李 超，王浩先，楊 征，徐嘉元，倪洪波

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）

豬藍(lán)耳病病毒、圓環(huán)病毒和大腸桿菌混合感染的診斷

李 超，王浩先，楊 征，徐嘉元，倪洪波＊

(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江 大慶 163319）

豬繁殖與呼吸綜合征（藍(lán)耳?。┎《竞蛨A環(huán)病毒是引起嚴(yán)重的種豬繁殖障礙的病原,而且經(jīng)常以混合感染的形式出現(xiàn)，直接導(dǎo)致豬群的高發(fā)病率和高死亡率,控制難度增大，經(jīng)濟(jì)損失非常嚴(yán)重。本文通過(guò)對(duì)一例齊齊哈爾市某豬場(chǎng)病豬病例進(jìn)行了臨床癥狀分析和實(shí)驗(yàn)室診斷，確診該病例為繁殖與呼吸障礙綜合征、圓環(huán)病毒和大腸桿菌混合感染。

繁殖與呼吸障礙綜合征；圓環(huán)病毒；混合感染；診斷

豬圓環(huán)病毒病(Porcinecircovirus disease)是 由 豬 圓 環(huán) 病 毒 2型(Porcinecircovirus 2，PCV2)導(dǎo)致的患病豬全身性淋巴結(jié)腫大為特征的多系統(tǒng)器官功能衰竭的一類(lèi)疾病的統(tǒng)稱(chēng)[1]。臨床上的主要表現(xiàn)為斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(PMWS)，豬呼吸疾病綜合征（PRDC）、新生仔豬先天震顫(CT)[2]。不同年齡的豬都可感染豬圓環(huán)病毒，病豬可通過(guò)鼻液、糞便等排泄物排出病毒，經(jīng)口腔和呼吸道途徑可傳染給健康的豬。

豬藍(lán)耳病（PRRS）稱(chēng)為“神秘豬病”、 “豬繁殖與呼吸綜合征”等，我國(guó)將其列為二類(lèi)傳染病。本病是一種高度接觸性傳染病，呈地方性流行。PRRSV只感染豬，各種品種、不同年齡和用途的豬均可感染，但以妊娠母豬和1月齡以?xún)?nèi)的仔豬最易感。患病豬和帶毒豬是本病的重要傳染源。主要傳播途徑是接觸感染、空氣傳播和精液傳播，也可通過(guò)胎盤(pán)垂直傳播。易感豬可經(jīng)口、鼻腔、肌肉、腹腔、靜脈及子宮內(nèi)接種等多種途徑而感染病毒，豬感染病毒后2～14周均可通過(guò)接觸將病毒傳播給其他易感豬。從病豬的鼻腔、糞便及尿中均可檢測(cè)到病毒。易感豬與帶毒豬直接接觸或與污染有PRRSV的運(yùn)輸工具、器械接觸均可受到感染。感染豬的流動(dòng)也是本病的重要傳播方式。

豬大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起豬的一種急性腸道傳染性疾病。臨床上主要表現(xiàn)為腸炎、腸毒血癥等多種癥狀[3]。常見(jiàn)的有仔豬黃痢、仔豬白痢和仔豬水腫病三種。這三種疾病可造成仔豬大量死亡或生長(zhǎng)發(fā)育不良，成為養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的嚴(yán)重障礙之一

但是近幾年， 豬病以病原的多重感染或混合感染為主要的形式出現(xiàn)，豬群發(fā)病多是以?xún)煞N以上的病原體相互協(xié)同造成的，如豬瘟，豬藍(lán)耳病和大腸桿菌。這樣常導(dǎo)致豬群的高發(fā)病率和高死亡率，控制難度增大，經(jīng)濟(jì)損失非常嚴(yán)重[4]。本文通過(guò)對(duì)一例齊齊哈爾市某豬場(chǎng)病豬病例進(jìn)行了臨床癥狀分析及實(shí)驗(yàn)室診斷，確診該病例為圓環(huán)病毒、繁殖與呼吸障礙綜合征和大腸桿菌混合感染。

1 臨床癥狀

仔豬臨床癥狀主要表現(xiàn)為少數(shù)仔豬可見(jiàn)耳部、體表皮膚發(fā)紫；腹瀉，體溫升高至40 ℃以上，呼吸困難，有時(shí)呈腹式呼吸，食欲減退或廢絕，腹瀉，有的仔豬口鼻奇癢，常用鼻盤(pán)、口端摩擦圈舍的壁欄，鼻有分泌物；有的發(fā)病仔豬呈“八字形”呆立，后軀癱瘓，逐漸消瘦；被毛粗亂，肌肉震顫，共濟(jì)失調(diào)。

2 病理學(xué)診斷

主要病理變化淋巴結(jié)腫大特別是腹股溝淋巴結(jié)，扁桃體出血，喉頭黏膜出血，心外膜有針尖大出血點(diǎn)。肺有出血點(diǎn)或塊狀淤血，脾臟腫大有出血點(diǎn)， 周邊有梗死灶。腎蒼白或土黃色， 皮質(zhì)有散在針尖大小出血點(diǎn)。腸道回盲口處有出血。膀胱黏膜出血。

圖1 腹股溝淋巴結(jié)

圖2 肺有出血點(diǎn)、塊狀淤血

圖3 脾臟腫大有出血點(diǎn)

3 病毒實(shí)驗(yàn)室診斷

以組織中提取的病毒DNA以及病毒RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，分別選用圓環(huán)病毒、豬藍(lán)耳病毒和豬瘟病毒的特異性引物進(jìn)行PCR鑒定。PCR結(jié)果經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳分析如圖4所示。

圖4 病毒擴(kuò)增結(jié)果

瓊脂糖凝膠電泳發(fā)現(xiàn)，在加樣孔 3的230 bp處看到清晰條帶，與豬藍(lán)耳病毒引物的目的片段大小相符；在加樣孔5的493 bp處看到清晰條帶，與圓環(huán)病毒引物的目的片段大小相符。

4 細(xì)菌學(xué)檢測(cè)

將病料中所分離的細(xì)菌進(jìn)行純培養(yǎng)，進(jìn)行革蘭氏染色、涂片、鏡檢。可見(jiàn)到革蘭氏染色陰性桿菌，中等大小，直桿菌（見(jiàn)圖5）。由于大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的形態(tài)及染色特征十分相似，所以為了區(qū)分這2種細(xì)菌，又分別接種于伊紅美藍(lán)和麥康凱培養(yǎng)基進(jìn)行鑒別培養(yǎng)，結(jié)果為麥康凱培養(yǎng)基長(zhǎng)出粉色，光滑，圓形菌落；在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基長(zhǎng)出紫黑色，金屬光澤菌落（見(jiàn)圖6，圖7）。

5 生化鑒定

圖5 革蘭氏染色兩端鈍圓桿狀菌（10x10）

圖6 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基菌落金屬光澤

結(jié)果見(jiàn)表1。

6 討論

通過(guò)嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室診斷和病理學(xué)診斷結(jié)合臨床癥狀確定該病例為豬繁殖與呼吸障礙綜合征和豬圓環(huán)病毒的混合感染。

通過(guò)對(duì)該豬場(chǎng)進(jìn)行了全面的檢查。發(fā)現(xiàn)該豬場(chǎng)這次暴發(fā)豬藍(lán)耳病并發(fā)圓環(huán)病毒，引起大量仔豬發(fā)病并不是偶然的，而是與該養(yǎng)豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理和環(huán)境因素密切相關(guān)。經(jīng)了解發(fā)現(xiàn)該場(chǎng)選購(gòu)的豬苗、引進(jìn)的種豬來(lái)自四面八方，而且只免疫了豬藍(lán)耳病、豬丹毒、豬肺疫疫苗并沒(méi)有免疫圓環(huán)病毒疫苗[5]。同時(shí)豬場(chǎng)養(yǎng)殖密度過(guò)大、舍間距不科學(xué)、消毒不規(guī)范，遇到應(yīng)激時(shí)易使?jié)撛诘囊卟”┌l(fā)[6]。

同時(shí)我們利用自己平時(shí)所學(xué)知識(shí)和參考相關(guān)的書(shū)籍，最后在老師的幫助下也給他們提供了防治措施。

1）全面消毒：對(duì)豬舍進(jìn)行一次全面的消毒，并堅(jiān)持每周對(duì)豬舍消毒2次。

2）緊急接種：對(duì)無(wú)明顯癥狀的豬，緊急免疫豬藍(lán)耳病疫苗[6]。

3）對(duì)癥治療：應(yīng)用抗菌藥物治療并發(fā)感染，如青霉素、鏈霉素、卡那霉素、氟苯尼考等，并對(duì)呼吸困難的豬只使用止咳平喘藥物，如麻黃堿、氨茶堿、腎上腺素等，對(duì)高熱豬只使用退燒藥物，如安痛定、氨基比林等[5]。

圖7 麥康凱培養(yǎng)基圓形菌落粉色、光滑

表1 培養(yǎng)基結(jié)果

4）輔助治療：本病使用抗生素治療無(wú)效，只能用其控制或治療并發(fā)感染，可配合使用豬白細(xì)胞干擾素、白細(xì)胞介導(dǎo)素、免疫球蛋白、高免血清等廣譜抗病毒的生物制劑進(jìn)行治療，并使用黃芪多糖、甘草合劑等[7]增強(qiáng)免疫力的藥物進(jìn)行輔助治療。

5）加強(qiáng)豬場(chǎng)管理：平時(shí)要注意對(duì)豬場(chǎng)的管理，定期對(duì)畜舍，用具等設(shè)施滅菌消毒，禁止與豬場(chǎng)不相關(guān)的人、交通工具等隨便出入，防止外來(lái)病毒傳染，注意對(duì)病死豬的處理，要及時(shí)消毒火化或掩埋，發(fā)現(xiàn)疫情及時(shí)上報(bào)并隔離宰殺，不讓疫情進(jìn)一步擴(kuò)散，對(duì)周邊的豬場(chǎng)及時(shí)進(jìn)行免疫接種，做好預(yù)防工作。

通過(guò)這次發(fā)病情況提醒廣大養(yǎng)殖戶(hù)朋友們，有條件的養(yǎng)殖戶(hù)應(yīng)實(shí)行自繁自養(yǎng)、全進(jìn)全出；選購(gòu)的豬苗應(yīng)來(lái)自清潔無(wú)病的豬場(chǎng)，仔豬發(fā)生豬藍(lán)耳病后，機(jī)體抵抗力降低，并可引起免疫抑制，易與其他病原混合感染。

7 結(jié)論

通過(guò)對(duì)該豬場(chǎng)的臨床診斷、病理解剖以及實(shí)驗(yàn)室診斷發(fā)現(xiàn)該豬場(chǎng)的豬群感染了豬繁殖與呼吸障礙綜合征、豬圓環(huán)病毒和大腸桿菌。

[1] 郎洪武，陳曉春，吳華偉，等．豬圓環(huán)病毒病及生物制品學(xué)的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2012，42 (5)：545-550．

[2] 宋長(zhǎng)緒，梁鵬帥． 豬圓環(huán)病毒?。≒CVD）研究進(jìn)展[J]．廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，37(9)：34-37．

[3] 錢(qián)峰．仔豬出血性大腸桿菌病的診斷與防治[J]．上海畜牧獸醫(yī)通訊，2009(4)：101．

[4] 武瑞．獸醫(yī)臨床診斷學(xué)[M]．北京：科學(xué)出版社， 2009．

[5] 陳溥言．獸醫(yī)傳染病學(xué)[M]．5版．北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2010．

[6] 張利平，張立華．控制豬繁殖與呼吸綜合征的措施[J]．畜牧與飼料科學(xué)，2008，29(5)：51．

[7] 陳盛強(qiáng)，胡朝輝，高俊，等．血清學(xué)與PCR檢測(cè)HLA-B27的比較[J]．廣東醫(yī)學(xué)，1999，20(9)：679-680．

2017-03-09）