郝 劍,劉 賓,李 菲, 韓 悅, 陶 諫

1.西安市中心醫(yī)院燒傷整形外科 (西安710003),2.西安醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院(西安 710021)

磷脂酰膽堿及膽汁酸鹽動(dòng)物溶脂實(shí)驗(yàn)研究*

郝 劍1,劉 賓1△,李 菲2, 韓 悅1, 陶 諫1

1.西安市中心醫(yī)院燒傷整形外科 (西安710003),2.西安醫(yī)學(xué)院護(hù)理學(xué)院(西安 710021)

目的: 通過(guò)選用保脂妥(Lipostabil)、磷脂酰膽堿(PC)以及不同濃度脫氧膽酸鹽(DC)在動(dòng)物體內(nèi)溶脂對(duì)照觀察，以探討其溶脂效果。方法:分別將1ml的Lipostabil、5%PC以及不同濃度DC注射到豚鼠皮下脂肪層，觀察注射后不同時(shí)間點(diǎn)，各組注射區(qū)皮膚外觀、皮下脂肪厚度、皮下脂肪組織病理學(xué)改變以及血清相關(guān)生化指標(biāo)改變。結(jié)果： Lipostabil、5% PC以及1%～5% DC在動(dòng)物體內(nèi)對(duì)于脂肪細(xì)胞均具有明顯的溶解破壞作用,且DC濃度越高，組織的炎性反應(yīng)越強(qiáng)。結(jié)論：在合適的注射層次，1%濃度脫氧膽酸鹽在動(dòng)物體內(nèi)具有較好的溶脂效果。

近年來(lái)，以消減局部皮下脂肪為目的的新型能源類(超聲、水動(dòng)力吸脂)和注射類技術(shù)(Lipodissolve、間皮療法等)正在迅速得到研究和應(yīng)用。注射溶脂是通過(guò)向皮下注射藥理活性(磷脂酰膽堿)制劑、生理清潔(膽汁鹽)制劑等對(duì)脂肪組織進(jìn)行化學(xué)性燒蝕或破壞。在歐洲和美洲國(guó)家開(kāi)展以來(lái)，因其創(chuàng)傷不、恢復(fù)快，操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)得到關(guān)注。近年來(lái)，隨著對(duì)注射溶脂的各項(xiàng)基礎(chǔ)研究的開(kāi)展，這種方法或許會(huì)在不久的將來(lái)成為一種獲得各國(guó)許可的非手術(shù)脂肪組織不規(guī)則校正療法，為不愿意接受手術(shù)的患者提供適度脂肪消減治療。然而由于注射溶脂在多數(shù)國(guó)家并沒(méi)有得到相關(guān)法律的認(rèn)可, 其缺乏標(biāo)準(zhǔn)化配方且安全性也備受爭(zhēng)議，因此國(guó)內(nèi)目前并未批準(zhǔn)開(kāi)展此項(xiàng)技術(shù)。在前期的體外實(shí)驗(yàn)中，我們通過(guò)對(duì)目前最常用的注射溶脂藥保脂妥(Lipostabil)、磷脂酰膽堿(Phosphatidylcholine,PC)以及不同濃度脫氧膽酸鹽(Deoxycholate,DC)的體外對(duì)照觀察實(shí)驗(yàn)，對(duì)其溶脂效果作用進(jìn)行初步的觀察及探討。在接下來(lái)的實(shí)驗(yàn)中，我們將保脂妥以及其有效成分磷脂酰膽堿和脫氧膽酸鹽在動(dòng)物體內(nèi)的溶脂效果進(jìn)行進(jìn)一步的觀察與研究，對(duì)注射溶脂的可行性及安全性進(jìn)行更深入的探討。

材料與方法

1 材 料 選用英國(guó)種Hartley純白豚鼠(第四軍醫(yī)大學(xué)動(dòng)物中心提供)，Lipostabil(主要成分5%磷脂酰膽堿PC、4.75%脫氧膽酸鹽DC，法國(guó) Aventis 公司)，5%PC及4．5%DC(美國(guó) Sigma 公司), 全自動(dòng)生化分析儀 7180(日本日立公司)。

2 方 法

2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組：選用英國(guó)種Hartley純白豚鼠25只，雌雄各半，重量(200±30)g，隨機(jī)分為五組，每組5只。

2.2 試劑分組：A組: Lipostabil注射組 1ml；B組: 5%PC注射組1ml； C組:DC注射組1ml(1%DC,2%DC,3%DC,4%DC,5%DC )；空白對(duì)照組:生理鹽水1ml。

2.3 注射區(qū)域分組及觀察間隔：注射區(qū)域有：①(大體觀察、B超觀測(cè)、病理學(xué)檢查)肩部(A)、背部(B)、臀部(C)、對(duì)側(cè)為空白對(duì)照(D)；②(血清生化指標(biāo)分析)各組均選擇臀部；注射深度為：脂肪層中間部位；分別于注射后12、48h、2、4、8、12周觀測(cè)各項(xiàng)相關(guān)指標(biāo)。

3 觀察項(xiàng)目

3.1 大體觀察：于各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)觀察注射局部皮膚及皮下大體狀況，有無(wú)紅腫、結(jié)節(jié)、潰破等。

3.2 B超檢測(cè)：于各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)觀察注射溶脂藥物后局部皮下脂肪組織厚度的變化以及結(jié)節(jié)產(chǎn)生的情況。

3.3 病理學(xué)檢測(cè)：分別于注射后48h、4周及12周切取注射點(diǎn)及距注射點(diǎn)1 cm處全層組織，分別作HE染色，光鏡下進(jìn)行病理學(xué)分析，觀察注射前后以及不同藥物注射后皮下脂肪及其相鄰組織的結(jié)構(gòu)變化。

3.4 相關(guān)血清生化指標(biāo)分析：分別于藥物注射后48h及2周，采豚鼠心臟血約1ml,進(jìn)行白細(xì)胞、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯、肌紅蛋白水平檢測(cè)。

結(jié) 果

1 溶脂藥物注射后局部皮膚形態(tài)觀察 A組注射Lipostabil，局部皮膚色澤全程無(wú)明顯改變，48h后注射區(qū)域出現(xiàn)輕度可見(jiàn)腫脹，2周后部分注射區(qū)皮膚增厚或可觸及小的硬結(jié)。B組注射5%PC，局部皮膚色澤全程無(wú)明顯改變，48h注射區(qū)域局部可見(jiàn)輕度腫脹，2周后部分注射區(qū)皮下可觸及小的硬結(jié)。C組注射4%和5%濃度DC后24h局部皮膚出現(xiàn)輕度紅腫，其余各濃度DC組注射局部皮膚色澤無(wú)改變及腫脹出現(xiàn)，2周后除各濃度DC組均有局部皮膚增厚或皮下結(jié)節(jié)出現(xiàn)。

2 B超檢測(cè)皮下組織的炎癥反應(yīng)以及脂肪組織厚度變化 注射前實(shí)驗(yàn)區(qū)域豚鼠皮下脂肪平均厚度為(9±1.08)mm,注射后各組藥物注射區(qū)皮下脂肪平均厚度為(6±0.98)mm，二者相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4～8周時(shí)間段各組注射區(qū)皮下B超均可探及數(shù)量不等結(jié)節(jié)，平均直徑約(3±0.67)mm(圖1)。

3 病理檢測(cè) A組Lipostabil，B組5%PC，C組(1%～5%)DC注射后1周后皮下脂肪細(xì)胞均出現(xiàn)了明顯的皺縮、壞死以及大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)(其中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)以4%，5%PC組尤為明顯)，脂肪細(xì)胞間隙可見(jiàn)泡沫樣細(xì)胞的出現(xiàn)，但血管等結(jié)構(gòu)清晰(圖2)；4周各組注射區(qū)域皮下組織淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)減少，大量脂肪細(xì)胞溶解伴多量泡沫樣細(xì)胞形成，鏡下可見(jiàn)多量纖維組織間隔產(chǎn)生(圖4)；8周左右注射區(qū)域皮下組織纖維細(xì)胞成分持續(xù)增加，脂肪細(xì)胞明顯融合減少(圖4)。4%DC，5%DC組部分標(biāo)本皮下組織血管結(jié)構(gòu)出現(xiàn)破壞，部分管腔內(nèi)出現(xiàn)血栓(圖5)。

圖1 皮下脂肪層可見(jiàn)數(shù)個(gè)纖維結(jié)節(jié)

4 相關(guān)血清生化指標(biāo)分析 注射后12h,48h及2周，各組白細(xì)胞、谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、甘油三酯、肌紅蛋白水平檢測(cè)較正常對(duì)照組無(wú)明顯變化(48h與2周各生化指標(biāo)結(jié)果相近，數(shù)值變化無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異)。注射后48h豚鼠血清生化指標(biāo)檢查結(jié)果,見(jiàn)表1。

表1 不同溶脂成份注射后48h豚鼠血清生化指標(biāo)的變化±s)

測(cè)試組白細(xì)胞(109/L)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(U/L)谷草轉(zhuǎn)氨酶(U/L)甘油三酯(mmol/L)肌紅蛋白(μg/L)Lipostabil3．29±1．0335．98±5．1869．73．±23．110．68±0．3219．28±2．345%PC4．04±1．1732．37±4．3975．24．±19．980．58±0．2320．45±3．211%DC3．87±1．2131．98±4．4571．88．±26．330．65±0．1917．69±1．992%DC4．32±0．9835．48±7．2779．75．±25．540．60±0．2722．64±2．673%DC3．92±1．1436．68±6．2880．86．±18．250．．66±0．3121．47±3．014%DC4．22±1．3133．13±5．7673．87±27．320．．57±0．2518．33±3．985%DC3．52±1．2437．29±8．3268．26．±24．470．54±0．2920．27±3．150．9%NaCl4．18±1．3633．13±5．7674．47±22．290．61±0．3817．98±4．01

注：各組各項(xiàng)與對(duì)照組(0.9%NaCl)比較，P>0.05

討 論

近年來(lái)，以消減局部皮下脂肪為目的的新型能源類(超聲、水動(dòng)力吸脂)和注射類溶脂技術(shù)(Lipodissolve、間皮療法等)正在迅速得到研究和應(yīng)用[1]。注射溶脂是通過(guò)向皮下注射藥理活性(磷脂酰膽堿)制劑、生理清潔(如膽汁鹽)制劑等對(duì)脂肪組織進(jìn)行化學(xué)性燒蝕或破壞。目前在部分歐洲國(guó)家被許可用于脂肪組織化學(xué)性燒蝕或破壞的藥物主要是由法國(guó)Sanofi-Aventis公司生產(chǎn)的保脂妥(Lipostabil)。Lipostabil除了局部脂肪溶解，還被用于靜脈注射治療脂肪栓塞、血脂障礙和酒精性肝硬化等方面。

近年來(lái)，關(guān)于Lipostabil以及其主要成分磷脂酰膽堿(PC)、脫氧膽酸鹽(DC)局部消脂的研究報(bào)告大量涌現(xiàn)[2-7]，但許多研究對(duì)局部注射溶脂的臨床安全性也提出了很多質(zhì)疑[8]。在前面的體外試驗(yàn)中，我們初步驗(yàn)證了DC及Lipostabil均具有明確的體外脂肪細(xì)胞破壞作用，且DC的脂肪細(xì)胞破壞作用在一定范圍內(nèi)與其濃度無(wú)明顯正相關(guān)性[9]。

本研究的動(dòng)物體內(nèi)溶脂實(shí)驗(yàn)表明,Lipostabil，以脫氧膽酸鹽為溶媒的5%PC，1%～5%濃度的DC均具有明確的局部脂肪溶解和破壞作用。但注射部位的局部組織反應(yīng)以及病理學(xué)檢查同時(shí)也提示：越高濃度的DC局部注射后的組織的炎性反應(yīng)較Lipostabil和5%PC為重。這表明濃度越高，DC對(duì)于機(jī)體組織的炎癥誘導(dǎo)效應(yīng)越強(qiáng)烈。該結(jié)論同時(shí)也在一定程度上驗(yàn)證了前期實(shí)驗(yàn)中我們關(guān)于PC可能具有對(duì)DC溶解脂肪組織進(jìn)行乳化和消除的作用、可以減輕注射溶脂后常見(jiàn)副反應(yīng)的推測(cè)。

B超以及組織病理學(xué)檢查顯示,注射Lipostabil、 5%PC、1%～5%濃度的DC后，局部的皮下脂肪層厚度變薄，注射區(qū)域脂肪細(xì)胞逐漸被增生的纖維組織所替代。組織學(xué)檢查同時(shí)也提示，如果注射層次深至肌肉或太淺至真皮，則有可能導(dǎo)致組織壞死以及血管栓塞。因此注射深度以及層次應(yīng)該是局部注射溶脂最為關(guān)鍵的安全要素之一。

雖然對(duì)Lipostabil、PC，以及DC這類藥物的溶脂作用已有較多研究，但脂肪細(xì)胞在被溶解后的確切變化目前仍不清晰。75%以上的脂肪組織是甘油三酸酯，其被溶解破壞后是否會(huì)引血液內(nèi)甘油三酯的短期內(nèi)升高？此外，有研究表明經(jīng)皮下注射的PC或DC也會(huì)經(jīng)系統(tǒng)吸收，它們是否會(huì)引起肝功的一過(guò)性損害或者機(jī)體的全身炎癥反應(yīng)？因此我們對(duì)于注射后不同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的動(dòng)物血樣標(biāo)本進(jìn)行了相關(guān)的血清生化學(xué)檢查。結(jié)果顯示在低劑量注射的前提下，豚鼠血清中相關(guān)生化指標(biāo)與正常相比并未出現(xiàn)明顯變化，提示小劑量溶脂藥物本身以及局部溶脂后產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物對(duì)豚鼠機(jī)體無(wú)明顯的影響。

最新的研究顯示，標(biāo)準(zhǔn)濃度的Lipostabil多次注射即可能產(chǎn)生肌肉和血管組織壞死[10]。大劑量的PC或者DC局部吸收也可能導(dǎo)致胃腸不適而、輕度頭暈、出血等副反應(yīng)。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)中的相關(guān)結(jié)果，我們認(rèn)為在保證溶脂效果的前提下，低濃度、低劑量注射應(yīng)該也是局部注射溶脂重要的安全要素之一。

可見(jiàn)，在合適的注射層次，1%濃度DC在動(dòng)物體內(nèi)同樣具有較好局部溶脂效果。但其是否可以作為人體局部注射溶脂藥物的另外一種選擇，這將是要深入研究的問(wèn)題。

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(收稿：2016-06-12)

*陜西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(2012SF2-06)

磷脂酰膽堿類/藥物動(dòng)力學(xué) 脫氧膽酸/藥物動(dòng)力學(xué) @溶脂 豚鼠

R392.5

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.07.007

△通訊作者