陳秋英 劉志偉 劉艷芬 時(shí)秀菊

·論著·

甲胎蛋白異質(zhì)體在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及意義

陳秋英 劉志偉 劉艷芬 時(shí)秀菊

目的 研究甲胎蛋白(AFP)、甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)在原發(fā)性肝癌患者血清中的表達(dá)及意義。方法 分別采用電化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測定80例原發(fā)性肝癌(原發(fā)性肝癌組)、80例良性肝病(良性肝病組)及80例健康體檢者(健康對照組)血清AFP、AFP-L3含量及檢出陽性率，分析AFP-L3與腫瘤大小、臨床分期、組織分化程度的關(guān)系。結(jié)果 與健康對照組比較，良性肝病組和原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3含量、檢出陽性率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；良性肝病組和原發(fā)性肝癌組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。AFP-L3檢出陽性率隨腫瘤直徑增加、臨床分期進(jìn)展逐漸升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而不同組織分化程度間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。原發(fā)性肝癌組腹腔積液脫落癌細(xì)胞、肝組織AFP、AFP-L3含量和檢出陽性率比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。聯(lián)合檢測血清AFP、AFP-L3診斷原發(fā)性肝癌的敏感性為86.25%，特異性為93.75%。結(jié)論 AFP-L3在原發(fā)性肝癌的早期診斷中具有一定臨床價(jià)值。

甲胎蛋白異質(zhì)體；原發(fā)性肝癌；腫瘤標(biāo)志物

原發(fā)性肝癌是我國最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其病死率居惡性腫瘤第二位。近年來，原發(fā)性肝癌發(fā)病率呈逐年上升趨勢，患者病死率高，預(yù)后差[1,2]。因此，早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷對于疾病治療具有重要意義。血清甲胎蛋白(AFP)是目前應(yīng)用最為廣泛的原發(fā)性肝癌腫瘤標(biāo)志物，但10%～30%的原發(fā)性肝癌患者血清AFP檢測仍呈陰性。此外，AFP對于原發(fā)性肝癌早期診斷靈敏性和特異性不高，因此仍需要借助2種或2種以上腫瘤標(biāo)志物才能提高診斷效率[3]。研究發(fā)現(xiàn)，血清甲胎蛋白異質(zhì)體(AFP-L3)作為肝癌細(xì)胞特有的新型腫瘤標(biāo)志物，對于原發(fā)性肝癌的早期診斷價(jià)值更高[4,5]。本研究主要探討AFP-L3在原發(fā)性肝癌患者血清中的表達(dá)及與腫瘤病理特性的關(guān)系，并探討AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測在原發(fā)性肝癌中的診斷價(jià)值，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年10月至2017年2月我院收治的原發(fā)性肝癌80例，其中男70例，女10例；年齡25～80歲，平均年齡(55.34±7.12)歲；腫瘤直徑：≤5 cm 12例，5～10 cm 39例，≥10 cm 29例；腫瘤分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期14例，Ⅲ期32例，Ⅳ期26例；腫瘤分化程度：高分化10例，中分化45例，低分化25例。良性肝病80例(慢性肝炎52例，肝硬化28例)，其中男67例，女13例；年齡22～82歲，平均年齡(53.88±6.72)歲。另設(shè)健康對照80例，男64例，女16例；年齡20～78歲，平均年齡(52.59±7.11)歲。3組年齡、性別比等基本資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)：以CT、肝動脈造影等影像學(xué)診斷為標(biāo)準(zhǔn)，且術(shù)后經(jīng)病理確診，符合內(nèi)科學(xué)(第8版)制定的原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。

1.2.2 慢性肝炎診斷標(biāo)準(zhǔn)：乙肝表面抗原(+)持續(xù)超過6個(gè)月，影像學(xué)檢查未見肝硬化、肝內(nèi)占位性病變及門脈高壓，符合2010年中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、感染病學(xué)分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]。

1.2.3 肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)癥狀體征、實(shí)驗(yàn)室檢查及CT、磁共振等影像學(xué)檢查排除肝癌，符合肝病診療指南中的肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn)[8,9]。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察3組血清AFP、AFP-L3含量及檢出陽性率。

1.3.1 標(biāo)本采集:①血清標(biāo)本：抽取患者清晨空腹靜脈血5 ml，3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20℃保存?zhèn)溆谩＂诟骨环e液標(biāo)本：采用腹腔穿刺抽取中段腹腔積液10 ml，3 000 r/min離心5 min，分離上清，于2 h內(nèi)檢測標(biāo)本。

1.3.2 AFP、AFP-L3含量:采用德國Liaison索林全自動化學(xué)發(fā)光分析儀及配套試劑檢測AFP含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)檢測AFP-L3含量，試劑盒由美國Sigma公司提供，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

2 結(jié)果

2.1 3組血清AFP、AFP-L3含量比較 與健康對照組比較，良性肝病組和原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3含量顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；良性肝病組和原發(fā)性肝癌組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

組別AFPAFP-L3健康對照組 2.47±0.321.98±0.24良性肝病組 8.43±1.04*6.56±0.81*原發(fā)性肝癌組834.19±79.33*#792.43±80.48*#

注：與健康對照組比較,*P<0.05;與良性肝病組比較,#P<0.05

2.2 3組血清AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 與健康對照組比較，良性肝病組和原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3檢出陽性率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；良性肝病組和原發(fā)性肝癌組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組血清AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 n=80,例(%)

注：與健康對照組比較,*P<0.05;與良性肝病組比較,#P<0.05

2.3 原發(fā)性肝癌組AFP、AFP-L3分布情況 與AFP<25 ng/ml原發(fā)性肝癌組比較，25 ng/ml≤AFP≤400 ng/ml原發(fā)性肝癌組、≥400 ng/ml原發(fā)性肝癌組AFP-L3檢出陽性率>10%的比例顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；AFP<25 ng/ml原發(fā)性肝癌組和AFP≥400 ng/ml原發(fā)性肝癌組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 原發(fā)性肝癌組AFP、AFP-L3分布情況 例(%)

注：與AFP<25 ng/ml比較,*P<0.05;與25≤AFP≤400 ng/ml,#P<0.05

2.4 AFP-L3與原發(fā)性肝癌臨床病理特征的關(guān)系 原發(fā)性肝癌組AFP-L3與腫瘤直徑和腫瘤分期具有相關(guān)性，隨著腫瘤直徑增加及病情進(jìn)展AFP-L3含量、AFP-L3檢出陽性率逐漸升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；AFP-L3與腫瘤分化程度不具有相關(guān)性，隨著腫瘤分化程度提高AFP-L3含量、AFP-L3檢出陽性率雖顯示逐漸升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

2.5 原發(fā)性肝癌組腹腔積液、肝組織中所測AFP、AFP-L3含量比較 腹腔積液脫落癌細(xì)胞、肝組織中所測AFP、AFP-L3含量比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表5。

2.6 原發(fā)性肝癌組腹腔積液、肝組織中AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 腹腔積液脫落癌細(xì)胞、肝組織中AFP、AFP-L3檢出陽性率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表6。

2.7 原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測結(jié)果 80例原發(fā)性肝癌組以AFP、AFP-L3任何一個(gè)指標(biāo)陽性作為判定原發(fā)性肝癌的標(biāo)準(zhǔn)，AFP(+)AFP-L3(+)62.50%(50/80)，AFP(+)AFP-L3(-)11.25%(9/80)，AFP(-)AFP-L3(+)12.50%(10/80)，AFP(-)AFP-L3(-)13.75%(11/80)，檢測原發(fā)性肝癌敏感性達(dá)86.25%(69/80)。見表7。

表4 AFP-L3與原發(fā)性肝癌臨床病理特征的關(guān)系

注：與≤5 cm比較，*P<0.05;與～10 cm比較，#P<0.05；與Ⅰ期比較，△P<0.05；與Ⅱ期比較，☆P<0.05；與Ⅲ期比較，▲P<0.05

組別AFPAFP-L3腹腔積液脫落癌細(xì)胞687.08±76.77892.98±85.58肝組織737.56±980.461048.78±88.56

表6 原發(fā)性肝癌組腹腔積液、肝組織中AFP、AFP-L3檢出陽性率比較 n=80,例(%)

表7 原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測結(jié)果

2.8 原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測結(jié)果 160例非原發(fā)性肝癌組(80例良性肝病組和80例健康對照組)以AFP、AFP-L3任何一個(gè)指標(biāo)陰性作為判定非原發(fā)性肝癌的標(biāo)準(zhǔn)，AFP(+)AFP-L3(+)0(0/160)，AFP(+)AFP-L3(-)3.75%(6/160)，AFP(-)AFP-L3(+)2.50%(4/160)，AFP(-)AFP-L3(-)93.75%(150/160)，檢測非原發(fā)性肝癌特異性達(dá)93.75%(150/160)。見表8。

表8 非原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測結(jié)果

3 討論

研究也表明，AFP并不是原發(fā)性肝癌早期診斷的理想腫瘤標(biāo)志物，其診斷原發(fā)性肝癌的靈敏性和特異性不高[10]。因此，有必要尋找新的、最為有效的腫瘤標(biāo)志物，從而有利于進(jìn)一步提高腫瘤診斷效率。

目前認(rèn)為AFP存在3種異質(zhì)體(AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3)。AFP-L1主要來源于良性肝病，AFP-L2存在于妊娠及卵黃囊腫瘤患者中，而AFP-L3是肝癌細(xì)胞特有的一種生物惡性標(biāo)志物[11,12]。研究表明，AFP-L3診斷原發(fā)性肝癌的靈敏度和特異度高達(dá)72.0%、82.0%，明顯高于AFP，且其對于良、惡性肝病的早期診斷和肝癌術(shù)后預(yù)后評估具有重要意義[13,14]。此外，Toyoda等[15]研究提出AFP-L3升高的良性肝病患者發(fā)展為原發(fā)性肝癌的發(fā)生率較AFP升高的患者明顯升高，且以AFP-L3為指標(biāo)診斷和檢測原發(fā)性肝癌不依賴于AFP水平。

本研究采用電化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測定80例原發(fā)性肝癌、80例良性肝病及80例健康體檢者血清AFP、AFP-L3含量及檢出陽性率，結(jié)果顯示，與健康對照組比較，良性肝病組和原發(fā)性肝癌組血清AFP、AFP-L3含量、檢出陽性率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；良性肝病組和原發(fā)性肝癌組比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，且AFP升高時(shí)AFP-L3檢出陽性率逐漸升高，說明AFP陽性時(shí)AFP-L3檢出陽性率對于原發(fā)性肝癌診斷具有一定指導(dǎo)意義。此外，通過分析AFP-L3與腫瘤大小、臨床分期、組織分化程度的關(guān)系，我們發(fā)現(xiàn)隨著腫瘤直徑增加和腫瘤分期進(jìn)展AFP-L3檢出陽性率逐漸升高，然而AFP-L3檢出陽性率與腫瘤組織分化程度不具有相關(guān)性，與紀(jì)鳳卿等[16]研究結(jié)果一致，提示AFP-L3對于判斷腫瘤分期具有一定臨床應(yīng)用價(jià)值。本研究也發(fā)現(xiàn)聯(lián)合檢測血清AFP、AFP-L3診斷原發(fā)性肝癌的敏感性為86.25%，特異性為93.75%。，較單獨(dú)一種腫瘤標(biāo)志物的敏感性顯著升高，與Zhao等[17]報(bào)道一致，提示AFP、AFP-L3聯(lián)合檢測可作為確診原發(fā)性肝癌的較好腫瘤標(biāo)志物，

綜上所述，AFP-L3作為診斷原發(fā)性肝癌的新型腫瘤標(biāo)志物，對于疾病的早期診斷及腫瘤病理學(xué)特性的判斷具有重要臨床意義。聯(lián)合檢測AFP、AFP-L3能夠彌補(bǔ)單一指標(biāo)檢測敏感性和特異性方面的不足，這有助于提高原發(fā)性肝癌檢測敏感性并防止漏檢，尤其對于AFP水平較低的早期肝癌患者至關(guān)重要，值得臨床推廣應(yīng)用。

1 Dhir M,Melin AA,Douaiher J,et al.A review and update of treatment options and controversies in the management of hepatocelllar carcinoma.Ann Surg,2016,263:1112-1125.

2 趙睿，王啟之.肝癌診斷的腫瘤標(biāo)志物研究進(jìn)展.國際消化病雜志，2013，33：29-39.

3 Hu B,Tian X,Sun J,et al.Evaluation of individual and combined applications of serum biomarkers for diagnosis of hepatocellular carcinoma:a meta-analysis.Int J Mol Sci,2013,14:23559-23580.

4 王曉蕊，黃彩云，韓素桂，等.原發(fā)性肝癌患者血清中AFP-L3、GP73檢測的評價(jià).標(biāo)記免疫分析與臨床，2012，19：330-333.

5 Subwongcharoen S,Leelawat K,Treepongkaruna SA,et al.Serum AFP and AFP-L3 in clinically distinguished hepatocellular carcinoma from patients with liver masses.J Med Assoc Thai,2011,94:S46-S51.

6 葛均波，徐永健主編.內(nèi)科.第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013.429-433.

7 中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會.中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會.慢性乙型肝炎防治指南.中華肝臟病雜志，2011，19：13-24.

8 科技部十二五重大專項(xiàng)聯(lián)合課題組.乙型肝炎病毒相關(guān)肝硬化的臨床診斷、 評估和抗病毒治療的綜合管理.臨床肝膽病雜志，2014，30：99-108.

9 常彬霞，孫穎，滕光，等.2012 年歐洲肝病學(xué)會及2010年美國肝病學(xué)會關(guān)于酒精性肝病指南的解讀.臨床肝膽病雜志，2015，31：30-34.

10 張瓊月，陳俊輝.腫瘤標(biāo)志物在早期肝癌診斷中的價(jià)值.醫(yī)學(xué)綜述，2016，22：76-79.

11 常彬霞,辛邵杰.甲胎蛋白及其臨床應(yīng)用研究進(jìn)展.世界華人消化雜志,2010，18：576-580.

12 Sangro B,Carpanese L,Cianni R,et al.Survival after yttrium-90 resin microsphere radioembolization of hepatocellular carcinoma across Barcelona clinic liver cancer stages:a European evaluation.Hepatology,2011,54:868-878.

13 李賓，劉志偉，劉艷芬，等.原發(fā)性肝癌患者術(shù)后甲胎蛋白異質(zhì)體的變化及臨床意義.貴陽中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2014，36：52-54.

14 Liu X,Wan X,Lu S,et al.Evaluation of a magnetic particles-based chemiluminescence enzyme immunoassay for Golgi protein 73 in human serum.Clin Chim Acta,2015,445:54-59.

15 Toyoda H,Kumada T,Tada T,et al.Clinical utility of highly sensitive Lens culinaris agglutinin-reactive alpha-fetoprotein in hepatocellular carcinoma patients with alpha-fetoprotein <20 ng/ml.Cancer Sci,2011,102:1025-1031.

16 紀(jì)鳳卿，滕菁，鄭啟忠.血清甲胎蛋白異質(zhì)體在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及臨床病理學(xué)意義.世界華人消化雜志，2015，23：286-290.

17 Zhao Y,Wang M,Cui C,et al.Significance of combined tests of serum golgi glycoprotein 73 and other biomarkers in diagnosis of small primary hepatocellular carcinoma.Cancer Biomark,2015,15:677-683.

Expression and clinical significance of alphafetoprotein variant in patients with primary liver cancer

CHENQiuying,LIUZhiwei,LIUYanfen,etal.

People’sHospitalofTangshanCity,Hebei,Tangshan063001,China

Objective To investigate the expression and clinical significance of serum alphafetoprotein (AFP) and alphafetoprotein variant (AFP-L3) in patients with primary liver cancer.Methods The serum levels of AFP and AFP-L3 as well as positive detection rate were detected by electrochemiluminescence method and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),respectively in 80 cases of primary hepatocellular carcinoma (primary liver cancer group),80 cases of benign liver diseases (benign liver disease group) and 80 healthy subjects (control group). Moreover the correlation between serum AFP-L3 and tumor size,cinical staging,tissue differentiation degree was analyzed.Results As compared with those in control group,the serum levels of AFP and AFP-L3 as well as positive detection rate in benign liver disease group and primary liver cancer group were significantly increased (P<0.05),moreover,there were significant differences between benign liver disease group and primary liver cancer group (P<0.05). The positive detection rates of AFP-L3 were closely correlated to tumor size and clinical stages (P<0.05), however, there were no significant differences between different tissue differentiation degree (P>0.05).Besides there were no significant differences in seroperitoneum abscission cancer cells,the levels of AFP,AFP-L3 in liver tissues and positive detection rates in primary liver cancer group (P>0.05). The sensitivity and specificity AFP by combination detection of serum levels of AFP and AFP-L3 in diagnosis of primary liver cancer were 86.25% and 93.75%,respectively.Conclusion The detection of AFP-L3 has certain clinical value in early diagnosis of primary hepatocellular carcinoma.

primary carcinoma of the liver;alphafetoprotein variant; alpha-fetoprotein

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.14.003

063001 河北省唐山市人民醫(yī)院

R 735.7

A

1002-7386(2017)14-2094-04

2017-01-19)