孔令波，南月敏，張玉果，趙素賢，王榮琦，邸海靈(河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病科，河北 石家莊 050051)

·論 著·

白細胞介素28B基因多態(tài)性與慢性HCV感染及抗HCV療效的關(guān)系

孔令波，南月敏*，張玉果，趙素賢，王榮琦，邸海靈
(河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病科，河北 石家莊 050051)

目的探討白細胞介素28B(interleukin 28B，IL-28B)基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)與丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)慢性感染及抗病毒療效的關(guān)系。方法選擇河北省慢性丙型肝炎及代償期丙型肝炎肝硬化患者253例，健康體檢者83例作為對照組。TaqMan探針法檢測IL-28B rs8099917位點SNPs，分析HCV感染患者與對照組IL-28B rs8099917位點等位基因及基因型分布差異，并探討患者IL-28B rs8099917位點SNPs與抗HCV療效的關(guān)系。結(jié)果患者IL-28B rs8099917位點G、T等位基因分布以及GG/GT、TT基因型分布與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。IL-28B rs8099917位點SNPs與患者基線HCV RNA水平及HCV 基因型均不相關(guān)(P>0.05)。獲得完全早期病毒學應答(complete early virological response，cEVR)及持續(xù)病毒學應答(sustained virological response，SVR)的患者IL-28B rs8099917位點T等位基因、TT基因型攜帶率均顯著高于未獲得cEVR及SVR患者。結(jié)論河北省人群IL-28B rs8099917位點SNPs與HCV慢性感染易感性不相關(guān)，且與患者基線HCV RNA水平及感染HCV基因型不相關(guān)。攜帶TT基因型患者更易獲得cEVR及SVR。

丙型肝炎，慢性；白細胞介素28B；多態(tài)性，單核苷酸

人類基因單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)與多種疾病發(fā)生有關(guān)[1-2]，近年來其與丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)慢性感染以及抗HCV療效的關(guān)系成為研究熱點[3-7]。白細胞介素28B(interleukin 28B，IL-28B)基因位于人19號染色體，編碼干擾素λ(interferon λ，IFNλ)3，IFNλ3可促進HCV感染后自發(fā)性及IFNα誘導的病毒清除[8]。關(guān)于中國人群IL-28B rs8099917位點SNPs與HCV慢性感染及病毒學應答的研究較少，尤其在河北省人群中鮮見報道。本研究旨在對比IL-28B rs8099917位點等位基因及基因型分布在河北省慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C，CHC)及代償期丙型肝炎肝硬化患者與健康對照人群間的差異，探討IL-28B rs8099917位點SNPs與HCV易感性的關(guān)系，并進一步分析其在病毒學應答中的預測價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年11月—2012年10月河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院、石家莊市第五醫(yī)院、中國人民解放軍白求恩國際和平醫(yī)院、滄州市傳染病醫(yī)院、邯鄲市傳染病醫(yī)院、河北醫(yī)科大學第一醫(yī)院、邢臺市人民醫(yī)院收治的CHC及代償期丙型肝炎肝硬化患者253例，男性123例，女性130例，年齡18～75歲，中位年齡46歲。血清抗-HCV陽性，HCV RNA ≥ 15 U/mL，ALT和(或)AST持續(xù)升高6個月以上。排除標準：發(fā)生失代償期肝硬化或原發(fā)性肝癌；合并其他嗜肝病毒感染；HIV感染；自身免疫性或遺傳性肝?。粐乐匦哪X血管、自身免疫系統(tǒng)、血液系統(tǒng)及神經(jīng)系統(tǒng)疾??；妊娠及哺乳期婦女。同期選擇83例健康體檢者作為對照組，男性39例，女性44例，年齡18～75歲，中位年齡42歲。2組性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

所有患者及健康對照者均簽署知情同意書。

1.2 治療方案 采用IFN聯(lián)合利巴韋林抗病毒治療方案，根據(jù)患者基線特征及經(jīng)濟能力制定個體化治療方案。普通IFNα-2b(購自北京凱因科技發(fā)展有限公司)組：IFNα-2b 100～300 MU(年齡>65～75歲、體質(zhì)量<60 kg、代償期肝硬化、中性粒細胞減少)或500 MU(年齡18～65歲，體質(zhì)量≥60 kg)，1次/隔日，皮下注射。聚乙二醇IFNα(pegylated interferon alpha，PegIFNα)-2a(購自上海羅氏制藥有限公司)組：PegIFNα-2a 67.5～135 μg(年齡>65～75歲、體質(zhì)量<60 kg、代償期肝硬化、中性粒細胞減少)或180 μg(年齡18～65歲，體質(zhì)量≥60kg)，1次/周，皮下注射。PegIFNα-2b(購自美國先靈葆雅公司)組：1.5 μg/kg，1次/周，皮下注射。根據(jù)患者體質(zhì)量及血紅蛋白水平確定利巴韋林劑量，900～1 200 mg/d。個體化治療療程根據(jù)病毒學應答反應制定，HCV RNA水平降至檢測下限之后繼續(xù)治療44周。治療結(jié)束之后隨訪24周。治療過程中，若出現(xiàn)中性粒細胞顯著下降(<0.5×109/L)、嚴重貧血(血紅蛋白<60 g/L)、嚴重甲狀腺功能亢進或減退、精神疾病、嚴重皮疹等嚴重不良反應，或出現(xiàn)肝硬化、肝癌等，需停藥。

1.3 療效判斷 參照《丙型肝炎防治指南(2015年更新版)》[9]定義病毒學應答情況。完全早期病毒學應答(complete early virological response，cEVR)：治療12周時HCV RNA水平檢測不到。持續(xù)病毒學應答(sustained virological response，SVR)：治療結(jié)束并隨訪24周HCV RNA水平檢測不到。無應答(non-response，NR)：治療12周時HCV RNA水平下降<2Log U/mL。NR還包括治療及隨訪過程中病毒學突破及反彈者。

1.4 生化學檢測 血清ALT及AST水平應用OLYMPUS AU5400全自動生物化學分析儀(購自日本OLYMPUS公司)檢測。

1.5 血清抗-HCV、HCV RNA及HCV基因型檢測 應用酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒[購自英科新創(chuàng)(廈門)科技有限公司]測定血清抗-HCV；應用COBAS TaqMan系統(tǒng)[購自美國羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司]檢測血清HCV RNA；HCV基因分型，采用HCV基因分型芯片技術(shù)(天津市第三中心醫(yī)院)。

1.6 IL-28B rs8099917位點SNPs檢測 應用TaqMan檢測系統(tǒng)(購自美國Applied Biosystems公司)分析。IL-28B rs8099917位點TaqMan探針序列：VIC-TTTGTTTT CCTTTCTGTGAGCAA-T[G]TCACCCAAATTGGAACCATGCTGTA-MGBNFQ，F(xiàn)AM-TTTGTTTTCCTTTCTGTGA-GCAAT[T]TCACCCAAATTGGAACCATGCT GTA-MGBNFQ。應用ABI 7500實時定量PCR儀(購自美國Applied Biosystems公司)對DNA樣品進行擴增，PCR反應條件：95 ℃ 10 min，92 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，40個循環(huán)。

1.7 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 13.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組IL-28B rs8099917位點多態(tài)性分布比較 患者組與對照組IL-28B rs8099917位點上的G、T等位基因與GG/GT、TT基因型分布差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 慢性HCV感染患者與對照組IL-28B rs8099917位點多態(tài)性分布比較Table 1 Comparison of IL-28B rs8099917 polymorphisms between chronic HCV infected patients and healthy controls (例數(shù)，%)

2.2 不同基線HCV RNA水平患者IL-28B rs8099917位點等位基因及基因型分布比較 低HCV RNA水平患者與高HCV RNA水平患者IL-28B rs8099917位點上的G、T等位基因和GG/GT和TT基因型分布差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同基線HCV RNA水平患者IL-28B rs8099917位點多態(tài)性分布比較Table 2 Comparison of IL-28B rs8099917 polymorphisms between patients with different baseline HCV RNA levels (例數(shù)，%)

2.3 不同HCV基因型患者IL-28B rs8099917位點等位基因及基因型分布比較 118例患者檢測了HCV基因型，結(jié)果顯示1型85例，2型31例，1型、2型混合型3例，3型1例，4型1例。HCV基因1型及2、3、4型感染患者之間IL-28B rs8099917位點等G、T位基因分布以及GG/GT及TT基因型分布差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同HCV基因型患者IL-28B rs8099917位點多態(tài)性分布比較Table 3 Comparison of IL-28B rs8099917 polymorphisms between patients with different HCV genotypes (例數(shù)，%)

2.4 獲得與未獲得cEVR患者IL-28B rs8099917位點等位基因及基因型分布比較 治療12周，cEVR率為83.64%(179/214)。獲得cEVR的患者IL-28B rs8099917位點T等位基因、TT基因型攜帶率均顯著高于未獲得cEVR患者(P<0.05)，見表4。

2.5 獲得SVR患者與NR患者IL-28B rs8099917位點等位基因及基因型分布比較 完成治療及隨訪時，SVR率為68.22%(146/214)。獲得SVR患者IL-28B rs8099917位點T等位基因、TT基因型攜帶率均顯著高于NR患者(P<0.01)，見表5。

表4 獲得與未獲得cEVR患者IL-28B rs8099917位點多態(tài)性分布的比較Table 4 Comparison of IL-28B rs8099917 polymorphisms between patients achieved cEVR and those didn't achieve cEVR (例數(shù)，%)

表5 獲得SVR患者與NR患者IL-28B rs8099917位點多態(tài)性分布比較Table 5 Comparison of IL-28B rs8099917 polymorphisms between patients achieved SVR and NR patients (例數(shù)，%)

3 討 論

既往國外多項研究發(fā)現(xiàn)IL-28B多個位點SNPs能夠預測HCV自然清除和抗病毒治療應答。然而，人基因多態(tài)性受地域及環(huán)境影響，不同地域、不同種族人群IL-28B SNPs與HCV感染及臨床轉(zhuǎn)歸的關(guān)系各異[5-6, 10-11]。本研究采用TaqMan探針實時熒光PCR方法檢測河北省人群IL-28B rs8099917位點SNPs，并分析其與HCV慢性感染及臨床抗病毒療效的關(guān)系，以探尋該人群HCV慢性感染易感因素及抗HCV治療病毒學應答預測因素。

本研究結(jié)果顯示，CHC及丙型肝炎肝硬化患者IL-28B rs8099917位點G、T等位基因分布以及GG/GT、TT基因型分布與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義，提示河北省人群IL-28B rs8099917位點SNPs與HCV感染易感性不相關(guān)。另外，本研究進一步分析了IL-28B rs8099917位點G、T等位基因及GG/GT、TT基因型在高HCV RNA水平與低HCV RNA患者水平之間以及不同HCV基因型患者之間的分布差異，結(jié)果顯示IL-28B rs8099917位點SNPs與HCV RNA水平及HCV基因型均不相關(guān)。

目前，直接作用抗病毒藥物還未在我國上市，IFN聯(lián)合利巴韋林仍是我國抗HCV的主要治療方案[9]。本研究還分析了IL-28B rs8099917位點多態(tài)性與病毒學應答的關(guān)系，結(jié)果顯示T等位基因、TT基因型攜帶者更易獲得cEVR及SVR。其機制可能為IL-28B rs8099917位點SNPs影響IFNλ3表達或蛋白結(jié)構(gòu)，使抗病毒應答能力發(fā)生變化。有研究發(fā)現(xiàn)IL-28B rs8099917位點SNPs與IFNλ3表達水平相關(guān)，T等位基因攜帶者IFNλ3高表達[11-12]。病毒或雙鏈RNA激活外周血單核細胞、樹突狀細胞等，使之產(chǎn)生IFNλ3[13]，IFNλ3與受體結(jié)合后啟動下游信號級聯(lián)反應，激活JAK-STAT信號通路，形成IFN激活基因因子3，進入細胞核內(nèi)與IFN激活反應元件相互作用，上調(diào)IFN刺激基因表達[14]。IFN刺激基因數(shù)目眾多，其中包括2′-5′寡聚腺苷酸合成酶及抗黏病毒因子1等，2′-5′寡聚腺苷酸合成酶可激活內(nèi)源性核糖核酸酶L，使病毒單鏈RNA降解，而抗黏病毒因子1則可減弱細胞內(nèi)病毒的運輸，阻礙病毒復制，從而發(fā)揮抗病毒作用。因此，推測IL-28B rs8099917位點SNPs可能通過調(diào)控IFNλ3表達水平，影響機體的抗病毒能力，TT基因型攜帶者IFNλ3表達水平較高，故抗病毒能力較強，更易獲得良好的療效。

綜上所述，河北省人群中IL-28B rs8099917位點SNPs與HCV慢性感染不相關(guān)。IL-28B rs8099917位點SNPs可作為抗病毒療效的預測因素，TT基因型攜帶者抗病毒療效較好。

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(本文編輯：劉斯靜)

Association between interleukin 28B gene polymorphisms and chronic hepatitis C virus infection and response to anti-HCV treatment

KONG Ling-bo, NAN Yue-min*, ZHANG Yu-guo, ZHAO Su-xian, WANG Rong-qi, DI Hai-ling
(DepartmentofTraditionalandWesternMedicalHepatology,theThirdHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050051,China)

Objective To explore the association of interleukin 28B(IL-28B) single nucleotide polymorphisms(SNPs) with chronic hepatitis C virus(HCV) infection and response to anti-HCV treatment. Methods Two hundred and fifty-three patients with chronic hepatitis C and compensated cirrhosis, and 83 healthy controls were genotyped for the IL-28B rs8099917 polymorphisms by TaqMan system. The relation of IL-28B rs8099917 SNPs and chronic HCV infection, and the association of IL-28B rs8099917 SNPs and virological responses were analyzed. Chi-square test was performed for comparison of categorical data. Results The patients with chronic HCV infection and the healthy controls showed similar frequencies of G, T allele and GG/GT, TT genotypes(P>0.05). IL-28B rs8099917 SNPs were neither significantly associated with baseline HCV RNA level nor with HCV genotype(P>0.05). The presences of IL-28B rs8099917 T allele and TT genotype were significantly higher in patients achieved early virological response and sustained virological response than non-response patients. Conclusion In Hebei province, polymorphisms in IL-28B rs8099917 were not associated with susceptibility to chronic HCV infection. IL-28B rs8099917 T allele and TT genotype were predictors for better virological responses.

hepatitis C virus， chronic; interleukin-28B; polymorphism, single nucleotide

2017-02-24；

2017-03-20

河北省醫(yī)學科學研究重點課題(20130227)；河北省

孔令波(1981-)，女，河北臨漳人，河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學博士，從事慢性肝病診治研究。

*通訊作者。E-mail：nanyuemin@163.com

R512.63

A

1007-3205(2017)07-0760-05

10.3969/j.issn.1007-3205.2017.07.004

科學技術(shù)研究與發(fā)展計劃(10276102D)