俞寧 楊瓊 周大薇

摘要[目的]研究農(nóng)鳳雞新城疫和禽流感母源抗體的衰減規(guī)律，為農(nóng)鳳雞新城疫（ND）和禽流感（AI）的預(yù)防提供依據(jù)。[方法]通過血凝抑制（HI）試驗(yàn)對(duì)1～37日齡的農(nóng)鳳雞進(jìn)行新城疫和禽流感（H5和H9）母源抗體水平的檢測(cè)，研究農(nóng)鳳雛雞ND和AI母源抗體的衰減規(guī)律。[結(jié)果] AI H5母源抗體水平較低，AI H9和ND的母源抗體水平相對(duì)較高，但都在3～5日齡出現(xiàn)高峰，此后隨著日齡的增長(zhǎng)，抗體水平逐漸下降。[結(jié)論] 農(nóng)鳳雞AI H5的首免日齡推薦為5～8日齡，AI H9和ND的首免日齡推薦為7～12日齡。

關(guān)鍵詞 新城疫；禽流感；母源抗體；農(nóng)鳳雞

中圖分類號(hào) S858.31 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2017）02-0129-02

Abstract[Objective] To study the decay laws of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI） in Xinfeng Chicken and provide basis for the prevention of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI） in Xinfeng Chicken.[Method] The maternal antibody levels of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI H5 and H9）in 1-37 dayold Xinfeng Chichen were detected by using hemagglutination inhibition（HI） test to study the decay laws of newcastle disease（ND） and avian influenza（AI）maternal antibodies in Xinfeng Chicken.[Result] H5 maternal antibody level of AI was lower. The maternal antibody level of AI H9 and ND was relatively higher， and they reached the maximum values in 3-5 dayold Xinfeng Chichen， and they gradually decreased with the dayold.[Conclusion] The first immunization age of AI H5 in Xinfeng Chicken was 5-8 dayold， and the first immunization age of AI H9 and ND was 7-12 dayold.

Key words Newcastle disease（ND）； Avian influenza（AI）； Maternal antibody； Xinfeng Chicken

農(nóng)鳳雞是成都農(nóng)業(yè)科技職業(yè)學(xué)院以矮小型品系（即宮廷鳳凰雞，帶鳳頭）為母本，與正常型青脛麻羽公雞雜交，培育出帶鳳頭性狀的矮小型青脛麻羽雞，作為優(yōu)質(zhì)雞母系。該品系個(gè)體矮小、矮腳、短頸、鳳頭、青脛、青喙、白膚、黑麻羽、尾羽高翹及胸肌和腿肌較發(fā)達(dá)，肉質(zhì)佳，肉味極鮮，具有廣闊的發(fā)展前景。

雞新城疫（ND）和禽流感（AI）均是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)生產(chǎn)的重要疫病，其暴發(fā)將會(huì)給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，疫苗免疫被認(rèn)為是當(dāng)前預(yù)防和控制這2種疫病的主要手段。母源抗體與免疫程序的合理制訂直接相關(guān)，特別是確定不同疫苗的首免日齡時(shí)是重點(diǎn)考慮的因素[1-2]。為了更好地進(jìn)行ND和AI的防控，筆者通過對(duì)四川農(nóng)鳳雞新城疫、禽流感母源抗體水平及其衰減情況進(jìn)行檢測(cè)，旨在為該品種雞制訂科學(xué)合理的免疫程序提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 抗原和血清。禽流感H5（Re-6）血凝抑制（HI）抗原、陽性血清和陰性血清，禽流感H9（Re-2）HI抗原、陽性血清和陰性血清，新城疫HI抗原、陽性血清和陰性血清，均購自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.1.2 1%雞紅細(xì)胞懸液。采自成年健康公雞的枸櫞酸鈉抗凝血，用生理鹽水反復(fù)洗滌3次，配制成1%雞紅細(xì)胞懸液。

1.1.3 儀器與試劑。儀器有96孔V型反應(yīng)板、微量移液器、微型振蕩器、恒溫培養(yǎng)箱等；試劑有3.8%枸櫞酸鈉抗凝劑、生理鹽水等。

1.2 方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)。四川農(nóng)鳳雞父母代種雞按照常規(guī)免疫程序免疫，選取抗體水平較高的種雞群，取50份血清，用于父母代種雞免疫抗體檢測(cè)。1日齡健康農(nóng)鳳雛雞（自繁自養(yǎng)）90只分成6個(gè)小組，每小組15只雞，不進(jìn)行任何免疫，按照常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理和消毒。在1、3、5、8、11、15、19、23、30、37日齡分別采集各個(gè)小組雞的血樣，6個(gè)小組輪流采血。

1.2.2 血樣處理。將采集的血液0.8～1.0 mL放入1.5 mL離心管中，待血液充分凝集后，對(duì)血液進(jìn)行3 000 r/min離心3 min，分離的血清在-20 ℃下保存，每個(gè)日齡段采集的血清用自封袋裝好，做好標(biāo)記，最后統(tǒng)一對(duì)所有樣品同時(shí)測(cè)定其AI H5、 AI H9和ND的HI抗體滴度。

1.2.3 血清HI效價(jià)的檢測(cè)。采用血凝（HA）試驗(yàn)與血凝抑制（HI）試驗(yàn)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB /T 18936—2003）及《新城疫診斷技術(shù)》（GB/T 16550—2008）。

根據(jù)AI H5、AI H9和ND的抗原血凝價(jià)，用生理鹽水稀釋，配制成4單位病毒抗原液，通過HI試驗(yàn)測(cè)定血清樣品抗體效價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2.1 農(nóng)鳳雞父母代種雞的免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

通過血凝試驗(yàn)與血凝抑制試驗(yàn)進(jìn)行農(nóng)鳳雞父母代種雞的免疫抗體效價(jià)檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)新城疫抗體平均效價(jià)為9.98log2，禽流感H9（Re-2）抗體平均效價(jià)為10.05log2，禽流感H5（Re-6）抗體平均效價(jià)為8.12log2。

2.2 不同日齡農(nóng)鳳雛雞新城疫母源抗體

從圖1可以看出，農(nóng)鳳雛雞新城疫母源抗體水平在3日齡達(dá)到最高（7.87log2），此后隨著日齡的增長(zhǎng)，抗體水平逐漸下降，8日齡后抗體水平已降至臨界值（6.00log2）以下，37日齡抗體水平為0.40log2。

2.3 不同日齡農(nóng)鳳雛雞禽流感H9母源抗體

從圖2可以看出，農(nóng)鳳雛雞禽流感H9母源抗體水平在5日齡達(dá)到最高（9.13log2），此后隨著日齡的增長(zhǎng)，抗體水平逐漸下降，15日齡后抗體水平已下降到臨界值（6.00log2）以下，37日齡抗體水平為0.93log2。

2.4 不同日齡農(nóng)鳳雛雞禽流感H5母源抗體

從圖3可以看出，農(nóng)鳳雛雞禽流感H5母源抗體水平在3日齡較高（6.53log2），此后隨著日齡的增長(zhǎng)，抗體水平逐漸下降，5日齡后抗體水平已降至臨界值（6.00log2）以下，30日齡抗體水平基本消失。

3 討論與結(jié)論

預(yù)防接種是防控禽流感和新城疫兩大疫病的重要措施，因此確定符合四川農(nóng)鳳雞實(shí)際、科學(xué)的免疫程序十分重要。若首免時(shí)間過早，來自疫苗的抗原被高母源抗體中和，使免疫達(dá)不到理想效果；若首免時(shí)間過晚，母源抗體消退，雛雞在免疫前就可能會(huì)感染強(qiáng)毒，風(fēng)險(xiǎn)大大增加[3]。一般認(rèn)為，ND和AI的母源抗體滴度低于6.00log2時(shí)就應(yīng)當(dāng)進(jìn)行免疫。

該試驗(yàn)中農(nóng)鳳雛雞在出殼時(shí)通過父母代種雞獲得了母源抗體，足以抵抗禽流感H5（Re-6型）、H9亞型和新城疫病毒的侵襲[4-6]，并在3～5日齡母源抗體水平出現(xiàn)高峰值，均在6.001og2以上。H5（Re-6）亞型及ND均在3日齡達(dá)到高峰，H9則在5日齡達(dá)到高峰。

該試驗(yàn)結(jié)果表明，農(nóng)鳳雛雞AI H5（Re-6型）母源抗體水平不高，且在8日齡己降至6.00log2左右，因此認(rèn)為在該種母源抗體水平下農(nóng)鳳雛雞在5～8日齡進(jìn)行禽流感病毒（AIV） H5（Re-6）亞型疫苗首次免疫較為合理。此外，推薦農(nóng)鳳雛雞AI H9和ND的首免日齡為7～12日齡。條件較好的雞場(chǎng)，最好根據(jù)抗體效價(jià)的監(jiān)測(cè)情況來確定最佳的首免日齡。

為保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度與代表性，試驗(yàn)前對(duì)農(nóng)鳳種雞群的ND和AI抗體水平進(jìn)行了檢測(cè)，在此基礎(chǔ)上選取抗體水平較高的種雞群及其雛雞進(jìn)行試驗(yàn)。采用組內(nèi)循環(huán)法采血，避免因單一個(gè)體在短時(shí)間內(nèi)采血過多而對(duì)雛雞造成不良影響。此外，為了減少人為誤差，對(duì)同一樣品、同一時(shí)間采集的紅細(xì)胞及同一批抗原，由3人獨(dú)立進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)[3]。

該檢測(cè)結(jié)果為農(nóng)鳳雞免疫程序的制訂提供了技術(shù)支持，同時(shí)也可為矮小型品種雞在新城疫、禽流感的免疫防制中首免日齡的確定提供參考。

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