（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站青海西寧810000）

牛溶血性巴氏桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

趙美盈

（青海省西寧市大通縣黃家寨鎮(zhèn)獸醫(yī)站青海西寧810000）

西寧市某肉牛養(yǎng)殖場飼養(yǎng)的多頭犢牛出現(xiàn)了體溫升高、咳嗽和呼吸困難等癥狀，采集該牛場病死犢牛肝臟、心臟和肺臟作為病料，通過病料抹片鏡檢、細(xì)菌分離培養(yǎng)及生化鑒定，對造成犢牛病死原因進(jìn)行了分離鑒定，并對分離細(xì)菌做藥物敏感性試驗(yàn)，為臨床用藥提供依據(jù)。

犢牛；溶血性巴氏桿菌；分離鑒定；藥敏試驗(yàn)

2016年3月，西寧市某肉牛養(yǎng)殖場多頭犢牛發(fā)病，臨床主要表現(xiàn)為體溫升高達(dá)41℃，咳嗽，呼吸困難，腹瀉，流鼻涕，個(gè)別病牛出現(xiàn)抽搐和肌肉痙攣等癥狀，牛場獸醫(yī)先后使用慶大霉素、青霉素、環(huán)丙沙星及磺胺嘧啶等藥物治療，效果不顯著，急性病例3~4d死亡，該牛場一個(gè)多月先后死亡犢牛達(dá)80多頭，造成了極大的經(jīng)濟(jì)損失。

1 材料與方法

1.1 材料

①病料源于西寧市某肉牛養(yǎng)殖場病死犢牛的肺臟、肝臟和心臟。②革蘭氏染色液、瑞氏染色液；麥康凱培養(yǎng)基、血清肉湯培養(yǎng)基、血瓊脂平板培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基和血瓊脂斜面培養(yǎng)基；藥敏試片。

1.2 方法

1.2.1 病料涂片鏡檢將病料新鮮切片置于載玻片上制成涂片，再滴幾滴甲醇，經(jīng)3min左右待其干燥后，分別進(jìn)行革蘭氏染色和瑞氏染色，鏡檢查看細(xì)菌形態(tài)特征和染色特性。

1.2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)通過接種環(huán)進(jìn)行病料組織取樣，劃線接種在血瓊脂平板培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上，于37℃培養(yǎng)24h，查看菌落形態(tài)、細(xì)菌生長狀況和血瓊脂平板有無溶血現(xiàn)象。挑取典型菌落接種在血瓊脂平板培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h，生長菌落形態(tài)一致即可作為鑒定用菌株；從菌落形態(tài)一致的血瓊脂平板培養(yǎng)基上挑取單個(gè)菌落分別接種在血清肉湯培養(yǎng)基、血瓊脂斜面培養(yǎng)基，于37℃培養(yǎng)24h，涂片，革蘭氏染色，顯微鏡觀察可見革蘭氏陰性球狀桿菌或小桿菌。

1.2.3 生化試驗(yàn)①將血瓊脂斜面培養(yǎng)基上的細(xì)菌（下同）分別接種在水楊苷、甘露醇、乳糖、D-山梨醇和D-木糖中，于37℃培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果。②將細(xì)菌接種于麥康凱培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)18~24 h，查看是否有菌落生長，有則為陽性。③將細(xì)菌接種在硝酸鹽培養(yǎng)基中，于37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)18~24h，然后加入硝酸鹽還原試驗(yàn)試劑，查看細(xì)菌是否還原硝酸鹽。

1.2.4 藥敏試驗(yàn)采用圓形紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，檢測細(xì)菌對藥敏紙片的敏感程度。

2 結(jié)果

2.1 病料涂片鏡檢結(jié)果

革蘭氏染色鏡檢可見革蘭氏陰性小桿菌；瑞氏染色鏡檢可見兩極著色的小桿菌。

2.2 細(xì)菌分離培養(yǎng)結(jié)果

血清肉湯培養(yǎng)基上的細(xì)菌生長良好，肉湯渾濁；血瓊脂平板培養(yǎng)基上的細(xì)菌生長良好，形成濕潤、邊緣整齊、半透明的圓形菌落呈灰白色，且出現(xiàn)β-溶血；營養(yǎng)瓊脂平板培養(yǎng)基上的細(xì)菌生長不良。挑取典型菌落涂片后，經(jīng)革蘭氏染色鏡檢可見以單個(gè)或成雙排列、兩端鈍圓的革蘭氏陰性小桿菌。

2.3 生化試驗(yàn)結(jié)果（見表1）。

2.4 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

從該場病死犢牛臟器組織中分離的細(xì)菌對強(qiáng)力霉素、紅霉素、復(fù)方新諾明和青霉素等藥物表現(xiàn)出耐藥性；對氯霉素、卡那霉素、慶大霉素和氧氟沙星等藥物敏感。臨床用藥時(shí)可選擇敏感藥物進(jìn)行治療。

表1 生化試驗(yàn)結(jié)果

3 小結(jié)與討論

1）根據(jù)細(xì)菌分離鑒定結(jié)果可確診該肉牛養(yǎng)殖場發(fā)生牛溶血性巴氏桿菌病。溶血性巴氏桿菌作為一種條件性致病菌，在營養(yǎng)缺乏，潮濕和氣溫驟變等誘因條件下會降低牛機(jī)體抵抗力，病原菌伺機(jī)侵入機(jī)體而致病。

2）養(yǎng)牛戶（場）要采取綜合性預(yù)防措施，改善犢牛飼養(yǎng)環(huán)境條件，保持圈舍通風(fēng)良好，以防濕度過大，降低氨氣濃度，同時(shí)做好氣溫偏低時(shí)犢牛防寒保暖工作，避免不良環(huán)境因素的刺激。此外，確保犢牛吃到、吃足初乳能夠有效抵御溶血性巴氏桿菌的感染?！?/p>

10.3969/j.issn.1008-4754.2017.04.011