羅春艷　韓韜

摘 要：目的 探討衡陽(yáng)地區(qū)EBV感染與乳腺癌的相關(guān)性。方法 收集不同發(fā)展階段的乳腺病變組織100例，分別PCR法，LCMPCR法、ISH法及免疫組化法分別從DNA、RNA、蛋白質(zhì)三個(gè)層面檢測(cè)標(biāo)本中EBV的表達(dá)情況，分析EBV與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。結(jié)果 DNA層面：PCR法僅在22例乳腺癌標(biāo)本中為陽(yáng)性。采用ISH法在100標(biāo)本中復(fù)檢EBV DNA時(shí)，表達(dá)均為陰性。采用LCM PCR檢測(cè)22例PCR擴(kuò)增陽(yáng)性標(biāo)本的上皮細(xì)胞和間質(zhì)淋巴細(xì)胞，僅在間質(zhì)細(xì)胞中擴(kuò)增出EBV DNA，癌組織無(wú)EBV DNA表達(dá)。RNA及蛋白質(zhì)層面：EBVRNA探針的ISH法檢測(cè)及免疫組化法檢測(cè)所有標(biāo)本，結(jié)果為陰性。結(jié)論 在該次試驗(yàn)中選取的衡陽(yáng)地區(qū)的標(biāo)本中，乳腺癌發(fā)生、發(fā)展與EBV感染無(wú)關(guān)。

關(guān)鍵詞：乳腺腫瘤 EB病毒聚合酶鏈反應(yīng) 原位雜交免疫組織化學(xué)

中圖分類號(hào)：R36 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2017）06（b）-0211-02

EBV與鼻咽癌、淋巴瘤及胃癌等惡性腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展都有密切關(guān)系，被認(rèn)為是人類腫瘤病毒之一。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤。近年來(lái)EBV感染被認(rèn)為是導(dǎo)致乳腺癌發(fā)生的一個(gè)易感因素。該文將收集衡陽(yáng)地區(qū)病人乳腺良、惡性病變組織，研究衡陽(yáng)地區(qū)乳腺癌的發(fā)生是否與EBV感染有直接關(guān)系，為防治乳腺癌尋求一條新途徑。

1 材料

材料收集2015—2016年在衡陽(yáng)市南華大學(xué)附屬南華醫(yī)院收集乳腺病變組織100例，其中良性病變31例、不典型增生3例、原位癌5例、乳腺浸潤(rùn)癌61例。

2 方法

（1）用PCR方法擴(kuò)增LMP-1基因。

（2）CM PCR法檢測(cè)EBVDNA。

（3）原位雜交法檢測(cè)標(biāo)本中的EBVDNA及EBV RNA。

（4）免疫組化檢測(cè)乳腺病變組織EBV的LMP1蛋白表達(dá)。

3 結(jié)果

3.1 檢測(cè)乳腺病變組織中EBV DNA

3.1.1 PCR

100例乳腺良、惡性病變標(biāo)本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，22例乳腺癌標(biāo)本中擴(kuò)增出EBV DNA（如圖1），其余的乳腺纖維腺瘤及原位癌等標(biāo)本中均未檢出。

3.1.2 LCM PCR檢測(cè)

22例陰性樣本的乳腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞均未檢測(cè)到EBVDNA；22例陽(yáng)性樣本中僅在乳腺間質(zhì)細(xì)胞中擴(kuò)增出EBV DNA，乳腺癌細(xì)胞中未檢測(cè)到EBV DNA。

3.1.3 ISH檢測(cè)

在所有病變組織中均未檢測(cè)到陽(yáng)性雜交信號(hào)（如圖2）。

3.2 檢測(cè)乳腺病變組織中EBV RNA

在61例乳腺癌標(biāo)本中均未檢測(cè)到EBV的小RNA的表達(dá)，結(jié)果為陰性。

3.3 乳腺病變組織中EBV LMP1 的表達(dá)

采用免疫組化法檢測(cè)EBV 潛伏膜蛋白LMP1 在100 例乳腺良、惡性病變組織中的表達(dá)情況，結(jié)果均呈陰性。

乳腺癌擴(kuò)增結(jié)果：陰性

1、3、5 EBV DNA陽(yáng)性

2、4、6 EBV DNA陰性

4 討論

自1994年Horiuchi等[1]首次采用PCR在乳腺癌中檢測(cè)到，EBV與乳腺癌發(fā)病是否存在相關(guān)系引起了學(xué)者們極大的興趣，也開展了大量試驗(yàn)[2]。但由于實(shí)驗(yàn)材料處理方式不同以及檢測(cè)方法的差異，無(wú)法得出一致結(jié)論，EBV與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展是否相關(guān)成為一個(gè)令人困惑的問(wèn)題。

該實(shí)驗(yàn)在設(shè)計(jì)時(shí)用原位雜交技術(shù)、PCR法及免疫組化法分別從RNA、DNA及蛋白質(zhì)水平檢測(cè)乳腺標(biāo)本是否表達(dá)EBV，以避免假陰性。在乳腺間質(zhì)細(xì)胞中含有豐富的淋巴細(xì)胞，如EBV為淋巴細(xì)胞表達(dá)則檢測(cè)結(jié)果可出現(xiàn)假陽(yáng)性。DNA層面檢測(cè)結(jié)果：PCR法僅在22例乳腺癌標(biāo)本中為陽(yáng)性。采用ISH法在100標(biāo)本中復(fù)檢EBV DNA時(shí)，表達(dá)均為陰性。采用LCM PCR檢測(cè)22例PCR擴(kuò)增陽(yáng)性標(biāo)本的上皮細(xì)胞和間質(zhì)淋巴細(xì)胞，僅在間質(zhì)細(xì)胞中擴(kuò)增出EBV DNA，癌組織無(wú)EBV DNA表達(dá)。RNA及蛋白質(zhì)層面：EBV RNA 探針的ISH 法檢測(cè)及免疫組化法檢測(cè)所有標(biāo)本，結(jié)果為陰性。

綜上所述，該實(shí)驗(yàn)通過(guò)多種檢測(cè)方法，從多層面證實(shí)該次試驗(yàn)中選取的衡陽(yáng)地區(qū)的標(biāo)本中，乳腺癌發(fā)生、發(fā)展與EBV感染無(wú)關(guān)。該實(shí)驗(yàn)的標(biāo)本均為衡陽(yáng)地區(qū)，不除外其他地區(qū)乳腺癌與EBV 可能有相關(guān)性。

參考文獻(xiàn)

[1] Horiuchi K，Mishima K，Ohsawa M，et al. Carcinoma of stomachand breast with lymphoid stroma： localisation of Epstein-Barr virus[J].J Clin Pathol，1994，47（6）：538-540.

[2] Baltzell K，Buehring G C，Krishnamurthy S，et al.Epstein-Barrvirus is seldom found in mammary epithelium of breast cancer tissueusing in situ molecular methods[J].Breast Cancer Res Treat，2011，132（1）：267-274.