整，無(wú)變性壞死，幾乎沒有空泡細(xì)胞，細(xì)胞整體趨于正常。MMO低劑量組肝索比模型組較完整，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)空泡減少，細(xì)胞核聚縮邊緣化有所減少，但組織受損仍較為嚴(yán)重。MMO高劑量組肝組織修復(fù)效果比較明顯，肝索放射狀排列清楚，空泡數(shù)量減少，細(xì)胞核形態(tài)正常。

2.6 免疫組化法檢測(cè)TNF-α、NF-κB蛋白的表達(dá)

圖3 小鼠肝組織TNF-α表達(dá)情況（×200）Fig. 3 Microscopic observation of the expression of TNF-α in liver tissue (× 200)

圖4 小鼠肝組織NF-κB表達(dá)情況（×200）Fig. 4 Microscopic observation of the expression of NF-κB in liver tissue (× 200)

免疫組化法在肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)顯示棕黃色顆粒（淡灰色部分）為TNF-α、NF-κB蛋白表達(dá)陽(yáng)性部位。正常組小鼠肝組織中幾乎沒有TNF-α、NF-κB陽(yáng)性表達(dá)（圖3A、圖4A）；而模型組中TNF-α、NF-κB陽(yáng)性表達(dá)明顯，呈較深的棕黃色，呈現(xiàn)局灶性的彌漫性分布，主要分布在中央靜脈的周圍（圖3B、圖4B）；陽(yáng)性藥物組中兩種蛋白的陽(yáng)性表達(dá)部位較少，只存在于中央靜脈周圍的少量肝細(xì)胞中，并且顏色較淺（圖3C、圖4C）；MMO低劑量組陽(yáng)性表達(dá)部位在中央靜脈周圍的肝細(xì)胞中，也呈現(xiàn)局灶性的彌漫性分布，但顏色比模型組淺（圖3D、圖4D）；高劑量組的陽(yáng)性表達(dá)明顯減少，與陽(yáng)性藥物組的表達(dá)部位無(wú)明顯差異（圖3E、圖4E）。說(shuō)明MMO可降低TNF-α、NF-κB蛋白表達(dá)量，且呈劑量相關(guān)性。

3 討 論

隨著人們生活水平的提高以及膳食結(jié)構(gòu)的改變，肝臟疾病成為影響人類健康嚴(yán)重問題之一，世界上每年約有100萬(wàn)患者死于肝病，其中亞太地區(qū)肝病患者約占全球總數(shù)的一半，我國(guó)更是肝病高發(fā)地區(qū)[8]。從海洋生物中提取護(hù)肝保肝活性物質(zhì)是開發(fā)藥源的重要途徑，其中海洋肽類藥物具有分子質(zhì)量小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、副作用小、無(wú)免疫原性、活性高等優(yōu)點(diǎn)而成為學(xué)者們研究的熱點(diǎn)。CCl4是一種廣泛用于評(píng)估保肝作用的藥物和植物提取物的肝毒性劑，它能夠使小鼠肝臟腫大，肝指數(shù)升高[9-10]。當(dāng)肝細(xì)胞損傷時(shí)，細(xì)胞膜通透性增加，存在于肝細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的AST和ALT會(huì)滲入血液，因此血清中這兩種酶活性增高反映出肝細(xì)胞損害的程度[11-12]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ徒MAST、ALT活力顯著高于正常組，AST水平高于ALT，說(shuō)明肝細(xì)胞損傷、壞死的程度比較嚴(yán)重[13]，而MMO各劑量組AST、ALT活力下降，表明MMO對(duì)肝損傷有較好的修復(fù)作用。

活性氧自由基是生物體氧化還原反應(yīng)的代謝產(chǎn)物，體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和清除在正常生理情況下一般保持平衡狀態(tài)，否則會(huì)給機(jī)體造成損害。SOD是體內(nèi)重要的自由基清除劑，在肝細(xì)胞受到自由基攻擊時(shí)，作為機(jī)體的保護(hù)性機(jī)制，肝臟內(nèi)SOD會(huì)因其耗竭而減少[14-16]。MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，可與生物大分子結(jié)合形成加醛復(fù)合物，進(jìn)一步破壞細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，其含量反映了組織過氧化的損傷程度[17-19]。有研究表明，肝細(xì)胞脂肪變性后肝功能酶活性、肝脂水平和血脂水平會(huì)呈現(xiàn)正相關(guān)性。人體內(nèi)的TG主要在肝臟中合成，肝臟受到損傷，機(jī)體對(duì)游離脂肪酸的利用則會(huì)減少，導(dǎo)致血清中TG水平升高。所以血清中TG含量的高低間接反映了肝臟受損情況[20-21]。γ-GT在人體細(xì)胞的微粒體中合成，主要存在于肝內(nèi)膽管上皮和肝細(xì)胞質(zhì)中，從膽道排泄。肝病時(shí)，肝細(xì)胞受損同時(shí)膽道受壓，γ-GT排泄受阻，隨膽汁返流入血，可致血中γ-GT升高[22]。故本實(shí)驗(yàn)采用SOD活力、MDA含量、TG含量、γ-GT活力指標(biāo)來(lái)反映肝損傷的程度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明模型組肝損傷嚴(yán)重，抗氧化活性降低，脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物增加。MMO各劑量組均有明顯改善，尤其高劑量組對(duì)肝損傷修復(fù)作用顯著。

肝組織的損傷與修復(fù)不僅僅體現(xiàn)在肝功能生化指標(biāo)的改變，同時(shí)會(huì)引起肝組織結(jié)構(gòu)的變化。通過肝組織的HE染色，發(fā)現(xiàn)模型組肝組織損傷比較嚴(yán)重，而經(jīng)過MMO各劑量和聯(lián)苯雙酯滴丸處理后，小鼠肝組織損傷程度減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)，其中MMO高劑量組的效果與陽(yáng)性藥物組效果相近，效果好于MMO低劑量組。

為了進(jìn)一步探索MMO對(duì)小鼠急性肝損傷的修復(fù)，通過免疫組化法檢測(cè)TNF-α、NF-κB蛋白的表達(dá)。在CCl4誘導(dǎo)的肝損傷機(jī)制中，自由基的介導(dǎo)發(fā)揮著重要的作用，自由基具有雙重效應(yīng)，一方面使機(jī)體發(fā)生脂質(zhì)過氧化；另一方面促使腫瘤壞死因子（TNF-α）的生成[23]。TNF-α是一種多效的細(xì)胞因子，是由激活的巨噬細(xì)胞或單核細(xì)胞產(chǎn)生，在炎癥反應(yīng)、細(xì)胞免疫和腫瘤免疫等方面發(fā)揮著關(guān)鍵作用[24-26]。并且，TNF-α可通過活化NF-κB信號(hào)通路，誘導(dǎo)cyclinD1表達(dá)，加快細(xì)胞周期進(jìn)程[27-28]。而NF-κB轉(zhuǎn)錄因子在調(diào)節(jié)肝臟炎癥、細(xì)胞凋亡、自噬和氧化狀態(tài)方面則發(fā)揮著重要作用[29]。NF-κB活化后，可增強(qiáng)TNF-α的基因轉(zhuǎn)錄，相應(yīng)的炎癥信號(hào)迅速放大，可釋放大量的氧自由基、細(xì)胞因子和炎癥介質(zhì)[30]。在本實(shí)驗(yàn)中，模型組TNF-α、NF-κB蛋白表達(dá)水平升高，表明小鼠肝細(xì)胞損傷嚴(yán)重，炎癥反應(yīng)明顯。而MMO高劑量組TNF-α、NF-κB蛋白表達(dá)水平顯著降低，減少了炎癥因子釋放從而降低了炎癥反應(yīng)，其與聯(lián)苯雙酯滴丸組效果相近。

綜上所述，MMO一方面能夠有效抑制血清AST、ALT、γ-GT活力的升高，阻止自由基清除劑SOD活力的降低，抑制脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)生，降低血清TG含量；另一方面可降低TNF-α、NF-κB蛋白的表達(dá)量。因此MMO可能通過減輕脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少活性氧及其自由基的產(chǎn)生，從而減輕線粒體氧化負(fù)荷，促使氧化-抗氧化機(jī)制恢復(fù)平衡，并且減少了炎癥因子的釋放，減輕炎癥反應(yīng)從而達(dá)到保護(hù)肝臟的目的。

4 結(jié) 論

本實(shí)驗(yàn)利用CCl4建立小鼠急性肝損傷模型，對(duì)文蛤寡肽的肝損傷保護(hù)作用進(jìn)行了體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，無(wú)論從血清生化指標(biāo)、病理學(xué)和組織學(xué)觀察，還是對(duì)炎癥因子TNF-α、NF-κB的檢測(cè)，都表明MMO對(duì)CCl4引起的肝損傷具有明顯的保護(hù)作用。

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Protective Effect of Meretrix meretrix Oligopeptides on Acute Liver Injury in Mice

WANG Jiajia, ZHAO Shasha, YANG Zuisu*, YU Fangmiao, DING Guofang
(Zhejiang Provincial Engineering Technology Research Center of Marine Biomedical Products, School of Food Science and Medical, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316022, China)

The protective effect of Meretrix meretrix oligopeptide (MMO) on CCl4-induced acute liver injury in mice was examined. MMO, with the potential to repair damaged liver, was enzymatically extracted and purified by ultrafiltration and Sephadex G-25 column chromatography, and its amino acid sequence was determined to be Gln-Leu-Asn-Trp-Asp. Then, an acute liver injury model was established by intraperitoneal injection of CCl4into mice. The liver index of mice was measured, the activities of serum alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), γ-glutamyltransferase (γ-GT) and superoxide dismutase (SOD) were determined, and serum triglyceride (TG) and malondialdehyde (MDA) levels were measured. Liver tissue samples from mice were stained with hematoxylin-eosin (HE) to observe the effect of MMO on liver histopathology. Immunohistochemical staining was used to detect the protein expression of TNF-α and NF-κB in hepatic tissue. The results showed that the MMO group exhibited a decrease in liver index, a reduction in serum ALT, AST and γ-GT activities (by up to 47.16%), an elevation in serum SOD activity, and a decline in serum TG and MDA levels (by up to 31.88% and 28.83%) compared with the model group, all these changes being statistically significant. Mouse liver tissue stained with HE revealed a notable improvement in liver histology. The protein expression of TNF-α and NF-κB in hepatic tissue was significantly decreased by administration of MMO. Therefore, MMO can effectively protect against acute liver injury induced by CCl4in mice.

Meretrix meretrix oligopeptides; carbon tetrachloride; acute liver injury

10.7506/spkx1002-6630-201713031

TS201.6

A

1002-6630（2017）13-0190-06引文格式：

王佳佳, 趙莎莎, 楊最素, 等. 文蛤寡肽對(duì)小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(13): 190-195.

10.7506/ spkx1002-6630-201713031. http://www.spkx.net.cn

WANG Jiajia, ZHAO Shasha, YANG Zuisu, et al. Protective effect of Meretrix meretrix oligopeptides on acute liver injury in mice[J]. Food Science, 2017, 38(13): 190-195. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201713031.

2016-06-11

浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（LY15C200016；LQ16H300001）；舟山市級(jí)公益類科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015C31012）

王佳佳（1991—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)楹Ｑ笏幬?、海洋功能食品。E-mail：1354193287@qq.com

*通信作者：楊最素（1967—），女，教授，博士，研究方向?yàn)楹Ｑ笏幬?、海洋功能食品。E-mail：yangzs87@163.com