韓文峰 魏素菊 鄭亞珍

·論著·

磷酸肌酸對(duì)小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及機(jī)制研究

韓文峰 魏素菊 鄭亞珍

目的 探討磷酸肌酸(creatine phosphate,Cp)對(duì)小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及其相關(guān)機(jī)制。方法 建立昆明小鼠S180肉瘤模型，60只小鼠隨機(jī)分為4組：0.9%氯化鈉溶液對(duì)照組(對(duì)照組)、Cp低劑量組(200 mg/kg)、Cp中劑量組(400 mg/kg)、Cp高劑量組(800 mg/kg)，觀察4組小鼠移植瘤重量；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)及金屬蛋白酶組織抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMP-2)蛋白的表達(dá)；免疫組化檢測(cè)腫瘤組織微血管密度(microvasvular density，MVD)；RT-PCR檢測(cè)移植瘤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothlial growth factor,VEGF)及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(base fibroblast growth,bFGF)mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 對(duì)照組、Cp低劑量組和中劑量組移植瘤重量、VEGF、bFGFmRNA、MMP-2、TIMP-2水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Cp高劑量組與對(duì)照組、Cp低、中劑量組比較，小鼠移植性肉瘤質(zhì)量明顯減小，MVD數(shù)顯著減少，VEGF、bFGFmRNA和MMP-2蛋白表達(dá)明顯減少，TIMP-2蛋白表達(dá)明顯增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論 Cp低、中劑量對(duì)腫瘤血管生成無(wú)明顯影響；Cp高劑量對(duì)腫瘤血管生成具有明顯的抑制作用，其機(jī)制可能與通過(guò)下調(diào)MMP-2、VEGF和bFGF、上調(diào)TIMP-2的表達(dá)水平有關(guān)。

磷酸肌酸；S180肉瘤；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子；微血管密度

磷酸肌酸(creatine phosphate,Cp)是細(xì)胞內(nèi)的一種高能磷酸化合物，用于三磷酸腺苷的再合成，在心肌細(xì)胞缺血缺氧時(shí)為其提供能量,保護(hù)心肌細(xì)胞膜免受氧自由基等有害物質(zhì)的侵襲[1,2]。Cp還可以透過(guò)細(xì)胞膜抑制膜通透，改變孔道的開放，保護(hù)線粒體，減少細(xì)胞凋亡。此外，Cp還可以提高左心室射血分?jǐn)?shù)，改善心功能，增加冠狀動(dòng)脈流量，改善冠狀動(dòng)脈循環(huán)。目前，Cp不但應(yīng)用于體外循環(huán)手術(shù)中，還應(yīng)用于治療心力衰竭、心肌梗死、心律失常、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病，因此保持心肌細(xì)胞Cp及三磷酸腺苷等高能磷酸化合物水平可以減輕各種原因?qū)π募〖?xì)胞的損害[3,4]?；熓侵委煇盒阅[瘤的主要方法之一，但化療藥物的心臟毒性極大限制了其臨床應(yīng)用，理論上可以使用Cp、三磷酸腺苷等高能磷酸化合物預(yù)防化療藥物的心臟毒性。但Cp對(duì)腫瘤生長(zhǎng)具有促進(jìn)或抑制作用還未見(jiàn)相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)Cp對(duì)小鼠移植性S180肉瘤血管生成的作用及可能機(jī)制進(jìn)行初步探討，如果其無(wú)促進(jìn)腫瘤血管生成的作用，則可在化療時(shí)應(yīng)用Cp保護(hù)心肌，減輕化療藥物的心臟毒性，提高化療療效及耐受性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 Cp由海南?？谄媪χ扑幱邢薰咎峁R用時(shí)配制，用0.9%氯化鈉溶液溶解配成質(zhì)量濃度為16 mg/ml，再用.9%氯化鈉溶液稀釋至所需濃度。RT-PCR試劑盒為Fermentas公司產(chǎn)品，引物為上海生物工程公司產(chǎn)品，Rabbit Anti-Ⅷ Factor多克隆抗體(克隆系：bs-0434R)為北京博奧森公司產(chǎn)品。RPMI1640培養(yǎng)液購(gòu)自GIBCO公司，小牛血清購(gòu)自杭州四季青生物工程材料有限公司。

1.2 細(xì)胞株與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 S180肉瘤細(xì)胞株由河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院科研中心傳代培養(yǎng)，接種細(xì)胞于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中(青霉素、鏈霉素各100 U/ml)，培養(yǎng)器皿置于37℃含有5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中昆明小鼠購(gòu)自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[動(dòng)物許可證編號(hào)：SCXK(冀)2012-1-003]。8周齡，雄性，體重18～22 g，飼養(yǎng)于SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)室。

1.3 荷瘤鼠模型建立 小鼠肉瘤S180瘤株，腹腔傳代接種，將接種7 d后腹水形成滿意的肉瘤小鼠脫頸椎處死，置75%的乙醇浸泡5 min消毒，無(wú)菌操作抽取腹水(乳白色黏稠液體)，加入0.9%氯化鈉溶液，1 000 r/min，離心5 min，傾出上清液，如此反復(fù)洗滌3次。臺(tái)盼藍(lán)染色并計(jì)數(shù)，將腫瘤細(xì)胞用0.9%氯化鈉溶液調(diào)整成濃度為1×107/ml，活細(xì)胞數(shù)98%以上，符合接種要求。取60只小鼠，每只右腋皮下注射0.2 ml(含2×106個(gè)瘤細(xì)胞)S180肉瘤細(xì)胞懸液。24 h后開始腹腔注射用藥，將60只昆明小鼠按隨機(jī)分組方法分為4組，0.9%氯化鈉溶液對(duì)照組(對(duì)照組)、Cp低、中、高劑量組，每組15只，共4組。低、中、高劑量組分別予以磷酸肌酸鈉注射液200、400、800 mg/kg腹腔注射，對(duì)照組予以0.9%氯化鈉溶液，每只0.2 ml，連續(xù)給藥7 d，第10天脫頸椎法處死小鼠，剝?nèi)×鲶w稱重，按公式計(jì)算抑瘤率：抑瘤率=(對(duì)照組平均瘤重-試驗(yàn)組平均瘤重)/對(duì)照組平均瘤重×100%。將部分標(biāo)本固定于70%乙醇，用于流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)；部分標(biāo)本液氮保存，用于分子生物學(xué)檢測(cè)；部分固定于10%甲醛溶液，用于免疫組織化學(xué)檢測(cè)。

1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)腫瘤細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、金屬蛋白酶組織抑制因子-2(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMP-2)蛋白的表達(dá) 網(wǎng)搓法制備單細(xì)胞懸液，取0.1 ml 單細(xì)胞懸液(含1×106個(gè)細(xì)胞)，分別加入1∶100 稀釋的MMP-2和TIMP-2抗體0.1 ml，室溫孵育30 min，加入PBS10 ml洗滌1次，棄上清，加入FITC-IgG二抗工作液100 μl，避光室溫孵育30 min，加入PBS 10 ml離心同上，棄上清以除去未結(jié)合的熒光二抗，上機(jī)檢測(cè)前加入PBS 1.0 ml，經(jīng)500目銅網(wǎng)過(guò)濾后上機(jī)檢測(cè)。分別設(shè)PBS代替一抗和二抗的陰性對(duì)照，以及只加一抗或二抗的同型對(duì)照。各蛋白表達(dá)量以平均熒光強(qiáng)度(均道值)表示。

1.5 RT-PCR法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)mRNA的表達(dá) 小鼠瘤組織總RNA提取按Invitrogen公司Trizol試劑說(shuō)明書進(jìn)行，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度。反轉(zhuǎn)錄過(guò)程按Fementas公司生產(chǎn)的K1622試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。PCR反應(yīng)體系共25 μl，包含cDNA 2 μl；上游引物2.5 μl；下游引物2.5 μl；綠色體系(含TaqDNA聚合酶、MgCl2等)12.5 μl；DEPC水5.5 μl。VEGF反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性5 min，94℃變性60 s，56℃退火30 s，72℃延伸2 min，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)后，72℃延伸7 min。bFGF反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性5 min，94℃變性30 s，48.2℃退火30 s，72℃延伸30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)后，72℃延伸7 min。β-actin反應(yīng)條件與VEGF相同。目的基因和β-actin各4 μl EB染色在1.5%瓊脂糖凝膠上以80V電壓直流電泳，紫外光下成像并拍照，并用Gel-proAnalyzer3.1軟件分析擴(kuò)增產(chǎn)物的光密度值(D)，計(jì)算相對(duì)系數(shù)(相對(duì)系數(shù)=目的基因D值/β-actin D值)作為目的基因mRNA表達(dá)的相對(duì)值，對(duì)目的基因進(jìn)行光密度半定量分析。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。見(jiàn)表1。

表1 RT-PCR引物序列

1.6 免疫組化法測(cè)定腫瘤組織內(nèi)微密度(MVD)的表達(dá) 免疫組化采用S-P法：10%中性甲醛固定腫瘤組織，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，二甲苯及乙醇梯度脫蠟至水，PBS沖洗2次，5 min/次，按抗體說(shuō)明書要求進(jìn)行抗原修復(fù)，蒸餾水沖洗2次，5 min/次，甲醇過(guò)氧化氫修復(fù)20 min。5%正常山羊血清封閉，37℃恒溫箱中孵育45 min，滴加MVD一抗，染色步驟按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，脫水，透明，中性樹膠封片。MVD的稀釋濃度為1∶200。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。抗-Ⅷ因子抗體標(biāo)記的微血管密度(MVD)計(jì)數(shù)按Weider[5]推薦方法：先在低倍鏡下選擇微血管密度最高的區(qū)域，在腫瘤區(qū)域內(nèi)凡染成棕黃色的單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇為一個(gè)血管計(jì)數(shù)，在400倍視野下計(jì)數(shù)4個(gè)視野中的微血管數(shù)目，取平均數(shù)為該例的MVD值。

2 結(jié)果

2.1 Cp對(duì)S180肉瘤細(xì)胞小鼠移植瘤生長(zhǎng)的作用 腫瘤細(xì)胞接種5 d后，各組小鼠均觀察到移植瘤生長(zhǎng)，瘤體呈圓形。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各試驗(yàn)組移植瘤的重量均小于對(duì)照組，但低、中劑量組和對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高劑量組和各組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。Cp對(duì)小鼠移植瘤生長(zhǎng)在一定范圍內(nèi)呈量效關(guān)系。見(jiàn)表2。

表2 Cp對(duì)小鼠S180肉瘤小鼠移植瘤生長(zhǎng)的作用

注：與對(duì)照組比較，*P<0.01；與高劑量組比較，#P<0.05

2.2 Cp對(duì)移植瘤組織中VEGF、bFGFmRNA表達(dá)的影響 以β-actin為內(nèi)參，Cp低、中劑量組和對(duì)照組比較，VEGF和bFGFmRNA的表達(dá)量有減小趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Cp高劑量組和對(duì)照組、Cp低、中劑量組3組之間相比， VEGF、bFGFmRNA表達(dá)量明顯減少，與3組之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果示高劑量的磷酸肌酸可抑制腫瘤VEGF、bFGFmRNA的表達(dá)。見(jiàn)表3、圖1。

組別劑量(mg/kg)VEGFbFGF對(duì)照組 00.3898±0.00250.1602±0.0059低劑量組2000.3813±0.0114#0.1556±0.0038#中劑量組4000.3783±0.0089#0.1548±0.0041#高劑量組8000.3238±0.0115*0.1393±0.0029*

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與高劑量組比較，#P<0.05

2.3 Cp對(duì)移植瘤組織中MMP-2、TIMP-2蛋白的表達(dá)Cp低、中劑量組和對(duì)照組比較，MMP-2蛋白的表達(dá)量有降低趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；TIMP-2表達(dá)蛋白有增高趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。Cp高劑量組和對(duì)照組、Cp低、中劑量組3組之間相比，MMP-2蛋白的表達(dá)量明顯降低，TIMP-2表達(dá)蛋白明顯增高，與3組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果示高劑量的磷酸肌酸可下調(diào)MMP-2的表達(dá)、上調(diào)TIMP-2的表達(dá)。見(jiàn)表4,圖2、3。

圖1 RT-PCR檢測(cè)各組小鼠移植瘤中VEGF、bFGF mRAN表達(dá)

注：1:對(duì)照組 2:低劑量組 3:中劑量組 4:高劑量組 M:標(biāo)記

組別劑量(mg/kg)MMP-2TIMP-2對(duì)照組0386.47±2.25276.59±7.96低劑量組200382.41±5.08#284.45±3.76#中劑量組400378.52±8.89#286.32±10.41#高劑量組800323.10±9.27*308.90±14.50*

注:與對(duì)照組比較，*P<0.05；與高劑量組比較，#P<0.05

2.4 Cp對(duì)移植瘤組織中MVD表達(dá)的影響 Cp低、中劑量組和對(duì)照組比較，MVD差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Cp高劑量組和對(duì)照組、Cp低、中劑量組比較，MVD間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果表明高劑量的磷酸肌酸可抑制腫瘤血管生成。見(jiàn)表5、圖4。

表5 Cp對(duì)移植瘤組織中MVD表達(dá)的影響 ±s

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與高劑量組比較，#P<0.05

3 討論

Cp是參與細(xì)胞能量代謝的重要物質(zhì)之一，在1927年被發(fā)現(xiàn)，Cp在細(xì)胞中的含量可高達(dá)2～30 mmo/L,當(dāng)機(jī)體消耗三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)過(guò)多而致二磷酸腺苷增多時(shí)，磷酸肌酸將高能磷酸鍵轉(zhuǎn)給二磷酸腺苷，二磷酸腺苷在腺苷酸激酶催化下轉(zhuǎn)變成ATP被利用。因此，它是心肌、骨骼肌、腦、視網(wǎng)膜、腎和精子等這些高耗能細(xì)胞器官或細(xì)胞內(nèi)ATP濃度恒定的“緩沖庫(kù)”，這些器官或細(xì)胞的共同特點(diǎn)是，在生命活動(dòng)中要消耗大量ATP，所耗ATP的補(bǔ)充要靠胞內(nèi)的Cp來(lái)轉(zhuǎn)化。生物體內(nèi)能量的儲(chǔ)存和利用都以ATP為中心，其是直接的供能物質(zhì)，Cp是能量?jī)?chǔ)備庫(kù)，其含量的多少直接影響體內(nèi)ATP水平。Cp在肌肉收縮的能量代謝中發(fā)揮重要作用，是心肌的能量?jī)?chǔ)備，當(dāng)心肌ATP供應(yīng)不足時(shí)，儲(chǔ)存的Cp就迅速動(dòng)員出來(lái)用于ATP的合成，ATP的水解為肌動(dòng)蛋白收縮過(guò)程提供能量；另外，Cp可以保護(hù)心肌細(xì)胞膜；促進(jìn)心肌微循環(huán)；抑制5-核苷酸酶的活性，穩(wěn)定心肌細(xì)胞內(nèi)腺苷酸含量。可見(jiàn)，Cp是一種療效非常明顯的心肌保護(hù)劑，而化療作為腫瘤治療重要手段之一，其心臟毒性一直是化療的最明顯的副作用之一，限制了化療的療效，如果化療時(shí)使用Cp減輕化療藥物的心臟毒性，那么就有可能大大提高化療療效，但Cp對(duì)腫瘤血管生長(zhǎng)具有促進(jìn)抑或抑制作用還尚未見(jiàn)研究報(bào)道，因此，我們建立了小鼠移植性S180肉瘤模型，來(lái)探討磷酸肌酸對(duì)小鼠移植性S180肉瘤作用血管生長(zhǎng)及其可能的機(jī)制。

圖2 1:對(duì)照組 2:低劑量組 3:中劑量組 4:高劑量組

圖3 1:對(duì)照組 2:低劑量組 3:中劑量組 4:高劑量組

圖4 1:對(duì)照組 2:低劑量組 3:中劑量組 4:高劑量組(S-P，×400)

研究表明，腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移是血管依賴性的，實(shí)體瘤長(zhǎng)到2～3 mm時(shí)，如果沒(méi)有新生血管生成，腫瘤細(xì)胞即進(jìn)入休眠狀態(tài)，阻斷血管生成是遏制腫瘤生長(zhǎng)的有效策略這一學(xué)說(shuō)。針對(duì)血管生成的治療策略，已成為目前腫瘤治療的熱點(diǎn)研究領(lǐng)域。反映腫瘤血管生成的主要指標(biāo)是檢測(cè)腫瘤組織內(nèi)VEGF， bFGF的表達(dá)量和MVD值。VEGF具有特異性促內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂特性，與其受體結(jié)合能引起腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，遷移和管狀結(jié)構(gòu)的形成[6,7]。bFGF是最早被證實(shí)的血管生成因子之一，其體內(nèi)外促血管生成作用已被公認(rèn)，不僅參與腫瘤血管生成，且能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，抑制細(xì)胞凋亡[8]。第八因子相關(guān)抗原是血管內(nèi)皮細(xì)胞較特異性標(biāo)記物，其表達(dá)量的高低反映腫瘤血管的多少；TIMP-2是內(nèi)源性抗血管生成物質(zhì)，可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移和由血管刺激因子所致的血管管狀形成，并可預(yù)防腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散。MMP-2是溶解血管外基質(zhì)的主要蛋白溶解酶，是金屬離子依賴性的內(nèi)源性肽酶，能降解幾乎所有的基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)，在腫瘤血管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移中起著重要作用[9]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,對(duì)照組、Cp低劑量組和中劑量組3組之間各檢測(cè)指標(biāo)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；Cp高劑量組和對(duì)照組、Cp低、中劑量組比較，小鼠移植性肉瘤質(zhì)量明顯減小，MMP-2蛋白顯著減少及TIMP-2蛋白顯著增加，MVD數(shù)顯著減少，VEGF及bFGF mRNA明顯減少。實(shí)驗(yàn)表明Cp低、中劑量對(duì)腫瘤血管生成無(wú)明顯影響；Cp高劑量對(duì)腫瘤血管生成具有明顯的抑制作用。其機(jī)制可能與三磷酸腺苷和Cp在體內(nèi)的相互轉(zhuǎn)換有關(guān)。ATP是體內(nèi)重要的生物活性物質(zhì)，參與體內(nèi)的多種生理功能。近幾年，學(xué)者們對(duì)其抗腫瘤作用展開了較多研究。Palomares等[10]研究表明ATP 對(duì)小鼠黑素瘤具有抗增殖作用；ATP主要通過(guò)特異性P受體發(fā)揮作用，P受體被核苷酸類物質(zhì)如 ATP 選擇性激活。當(dāng)機(jī)體補(bǔ)充了Cp后，Cp將高能磷酸鍵轉(zhuǎn)給二磷酸腺苷，二磷酸腺苷在腺苷酸激酶催化下由轉(zhuǎn)變成ATP，結(jié)果是體內(nèi)有較多的ATP積累，ATP具有抗腫瘤增殖的作用，從而可能通過(guò)ATP下調(diào)MMP-2、VEGF和bFGF表達(dá)量、上調(diào)TIMP-2表達(dá)量，發(fā)揮抗腫瘤血管生成的作用。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，低劑量的Cp對(duì)腫瘤血管生成無(wú)影響，高劑量的Cp抑制腫瘤血管生成，其機(jī)制可能是Cp通過(guò)在體內(nèi)轉(zhuǎn)換為ATP，下調(diào)MMP-2、VEGF和bFGFmRNA表達(dá)量、上調(diào)TIMP-2表達(dá)量，發(fā)揮抗腫瘤血管生成的作用。因此，Cp可用于化療的心肌保護(hù)。但此實(shí)驗(yàn)僅為動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，有待于臨床觀察驗(yàn)證。

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Effects of creatine phosphate on angiogenesis in mice with transplanted S180 sarcoma and its possible mechanism

HANWenfeng,WEISuju,ZHENGYazhen.

DepartmentofOncology,TheSeventhPeople’sHospitalofHebeiProvince,Hebei,Dingzhou073000,China

Objective To investigate the effects of creatine phosphate (Cp) on angiogenesis in mice with transplanted S180 sarcoma, and to explore its related action mechanism.Methods The animal models with S180 sarcoma were established in Kunming mice.The 60 mice were randomly divided into four groups:control group,low-dose group (Cp 200mg/kg),middle-dose group (Cp 400mg/kg), high-dose group (Cp 800mg/kg).The changes of transplanted tumors weight were observed,moreover, the expression levels of (matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP-2) protein in transplanted sarcoma tissues were detected by flow cytometry,and the microvessel density (MVD) of tumors was detected by immunohistochemistry (IHC),besides the expression levels of VEGF and bFGF mRNA in transplanted tumor were detected by RT-PCR.Results There were no significant differences in transplantation tumor weight,the expression levels of VEGF,bFGFmRNA,MMP-2,TIMP-2 among control group,low-dose group and middle-dose group (P>0.05). However the transplantation tumor weight in high-does group was significantly decreased,as compared with those in control group, low-dose group and middle-dose group,moreover MVD was obviously decreased,and the expression levels of VEGF, bFGFmRNA and MMP-2 protein were significantly decreased,however,the expression levels of TIMP-2 protein were significantly increased (P<0.01).Conclusion The low-dose and middle-dose Cp has no obvious inhibitory effects on angiogenesis in mice with transplanted S180 sarcoma, however high-dose Cp has obvious inhibitory effects on angiogenesis in mice with transplanted S180 sarcoma, and its action mechanism might be correlated to down-regulation of expression levels of MMP-2,VEGF,bFGF and up-regulation of TIMP-2 expression.

creatine phosphate; S180 sarcoma; VEGF; bFGF; MVD

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.14.002

073000 河北省定州市，河北省第七人民醫(yī)院腫瘤科

R 73-3

A

1002-7386(2017)14-2090-05

2017-01-18)