高榮華，張韶輝

冠心病患者冠狀動(dòng)脈病變與免疫細(xì)胞的相關(guān)研究

高榮華1，張韶輝1

目的 冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┗颊吖跔顒?dòng)脈粥樣硬化病變與免疫細(xì)胞的關(guān)系。方法 選取2014年1月～2016年1月于濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院治療的冠心病患者100例，其中急性心肌梗死（AMI）組患者35例、不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）組患者40例、穩(wěn)定型心絞痛組（SAP）患者25例。同時(shí)選取30例健康者作為對(duì)照組。采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）和單核細(xì)胞CD36比例，同時(shí)檢測(cè)高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白細(xì)胞介素-17（IL-17）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）水平。結(jié)果 AMI組和UAP組外周血CD4+CD25+Treg比例分別為（8.60±1.55）%和（8.17 ±1.43）%，低于對(duì)照組的（10.40±1.43）%和SAP組的（10.72±1.66）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。與對(duì)照組比較，SAP組、AMI組和UAP組單核細(xì)胞CD36比例均升高；AMI組和UAP組高于SAP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。對(duì)照組、SAP組、UAP組以及AMI組hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。相關(guān)性分析結(jié)果顯示，冠心病患者CD4+CD25+Treg和單核細(xì)胞CD36比例與hs-CRP、IL-17、TNF-α等炎癥因子水平無(wú)明顯相關(guān)（P均＞0.05）。結(jié)論 冠心病患者冠狀動(dòng)脈粥樣斑塊的不穩(wěn)定與炎癥和免疫反應(yīng)有關(guān)，外周血單核細(xì)胞CD36比例明顯增加，CD4+CD25+Treg比例明顯減低，炎癥因子水平升高。

冠狀動(dòng)脈疾??；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；單核細(xì)胞

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟?。ü谛牟。┦桥R床上較為常見的心血管疾病，主要由冠狀動(dòng)脈粥樣硬化導(dǎo)致管腔狹窄或阻塞引起心肌缺血、缺氧或壞死，其發(fā)病率較高，且近年來(lái)發(fā)病人數(shù)持續(xù)上升[1]。冠心病患者的臨床癥狀多為胸痛、心前區(qū)不適、心悸、乏力等，嚴(yán)重者可出現(xiàn)心力衰竭、猝死等，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量[2]。炎癥因子如高敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）、白細(xì)胞介素-17（IL-17）和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等在冠心病的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮重要作用，能擴(kuò)大斑塊的脂質(zhì)中心并破壞纖維組織的完整性，導(dǎo)致斑塊不穩(wěn)定甚至破裂，最終促使冠心病的發(fā)生[3]。也有研究表明[4]，免疫反應(yīng)與動(dòng)脈粥樣硬化有關(guān)。為進(jìn)一步探討冠心病與免疫反應(yīng)的關(guān)系，本研究對(duì)冠心病患者和正常人群的外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）、單核細(xì)胞CD36、hs-CRP、IL-17和TNF-α等進(jìn)行檢測(cè)分析。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象和分組 選取2014年1月～2016年1月于濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院治療的冠心病患者100例，其中急性心肌梗死（AMI）組患者35例、不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）組患者40例、穩(wěn)定型心絞痛組（SAP）患者25例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合國(guó)際心臟病學(xué)會(huì)及WHO《缺血性心臟病的命名及診斷標(biāo)準(zhǔn)》中冠心病的標(biāo)準(zhǔn)；②近6個(gè)月內(nèi)未進(jìn)行心臟外科或介入手術(shù)治療；③患者及家屬知情同意并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并心力衰竭、心肌病、先天性心臟病、肺心病、風(fēng)濕性心臟病及其他嚴(yán)重心臟瓣膜?。虎诤喜⒛[瘤、創(chuàng)傷、感染、自身免疫性疾病等。另選取30例健康者納入對(duì)照組（冠狀動(dòng)脈造影正常，無(wú)器質(zhì)性疾病）。

1.2 標(biāo)本采集及處理 所有入選者均于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血約10 ml（UAP組患者于最后一次胸痛發(fā)作后的24 h內(nèi)采血，AMI組患者于發(fā)病后24 h內(nèi)），分為兩份，肝素抗凝后以3000 r/min離心10 min，取上清液，-80℃保存?zhèn)溆茫糜跈z測(cè)炎癥因子；另一份未抗凝，并于采集4 h內(nèi)采用流式細(xì)胞儀測(cè)定。

1.3 檢測(cè)方法 TNF-α和IL-17采用酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定，采用酶標(biāo)儀（HC-880，德國(guó)拜發(fā)公司）及試劑盒（北京陸橋科技公司）測(cè)定，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。hs-CRP采用全自動(dòng)生化分析儀（C8000，美國(guó)雅培公司）以及配套試劑盒（四川新成生物科技有限公司）測(cè)定，采用膠乳免疫透射比濁法進(jìn)行檢測(cè)。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定入選者外周血中CD4+CD25+Treg和單核細(xì)胞CD36，流式細(xì)胞儀為谷美特科技有限公司生產(chǎn)，型號(hào)為Coulter Epics XL，鼠抗人CD25抗體、鼠抗人CD4抗體和鼠抗人Ig G1免疫球蛋白均購(gòu)自美國(guó) Beckman-Coulter公司，檢測(cè)步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 19.0軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間均數(shù)比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組基線資料比較 各組年齡、性別比、總膽固醇和三酰甘油比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）（表1）。

2.2 各組外周血CD4+CD25+Treg和單核細(xì)胞CD36比較 AMI組和UAP組外周血CD4+CD25+Treg比例分別為（8.60±1.55）%和（8.17± 1.43）%，低于對(duì)照組的（10.40±1.43）%和SAP組的（10.72±1.66）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）。與對(duì)照組比較，SAP組、AMI組和UAP組單核細(xì)胞CD36比例均升高；AMI組和UAP組高于SAP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）（圖1～2、表2）。

表1 各組基線資料比較

圖1 各組CD4+CD25+Treg流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)圖

圖2 各組單核細(xì)胞CD36流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)圖

2.3 各組炎癥因子水平比較 對(duì)照組、SAP組、UAP組以及AMI組hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＜0.05）（表3）。

2.4 相關(guān)性分析結(jié)果 將患者外周血CD4+CD25+Treg和單核細(xì)胞CD36分別與hs-CRP、IL-17和TNF-α進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示CD4+CD25+Treg與hs-CRP、IL-17、TNF-α無(wú)相關(guān)性（P均＞0.05），單核細(xì)胞CD36與hs-CRP、IL-17和TNF-α無(wú)相關(guān)性（P均＞0.05）。

表2 各組外周血CD4+CD25+Treg和單核細(xì)胞CD36比較

表3 各組炎癥因子水平比較

3 討論

冠心病發(fā)病率和死亡率較高，是目前全球死亡率最高的疾病之一[5]。冠心病與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān)，同時(shí)高血壓、高血脂、高血糖和不良生活方式等也加速冠心病的形成[6]。目前臨床上通常將冠心病分為5種類型：心絞痛型、心肌梗死型、無(wú)癥狀心肌缺血型、心力衰竭型和猝死型，患者的常見癥狀有典型胸痛、心前區(qū)不適、心悸、乏力、發(fā)熱、出汗、驚恐、惡心、嘔吐、心力衰竭等，嚴(yán)重影響其生活質(zhì)量，甚至導(dǎo)致死亡[7,8]。

目前臨床上多采用藥物和介入治療冠心病，并已取得初步成效，但冠心病的發(fā)病機(jī)制至今尚未完全清楚[9]。有研究表明[10-12]，冠狀動(dòng)脈硬化病變是一種炎癥反應(yīng)，由炎癥細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面粘附分子介導(dǎo)，而C反應(yīng)蛋白在其發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮著重要作用。研究表明[13,14]，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變與T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)有關(guān)，高血壓、高血脂等致病因素可造成血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，分泌各種細(xì)胞因子，激活平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，從而釋放更多的細(xì)胞因子，激活T淋巴細(xì)胞并促使免疫反應(yīng)的發(fā)生，CD4+CD25+Treg是一種功能成熟的T細(xì)胞亞群，可通過(guò)負(fù)向調(diào)節(jié)來(lái)抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的作用，進(jìn)而減少免疫性疾病的發(fā)生，并通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子（TGF-β）、IL-10等多種細(xì)胞因子進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)[15]。

為了進(jìn)一步探討冠狀動(dòng)脈粥樣硬化與免疫細(xì)胞的關(guān)系，本研究分別選取了AMI、UAP和SAP患者，分別檢測(cè)了各組外周血CD4+CD25+Treg、單核細(xì)胞CD36比例，以及hs-CRP、IL-17和TNF-α水平。結(jié)果表明，AMI組和UAP組外周血CD4+CD25+Treg比例明顯低于SAP組和對(duì)照組，單核細(xì)胞CD36明顯高于SAP組和對(duì)照組，提示CD4+CD25+Treg與單核細(xì)胞CD36在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中有一定的調(diào)控作用。同時(shí)，對(duì)照組、SAP組、UAP組以及AMI組hs-CRP、IL-17和TNF-α水平均呈升高趨勢(shì)，提示冠狀動(dòng)脈粥樣硬化與炎癥反應(yīng)關(guān)系密切。但患者外周血CD4+CD25+Treg和單核細(xì)胞CD36比例與炎癥因子水平無(wú)相關(guān)性。其原因可能是樣本量不足，研究具有一定局限性和缺陷，仍需擴(kuò)大樣本量作進(jìn)一步的深入研究。

[1] Bangalore S,Guo Y,Samadashvili Z,et al. Everolimus-eluting stents or bypass surgery for multivessel coronary disease[J]. New Engl J Med,2015,372(13):1213-22.

[2] Park SJ,Ahn JM,Kim YH,et al. Trial of everolimus-eluting stents or bypass surgery for coronary disease[J]. New Engl J Med,2015,372(13): 1204-12.

[3] 尤菲. 冠心病患者血清白介素15水平及其與冠脈病變嚴(yán)重程度相關(guān)性的研究[D]. 第四軍醫(yī)大學(xué),2015.

[4] 姜鵬宇. 免疫相關(guān)GTP酶IRGM1基因多態(tài)性與血清膽固醇及冠心病發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性研究[D]. 哈爾濱醫(yī)科大學(xué),2014.

[5] Matsuzawa Y,Guddeti RR,Kwon TG,et al. Treating Coronary Disease and the Impact of Endothelial Dysfunction[J]. Prog Cardiovasc Dis,2014,57(5):431-42.

[6] Otsuka F,Joner M,Prati F,et al. Clinical classification of plaque morphology in coronary disease[J]. Nat Rev Cardiol,2014,11(7):379-89.

[7] 周偉. 冠心病患者血尿酸、同型半胱氨酸與冠脈病變嚴(yán)重程度關(guān)系[J]. 現(xiàn)代儀器與醫(yī)療,2015,21(6):71-2.

[8] 張彬. 冠心病診斷方法探討[J]. 世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘:連續(xù)型電子期刊,2014,14(30):55-8.

[9] 王粵東. 健康教育干預(yù)對(duì)冠心病心絞痛患者藥物治療的影響分析[J]. 中國(guó)衛(wèi)生產(chǎn)業(yè),2015,12(28):132-3.

[10] 肖琛. 阿托伐他汀在ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用研究[D]. 山東大學(xué),2014.

[11] 丁怡. 雙重特異性磷酸酶5介導(dǎo)地塞米松對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的抑制作用[J]. 中國(guó)病理生理雜志,2015,6(10):123-6.

[12] 許倡濤. TXNIP介導(dǎo)的心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞NLRP3炎性小體活化在心肌缺血再灌注損傷中的機(jī)制研究[D]. 第四軍醫(yī)大學(xué),2015.

[13] 周琳,王樂(lè)民,蔣金法,等. 靜脈血栓栓塞癥與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化患者T細(xì)胞免疫功能變化的比較分析[J]. 臨床心血管病雜志,2015,26(5):528-31.

[14] 曾惠,金晶. PTX3與動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥免疫反應(yīng)研究分析[J].中國(guó)衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)管理,2015,8(13):179-80.

[15] 鞠延玲,鮑百麗. 冠心病患者T淋巴細(xì)胞亞群、同型半胱氨酸與疾病的相關(guān)性[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志,2014,26(9):2432-3.

本文編輯：姚雪莉

Correlation between coronary artery lesions and immune cells in patients with coronary heart disease

GAO Rong-hua*, ZHANG Shao-hui.*Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Jining Medical University, Jining 272100, China.

GAO Rong-hua, E-mail: 13854778476@163.com

Objective To discuss the relationship between coronary atherosclerosis and immune cells in patients with coronary heart disease (CHD). Methods CHD patients (n=100) were chosen from the Affiliated Hospital of Jining Medical University from Jan. 2014 to Jan. 2016, and divided into acute myocardial infarction group (AMI group, n=35), unstable angina pectoris group (UAP group, n=40) and stable angina pectoris group (SAP group, n=25). At the same time, 30 healthy controls were chosen into control group. The percentages of peripheral CD4+CD25+regulatory T cells (Treg) and monocyte CD36 were detected by using flow cytometer, and meanwhile the levels of high-sensitivity C-reactive protein (hs-CRP), interleukin-17 (IL-17) and tumor necrosis factor-α (TNF-α) were detected in all groups. Results The percentage of CD4+CD25+Treg was (8.60±1.55)% in AMI group and (8.17±1.43)% in UAP group, and were lower than that in control group [(10.40±1.43)%] and SAP group [(10.72±1.66)%, all P<0.05]. The percentage of monocyte CD36 increased in SAP group, AMI group and UAP group compared with control group, and was higher in AMI group and UAP group than that in SAP group (all P<0.05). The levels of hs-CRP, IL-17 and TNF-α showed an ascending trend in all groups (all P<0.05). The results of correlation analysis showed that the percentages of CD4+CD25+Treg and monocyte CD36 were not correlated to levels of inflammatory factors including hs-CRP, IL-17 and TNF-α (all P>0.05) in CHD patients. Conclusion The instability of coronary artery atherosclerotic plaque is related to inflammation and immune reactions, percentage of peripheral monocyte CD36 increases significantly, percentage of CD4+CD25+Treg decreases significantly, and levels of inflammatory factors increase in CHD patients.

Coronary artery lesions; Regulatory T cells; Monocytes

R543.3

A

1674-4055(2017)06-0727-03

1272100 濟(jì)寧,濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心內(nèi)科

高榮華,E-mail:13854778476@163.com

10.3969/j.issn.1674-4055.2017.06.25