袁小淋 余曉玲 魏丹霞* 李月亭.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 6500；.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 65000

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清熱潤燥口服液的定性鑒別研究

袁小淋1余曉玲1魏丹霞1*李月亭2
1.昆明市中醫(yī)醫(yī)院，云南 昆明 650011；2.云南中醫(yī)學(xué)院，云南 昆明 650200

目的：建立清熱潤燥口服液的定性鑒別方法。方法：采用薄層色譜法對處方桑葉、陳皮、浙貝母、麥冬、茯苓進(jìn)行定性鑒別。結(jié)果：薄層鑒別色譜斑點(diǎn)清晰、專屬性強(qiáng)，陰性對照無干擾。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作簡便，可用于清熱潤燥口服液的定性鑒別。

清熱潤燥口服液；薄層鑒別；桑葉；陳皮；浙貝母；麥冬；茯苓

清熱潤燥口服液是昆明市中醫(yī)醫(yī)院依據(jù)云南省榮譽(yù)名中醫(yī)陸家龍主任醫(yī)師多年臨床經(jīng)驗(yàn)研制而成，處方由桑葉、蘆根、陳皮、苦杏仁、麥冬、沙參、茯苓等13味中藥組成，具有較好的清熱養(yǎng)陰、潤燥止咳的作用，臨床療效較好[1]。為更好地控制該制劑質(zhì)量，筆者采用薄層色譜法，建立了清熱潤燥口服液中的桑葉、陳皮、浙貝母、麥冬、茯苓的薄層鑒別方法，為清熱潤燥口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善充實(shí)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 超聲波清洗儀(200W，40kHz)昆山市超聲儀器有限公司)；FB124自動內(nèi)校電子分析天平 (上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司)；雙槽展開缸(20cm×10cm)。

1.2 材料 硅膠G高效板、硅膠GF254高效板(青島海洋化工廠)；清熱潤燥口服(批號150616,150713,150716，昆明市中醫(yī)醫(yī)院)藥材購于云南白藥集團(tuán)股份有限公司中藥飲片分公司；橙皮苷(批號：111538-200403)、浙貝母(批號：120972-201405)、陳皮(批號：120969-200808)、桑葉(批號：121123-200904)、茯苓(批號：121117-201308)、麥冬對照藥材(批號：121013-201310)、貝母素甲(批號：110750-200608)、貝母素乙(批號：110751-200608)等對照品及對照藥材均購自中國藥品生物制品檢定所，所有試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 桑葉[2]定性鑒別 取本品30mL，加石油醚30mL，加熱回流30min，棄去石油醚液，藥渣揮干，殘渣加乙醇30mL，超聲30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10mL，置于60℃水浴鍋上攪拌使溶解，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL作為供試品溶液。再取桑葉對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。取缺桑葉藥材陰性樣品溶液按供試品溶液方法制成陰性樣品溶液；按照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取對照藥材溶液5μL、供試品溶液陰性樣品溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)上層液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，缺桑葉的陰性樣品溶液無相應(yīng)斑點(diǎn)。色譜圖見圖1。

2.2 陳皮[3]定性鑒別 本品20mL，用乙醚振搖提取2次，每次20mL，棄去乙醚液，水液用乙酸乙酯振搖提取2次，每次30mL，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。再取陳皮對照藥材2g，加水70mL，煮沸15min，過濾，濾液加乙酸乙酯50mL振搖提取，合并乙酸乙酯液，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為對照藥材溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成每1mL含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。取缺陳皮藥材陰性樣品溶液按供試品溶液方法制成陰性樣品溶液；照《薄層色譜法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100:17:13)為展開劑，置于展開缸內(nèi)預(yù)飽和20min，展開至5cm處，取出，晾干，再以苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20:10:1:1)的上層溶液為展開劑，展開至約8cm處。取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，晾干后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材、對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對照液無此斑點(diǎn)。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖2。

2.3 浙貝母[4]定性鑒別 取本品30mL，用10%NaOH調(diào)節(jié)pH至12以上，用氯仿50mL分2次振搖提取，合并氯仿提取液，蒸干，殘渣加無水乙醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取浙貝母甲素、浙貝母乙素對照品，加甲醇制成每1mL含1mg溶液，作為對照品溶液。另取浙貝母對照藥材2g，加氨水2mL使?jié)櫇?，加氯?0mL，超聲15min，過濾，濾液蒸干，殘渣加氯仿1mL使溶解，作為對照藥材溶液。取缺浙貝母藥材陰性樣品溶液按供試品溶液方法制成陰性樣品溶液；照《薄層色譜法檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作程序》(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述4種溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-濃氨(8.5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品、對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的淡紅色斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖3。

2.4 麥冬[5]定性鑒別 取本品30mL，加三氯甲烷-甲醇(7∶3)混合溶液20mL，靜置3h，超聲30min，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷1mL使溶解，作為供試品溶液。另取麥冬對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。取缺麥冬藥材陰性樣品溶液按供試品溶液方法制成陰性樣品溶液；照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以甲醇-甲苯-冰乙酸(5∶80∶1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的紫色斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖4。

2.5 茯苓[6]定性鑒別 取本品20mL，加乙醚振搖提取3次，每次20mL，合并乙醚提取液，蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為供試品溶液。取茯苓對照藥材2g，加乙醚50mL，超聲10min，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1mL，作為對照藥材溶液。另取缺茯苓藥材陰性樣品溶液按供試品溶液方法制成陰性樣品溶液；照薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以2%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，陰性樣品無此斑點(diǎn)。色譜圖見圖5。

2.6 不同溫度、濕度下薄層鑒別系統(tǒng)考察 照中國藥典薄層色譜法(附錄ⅥB)試驗(yàn)，按上述2.1～2.5項(xiàng)下方法，分別在不同溫度和濕度條件下對三批清熱潤燥口服液中的桑葉、陳皮、浙貝母、麥冬、茯苓進(jìn)行鑒別，結(jié)果顯示上述鑒別方法中陳皮鑒別方法在溫度較低時分離較差，其余方法專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表1。

表1 不同溫度、濕度條件下薄層鑒別系統(tǒng)考察

續(xù)表

表1 不同溫度、濕度條件下薄層鑒別系統(tǒng)考察

3 討論

清熱潤燥口服液由13味藥組成，成分復(fù)雜，定性鑒別時相互之間存在一定干擾。為能準(zhǔn)確鑒別處方藥材，本文采用了對照藥材鑒別，部分藥味增加了成分鑒別，如陳皮、浙貝母。陳皮的薄層鑒別方法有多種，如以橙皮苷為對照品，采用羧甲基纖維素鈉為黏合劑的0. 5%氫氧化鈉的硅膠G薄層板進(jìn)行鑒別[7]，或是采用對照藥材，采用聚酰胺薄膜，以丙酮-水(1：1)為展開劑進(jìn)行鑒別[8]。同時以橙皮苷和陳皮對照藥材為參考，進(jìn)行了鑒別方法考察，所得方法適用于以橙皮苷和陳皮對照藥材任意一種為對照品進(jìn)行鑒別。另外，在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)麥冬和茯苓采用藥典方法鑒別時，供試品的斑點(diǎn)不夠清晰，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了進(jìn)一步改進(jìn)，以香草醛硫酸溶液顯色，斑點(diǎn)更清晰。浙貝母采用藥典方法時，斑點(diǎn)有拖尾，本實(shí)驗(yàn)對展開劑進(jìn)行改進(jìn)，去除了甲醇，效果良好。桑葉的鑒別采用了藥典方法，供試品斑點(diǎn)清晰，陰性未見干擾。

綜上，該方法專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好、操作簡便，為清熱潤燥口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供了良好的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Study on Qualitative Identification of Qingrerunzao Oral Liquid

YUAN Xiaolin1YU Xiaoling1WEI Danxia1*LI Yueting2

1.Kunming Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650011,China; 2.Yunnan College of Traditional Chinese Medicine,Kunming 650200,China

Objective To establish qualitative identification method of Qingrerunzao oral liquid. Methods TLC were used for identification of folium mori,pericarpium citri reticulatae,bulbus fritiuariae thunbergii,radix ophiopagonis and poria.Results TLC had the diagnostic characteristic for the distinct spot which illustrated the specificity, the negative control had no a interference. Conclusion This method is specific, stable and easy to operate, could be applied to qualitatively identify Qingrerunzao oral liquid.

Qingre Runzao Oral Liquid; TLC; Folium Mori; Pericarpium Citri Reticulatae; Thunberg Fritillary Bulb; Radix Ophiopogonis; Poria

云南省財政廳、云南省衛(wèi)生廳資助項(xiàng)目(云衛(wèi)發(fā) [2009]1134 號)

袁小淋(1985-)，女，碩士研究生，藥師，研究方向?yàn)獒t(yī)院制劑開發(fā)與應(yīng)用。E-mail:178739725@@qq.com

魏丹霞(1970-)，女，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)臨床研究。E-mail:1216508769@qq.com

R284.1

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1007-8517(2017)12-0018-04

2017-04-11 編輯：梁志慶)