唐貞力云南省臨滄市人民醫(yī)院，云南 臨滄 677000

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排毒尪痹湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者T細(xì)胞亞群的影響

唐貞力
云南省臨滄市人民醫(yī)院，云南 臨滄 677000

目的:觀察排毒尪痹湯對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)患者外周血淋巴T 細(xì)胞亞群的影響，從細(xì)胞免疫方向探討本方藥的療效機(jī)制。方法:將200例門診及住院患者分為兩組。對照組給予吲哚美辛腸溶片和甲氨蝶呤片治療；治療組用排毒尪痹湯煎服。連續(xù)治療4周為1個(gè)療程。2個(gè)療程后，于治療前和治療月后分別檢測CD4+、CD8+， 計(jì)算CD4+/CD8+值。結(jié)果：治療前兩組CD4+、CD8+、 CD4+/CD8+值比較差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)。治療后, 兩組較治療前，CD4+均下降, CD8+均升高, CD4+/CD8+比值均降低；且兩組治療后各指標(biāo)組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。結(jié)論:RA 患者體內(nèi)存在著細(xì)胞免疫功能紊亂，排毒尪痹湯能調(diào)節(jié)T 細(xì)胞分布, 使機(jī)體趨向免疫穩(wěn)定狀態(tài)，具有類似MTX 聯(lián)合用藥的免疫抑制效應(yīng)。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎；排毒尪痹湯；T -淋巴細(xì)胞亞群

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(Rheumatoid Arthritis， RA)是一種病因復(fù)雜的自身免疫性疾病，目前其發(fā)病機(jī)制尚不十分清楚，臨床以多關(guān)節(jié)慢性炎癥為主要表現(xiàn)[1]。研究發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞免疫功能紊亂，細(xì)胞異?；罨图?xì)胞亞群的平衡失控密切相關(guān)是其主要發(fā)病機(jī)制之一，且這種調(diào)節(jié)細(xì)胞主要存在于CD4+、CD8+淋巴細(xì)胞亞群中[2]。筆者結(jié)合當(dāng)?shù)厣贁?shù)民族的佤醫(yī)佤藥獨(dú)特的治療特色, 并通過10余年的臨床使用心得，篩選優(yōu)化組方配伍,自擬排毒尪痹湯并運(yùn)用該方治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎, 取得較好療效。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 將2013年3月至2015年9月臨滄市人民醫(yī)院中醫(yī)科門診及住院符合條件的RA患者200例，按照隨機(jī)數(shù)字表方法，分為兩組各100例，其中對照組男性43例，女性57例，年齡25～65歲，平均(52.7±10.1)歲，病程1.3～13.6年，平均(78.5±45.0)個(gè)月；治療組男性40例，女性60例，年齡23～68歲，平均(54.3±10.6)歲，病程1.8～10.3年，平均(75.3±44.6)個(gè)月。兩組在性別、年齡、病程、關(guān)節(jié)功能比較等方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) ①年齡在15～70周歲之間。②均為活動性RA患者，符合美國風(fēng)濕病協(xié)會類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎1987年修訂標(biāo)準(zhǔn)[3]?；顒有訰A 診斷標(biāo)準(zhǔn)為[3](需具備以下5 項(xiàng)中4 項(xiàng)):晨僵≥1h；休息時(shí)有中等程度疼痛；關(guān)節(jié)腫脹≥3個(gè)；關(guān)節(jié)壓痛≥5 個(gè)；ESR≥30mm/h③中醫(yī)辨證屬于“風(fēng)寒濕型” 標(biāo)準(zhǔn)。④受試者知情，自愿簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) ①伴有可能影響效應(yīng)指標(biāo)觀測、判斷的其他生理或病理狀況。②合并其他免疫系統(tǒng)疾病。③除規(guī)定用藥外，長期服用治療本病的西藥或其他藥物近3周未停服者。④特征人群孕婦、哺乳期、精神病、病情危篤或疾病晚期。⑤嚴(yán)重心、肝、`腎損害影響藥物代謝。

1.4 退出標(biāo)準(zhǔn) ①違反試驗(yàn)方案。②發(fā)生嚴(yán)重不良事件、并發(fā)癥，難以繼續(xù)治療。③資料不全無法判定療效、安全性。④不符合納人條件, 納入錯(cuò)誤或未按規(guī)定服藥無法判定療效。

1.5 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.5.1 西醫(yī)診斷 參照美國風(fēng)濕病學(xué)會(ARA)1987年對RA活動期的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]

1.5.2 中醫(yī)診斷 參照衛(wèi)生部2002年《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》標(biāo)準(zhǔn)[4]。

1.6 治療方法 4周為1個(gè)療程，連續(xù)2個(gè)療程。

1.6.1 對照組 吲哚美辛腸溶片(山西云鵬藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字H14020771)25mg，1次/d；甲氨蝶呤片(上海信誼藥廠有限公司，國藥準(zhǔn)字H31020644)7.5mg，每周1次。

1.6.2 治療組 排毒尪痹湯, 200mL，2次/d。處方組成: 娘母良10g，火把花根(先煎)10g，小銅錘5g,秦艽15g,威靈仙20g,黃芪50g,桂枝15g,白術(shù)20g,茯苓20g,淫羊藿25g,枸杞子25g，川斷30g,牛膝15g,紅花10g,雞血藤30g,甘草6g。將火把花根用開水先煎2h,再放入其他藥物煎1h,取汁200mL,煎煮2次,共400mL,早、晚2次飯后分服。以上藥物均來源臨滄市人民醫(yī)院，并由中醫(yī)科統(tǒng)一煎制。

1.7 實(shí)驗(yàn)材料 人外周血T—淋巴細(xì)胞亞群檢測采用免疫組化S-P(鏈菌素親生物素-過氧化酶連接法,Biotin-Streptanidin-Peroxidase)。其鼠抗人CD4，CD8 單抗及生物素-兔抗鼠IgG， 鏈霉親和素-HRP 等試劑均購自北京宜安泰醫(yī)療技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.8 實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組化S.P 法(鏈菌素親生物素-過氧化酶連接法,Biotin -Streptanidin -Peroxidase)[5]。具體步驟如下 ①標(biāo)本制備:抽取受試者靜脈血3～4mL, 加入肝素25U·mL-1, 經(jīng)離心后分離淋巴細(xì)胞, PBS洗滌3 次,使每微升細(xì)胞數(shù)約2000 個(gè), 涂片, 干燥。(2)標(biāo)本染色:分別加抗T 細(xì)胞亞群單克隆抗體10 μL，置濕盒中, 30 min， 37 ℃， PBS -Tween20 淋洗4 次, 擦干。加(生物素-兔抗鼠IgG)10 μl， PBS洗滌同上。加鏈霉親和素-HRP10 μL， PBS洗滌。在1mL 蒸餾水中加入底物1、 2、3 各1 滴約50 μL混勻備用。擦干涂片圈外水份, 加1 滴底物混合液約30 ～ 50 μL， 37 ℃，5 ～ 15 min， 顯微鏡下觀察,待細(xì)胞膜被明顯染成紅色, 用蒸餾水中止顯色,加復(fù)染液1 滴，作用約1～3min后PBS 沖洗。③計(jì)數(shù):高倍顯微鏡下計(jì)算每200個(gè)單核細(xì)胞中陽性染色細(xì)胞所占的百分比。

2 結(jié)果

2組患者治療后與治療前比較, 細(xì)胞均下降(P<0.05), 細(xì)胞明顯升高(P<0 .01)，此外，兩組治療后較治療前明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0 .05)。但兩組治療后CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表1。

組別組別例數(shù)CD4+CD8+CD4+/CD8+治療組治療前10048.30±5.3217.42±3.852.81±0.25治療后10042.25±3.47*24.40±3.61**1.73±0.12**對照組治療前10047.82±4.9916.73±2.862.86±0.22治療后10043.78±2.08*25.41±3.10**1.72±0.15**

注：與本組治療前比較，*P<0.05,**P<0.05。

3 討論

RA 是一種系統(tǒng)性、復(fù)雜的、慢性、炎性的自身免疫性疾病，抗原多肽通過抗原提呈細(xì)胞激活T細(xì)胞是其特征性病理變化，T細(xì)胞激活后產(chǎn)生細(xì)胞因子，并聚集其他炎癥細(xì)胞(包括其他T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，產(chǎn)生更多細(xì)胞因子，大量巨噬細(xì)胞被激活并且釋放了白細(xì)胞介素-1(IL-1)和腫瘤壞死因子(TNF)，致使軟骨細(xì)胞和滑膜細(xì)胞釋出細(xì)胞毒素，造成關(guān)節(jié)及其周圍正常細(xì)胞和組織傷害，滑膜增生，骨和軟骨受損[6]。RA主要發(fā)病機(jī)制是T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)異常，成熟的T細(xì)胞按其免疫效應(yīng)功能，可分為CD4輔助性T細(xì)胞(CD4 T細(xì)胞)，CD8殺傷性T細(xì)胞(CD8 CTL細(xì)胞)和 CD4-CD25調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tr細(xì)胞)[7]。研究表明，與正常人比較，RA 患者外周血中CD3+、CD4+淋巴細(xì)胞明顯降低， CD4+/CD8+比值降低[8]。

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎臨床特征與“歷節(jié)病”較為相似，歸屬中醫(yī)“痹證”范疇。中醫(yī)對類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病因病機(jī)的認(rèn)識，經(jīng)過長期臨床實(shí)踐和理論探討，目前比較傾向于外邪、正虛、瘀血3個(gè)方面[9]。認(rèn)為該病是風(fēng)、濕、寒、熱等閉阻經(jīng)絡(luò), 氣血運(yùn)行不暢, 經(jīng)脈失養(yǎng)，肢體關(guān)節(jié)、肌肉、筋骨等處，從而發(fā)生疼痛、重著、酸楚, 麻木、 甚至關(guān)節(jié)變形、腫大、僵硬、屈伸不利。筆者采用排毒尪痹湯, 全方祛風(fēng)散寒、利濕通絡(luò)、解毒消腫、活血化瘀、補(bǔ)腎益氣、扶正固本。方中君藥火把花根有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)、清熱解毒等功效, 有效成分為生物堿、萜類、內(nèi)酯、酚酸類等，具有明顯抑制病理性免疫反應(yīng)和抗炎鎮(zhèn)痛作用[10]。小銅錘又稱“小麻藥”，《云南中草藥選》載：“止痛，活血化瘀。主治骨折，跌打損傷，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛，閉經(jīng)，胃寒痛”。娘母良被佤族稱作“娘三端”，學(xué)名為塊根木蘭，其味辛甘苦，歸心、肺、腎、肝諸經(jīng)。具有補(bǔ)腎助陽、養(yǎng)心安神、祛痰解痙的功效。秦艽、威靈仙祛風(fēng)濕、舒經(jīng)絡(luò),止痹痛。再以黃芪、桂枝、白術(shù)、茯苓補(bǔ)氣通陽，健脾祛濕，據(jù)現(xiàn)代藥理研究, 黃芪對免疫功能異常有雙向調(diào)節(jié)作用；再以枸杞滋補(bǔ)肝腎；淫羊藿補(bǔ)腎壯陽、祛風(fēng)除濕, 川斷補(bǔ)肝腎、續(xù)筋骨、行血脈；紅花、牛膝、雞血藤活血祛瘀、補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨； 甘草補(bǔ)脾益氣、緩急止痛、緩和藥性。全方共奏祛風(fēng)散寒、利濕活血、補(bǔ)虛之功。前期研究表明，該方治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎安全有效[10]。

本實(shí)驗(yàn)檢測了排毒尪痹湯 對RA 病人T 細(xì)胞亞群的影響, 發(fā)現(xiàn)經(jīng)排毒尪痹湯治療后, CD4+細(xì)胞較治前明顯減少,CD8+細(xì)胞較治前明顯增多,CD4+/CD8+值明顯下降。結(jié)果表明排毒尪痹湯對RA 患者T 細(xì)胞亞群比例紊亂有調(diào)節(jié)作用，推測對T細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)為排毒尪痹湯抗類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的機(jī)制之一。

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唐貞力(1964-)，男，漢族，碩士研究生，主任醫(yī)師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)診治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病的研究。E-mail:13988329977@163.com

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2017-04-10 編輯：梁志慶)