葉綠萍，賓 彬，龔敏陽，唐春麗，馬儒清（廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，南寧 530023）

普樂士泰膠囊的質量標準研究Δ

葉綠萍＊，賓 彬，龔敏陽，唐春麗，馬儒清（廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院，南寧 530023）

目的：建立普樂士泰膠囊的質量標準。方法：采用薄層色譜法（TLC）對制劑中太子參、石菖蒲、大血藤、茜草、王不留行進行定性鑒別；采用高效液相色譜法測定制劑中益母草堿的含量：色譜柱為AgilentEclipse XDB-C18，流動相為甲醇-0.025mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調pH至2.5）（24∶76，V/V），流速為1.0m L/min，檢測波長為277 nm，柱溫為30℃，進樣量為10μL。結果：太子參、石菖蒲、大血藤、茜草、王不留行的TLC圖斑點清晰，分離度好，陰性對照無干擾。鹽酸益母草堿檢測質量濃度線性范圍為4.05～81.00μg/m L（r＝0.999 9）；精密度、穩(wěn)定性、重復性試驗的RSD＜2.0%；加樣回收率為98.47%～103.83%（RSD＝2.04%，n＝9）。結論：該研究所建標準可用于普樂士泰膠囊的質量控制。

普樂士泰膠囊；質量標準；薄層色譜法；益母草堿；高效液相色譜法

普樂士泰膠囊是由廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院賓彬教授根據臨床經驗方研制而成。其處方以益母草為君藥，川牛膝、薏苡仁、苦杏仁為臣藥，太子參、石菖蒲、白蔻仁、大血藤、敗醬草等多味中藥相佐使，具有活血化瘀、清熱通淋、化濕導濁、行氣止痛的功效，多年來在臨床上用于治療慢性前列腺炎具有明顯的療效[1-2]，為醫(yī)院制劑。筆者經反復試驗及參閱文獻，采用薄層色譜法（TLC）對普樂士泰膠囊中太子參、石菖蒲、大血藤、茜草、王不留行進行定性鑒別，并采用高效液相色譜法（HPLC）對制劑中益母草堿含量進行測定[3]，以有效控制該制劑的質量。

1 材料

1.1 儀器

1200型HPLC儀，包括二極管陣列檢測儀（美國Agilent公司）；GR-202型電子分析天平（日本AND公司）；Simplicity TM型超純水系統(tǒng)（美國M illipore公司）；KQ-100DV型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：250W，頻率：40 kHz）。

1.2 藥品與試劑

普樂士泰膠囊（廣西中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院制劑室 自 制 ，批 號 ：20140107、20140116、20140117、20140121、20140123，規(guī)格：0.38 g/粒）；鹽酸益母草堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：111823-201202，純度：94.7%）；太子參、石菖蒲、大血藤、茜草、王不留行對照藥材（廣西萬寶堂藥業(yè)有限公司，批號分別為121014-201408、121098-201406、121353-201401、121049-201404、121094-201405）；硅膠G薄層板（青島海洋化工有限公司）；甲醇為色譜純，乙醇、磷酸、磷酸二氫鉀均為分析純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

2.1.1 太子參 取10粒樣品內容物，加甲醇10m L，超聲溫浸（42℃）提取30m in，濾過并濃縮至1m L，作為供試品溶液。另取太子參對照藥材粉末（過2號篩）1 g，同供試品溶液制備方法制備對照藥材溶液。按普樂士泰膠囊處方和工藝制備缺太子參的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][4]試驗，吸取上述3種溶液各4 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4∶1∶1，V/V/V）為展開劑，預飽和15m in，展開，取出，晾干，噴以0.2%茚三酮試液，置于恒溫箱中，以105℃加熱至斑點顯色清晰，置日光燈下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1A。

2.1.2 石菖蒲 取8粒樣品內容物，置于圓底燒瓶中，加入石油醚（60～90℃）30m L，水浴加熱回流1 h，濾過，濾液水浴蒸干，加石油醚（60～90℃）1m L溶解藥渣，作為供試品溶液。另取石菖蒲對照藥材粉末（過2號篩）0.2 g，同供試品溶液制備方法制備對照藥材溶液。按普樂士泰膠囊處方和工藝制備缺石菖蒲的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][4]試驗，吸取上述3種溶液各3μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-石油醚（60～90℃）（1∶4，V/V）為展開劑，預飽和15min，展開，取出，晾干，常溫下放置1 h，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，置日光燈下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1B。

圖1 薄層色譜圖Fig 1 TLC chromatograms

2.1.3 大血藤 取20粒樣品內容物，加甲醇25m L，超聲溫浸（42℃）提取30min，濾過，濾液水浴蒸干，加2%氫氧化鈉溶液5m L溶解藥渣，以鹽酸調pH至2.0，再加乙醚5m L充分振搖提取，用分液漏斗分離，共3次，合并乙醚液，揮干，加甲醇1 m L溶解藥渣，作為供試品溶液。另取大血藤對照藥材粉末（過2號篩）2.5 g，同供試品溶液制備方法制備對照藥材溶液。按普樂士泰膠囊處方和工藝制備缺大血藤的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][4]試驗，吸取上述3種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲酸-丙酮（8∶1∶1，V/V/V）為展開劑，預飽和15m in，展開，取出，晾干，噴以2%三氯化鐵乙醇溶液，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1C。

2.1.4 茜草 取10粒樣品內容物，加甲醇15m L，超聲溫浸（42℃）提取30m in，濾過，濾液水浴蒸干，加甲醇1 m L溶解藥渣，作為供試品溶液。另取茜草對照藥材粉末（過2號篩）2.5 g，同供試品溶液制備方法制備對照藥材溶液。按普樂士泰膠囊處方和工藝制備缺茜草的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][4]試驗，吸取上述3種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-丙酮（4∶1，V/V）為展開劑，預飽和15m in，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1D。

2.1.5 王不留行 取12粒樣品內容物，加甲醇25m L，水浴回流提取30m in，放冷，濾過，濾液水浴蒸干，加1 m L甲醇溶解藥渣，作為供試品溶液。另取王不留行對照藥材粉末（過2號篩）2.5 g，同供試品溶液制備方法制備對照藥材溶液。按普樂士泰膠囊處方和工藝制備缺王不留行的陰性樣品，并按供試品溶液制備方法制成陰性對照溶液。按TLC法[2015年版《中國藥典》（四部）][4]試驗，吸取上述3種溶液各4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（15∶7∶2，V/V/V）充分振搖靜置的下層液為展開劑，預飽和15m in，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，置日光燈下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾，詳見圖1E。

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇-0.025mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調pH至2.5）（24∶76，V/V）；流速：1.0m L/min；檢測波長：277 nm；柱溫：30℃；進樣量：10μL[5-6]。在上述色譜條件下，理論板數以益母草堿（以鹽酸益母草堿計）峰計不少于5 000；各成分基線分離良好，分離度＞1.5，詳見圖2。

2.2.2 對照品溶液的制備 取對照品適量，精密稱定，加流動相制成鹽酸益母草堿質量濃度為81.00μg/m L的對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 取10粒樣品內容物，研勻，取約2粒的量，精密稱定，精密加50%乙醇溶液25m L，稱定質量，超聲溫浸（42℃）處理60m in，放冷，加50%乙醇溶液補足減失的質量，濾過，精密量取續(xù)濾液10m L，水浴蒸干，殘渣加流動相溶解，移至10m L量瓶中，加流動相定容，經0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按普樂士泰膠囊處方和工藝制備缺益母草的陰性樣品，并按“2.2.3”項下方法制成陰性對照溶液。

圖2 高效液相色譜圖Fig 2 HPLC chromatograms

2.2.5 線性關系考察 精密量取“2.2.2”項下對照品溶液各適量，分別置于20m L量瓶中，加流動相定容，制成鹽酸益母草堿質量濃度分別為4.05、8.10、16.20、40.50、60.75、81.00μg/m L的系列對照品溶液。精密量取上述系列對照品溶液各10μL，按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以鹽酸益母草堿質量濃度（x，μg/m L）為橫坐標、峰面積（y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程y＝0.055x+0.137（r＝0.999 9）。結果表明，鹽酸益母草堿檢測質量濃度線性范圍為4.05～81.00 μg/m L。

2.2.6 精密度試驗 取“2.2.2”項下對照品溶液適量，按“2.2.1”項下色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結果，鹽酸益母草堿峰面積的RSD＝1.10%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗 取“2.2.3”項下供試品溶液（批號：20140107）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結果，鹽酸益母草堿峰面積的RSD＝0.93%（n＝6），表明供試品溶液室溫下放置24 h內基本穩(wěn)定。

2.2.8 重復性試驗 精密稱取同一批樣品（批號：20140107）適量，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，共6份，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算含量。結果，鹽酸益母草堿平均含量為0.087 1mg/m L，RSD＝1.27%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.2.9 加樣回收率試驗 取已知含量樣品（批號：20140107）適量，共9份，分別加入低、中、高質量的鹽酸益母草堿對照品各適量，按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算加樣回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝9）Tab 1 Resultsof recovery tests（n＝9）

2.2.10 樣品含量測定 取6批樣品各適量，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄峰面積并計算樣品含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝6，m g/粒）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝6，mg/capsule）

3 討論

3.1 TLC條件

TLC法是利用吸附劑對樣品中各成分吸附能力不同，及展開劑對其解吸附能力的不同，使各成分達到分離目的[7]。普樂士泰膠囊中含有多味藥材，成分復雜，影響各成分分離干擾因素眾多。根據不同藥味及其化學成分的物理特性[8]，筆者對樣品的前處理方法及展開劑的組方配比進行了反復研究，并采用自制硅膠G板和商品板反復考察了其重復性，最終確定了本研究中各藥味的TLC鑒別方法，其能達到較好的定性鑒別效果。

3.2 定量指標成分的選擇

普樂士泰膠囊中益母草為君藥，除具有活血化瘀、調經利水的功效外，還有異于傳統(tǒng)適應證的溶栓、抗凝、降脂、擴張冠脈、降血黏度、改善微循環(huán)、抗炎鎮(zhèn)痛、利尿和增強小腸平滑肌收縮等諸多作用[9]。這些藥理作用與其所含生物堿密切相關，代表性的活性成分如鹽酸水蘇堿（Stachydrine）和益母草堿（Leonurine）。2015年版《中國藥典》（一部）[8]將此兩成分同時作為益母草的含量測定指標成分，分別制定了相應的HPLC測定方法，并規(guī)定了最低含量標準。益母草堿是存在于益母草中的特異生物堿，與其他生物堿相比更具專屬性[10]。但不同品種和采收季節(jié)的益母草中益母草堿含量相當不均衡，故選擇益母草堿作為普樂士泰膠囊的質控指標更有意義。

3.3 流動相的選擇

選擇流動相時曾經用不同配比的甲醇-水和不同的流速來考察，結果色譜峰有拖尾現象，且待測成分的理論板數低，后改用甲醇-磷酸二氫鉀溶液（24∶76，V/V），但是待測成分色譜峰卻出現了雙峰現象，結果不理想。故筆者通過采用調節(jié)流動相pH的方法來改良峰形并提高色譜峰的理論板數。經過反復摸索流動相的組成比例后，發(fā)現以甲醇-0.025mol/L磷酸二氫鉀溶液（用磷酸調pH至2.5）（24∶76，V/V）時，出峰最佳，可基線分離，達到了樣品含量測定的基本要求[11]。

3.4 檢測波長的選擇

[11]，取鹽酸益母草堿對照品適量，用本試驗的流動相為溶劑制備對照品溶液，以流動相為空白在200～400 nm紫外區(qū)域內掃描，結果顯示，鹽酸益母草堿在277 nm波長處出現最大吸收。

綜上所述，本研究所建標準可用于普樂士泰膠囊的質量控制。

參考文獻

[1] 賓彬，潘章宇.普樂士泰膠囊治療慢性非細菌性前列腺炎30例[J].河南中醫(yī)，2006，26（8）：42-43.

[2] 陳香玲，陳紅軍.高效液相色譜法同時測定八珍益母膠囊中10種活性成分含量[J].中南藥學，2016，14（3）：306-309.

[3] 袁承軍，浩宇，俞瑜，等.高效液相色譜法測定益母草堿大鼠血漿濃度及其藥動學研究[J].中國藥業(yè)，2015，24（20）：34-35.

[4] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：57.

[5] 瞿京紅，劉菁，吳進，等.高效液相色譜法測定益母草軟膠囊中益母草堿的含量[J].中國醫(yī)藥導刊，2011，13（9）：1631-1632.

[6] 李超.改進HPLC法測定吲哚美辛腸溶片中的有關物質[J].中國藥房，2016，27（27）：3861-3864.

[7] 高峰.TLC法和HPLC法分析黃柏配方顆粒中是否混有關黃柏[J].黑龍江醫(yī)藥，2016，29（1）：9-11.

[8] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：290-291.

[9] 賀春暉，趙懿清，李霞，等.益母草堿藥理作用的分子機制研究進展[J].中國臨床藥理學與治療學，2013，18（12）：1419-1422.

[10] 張文婷，黃偉，王偉勝，等.不同采收期童子益母草中生物堿含量比較[J].醫(yī)藥導報，2013，32（2）：218-220.

[11] 江帆，聶晶，余建清，等.高效液相法測定益母草中益母草堿含量研究[J].分析科學學報，2008，24（3）：347-349.

Study on Quality Standard of ProstatitisCapsules

YE Lüping，BIN Bin，GONG M inyang，TANG Chunli，MA Ruqing（The First Affiliated Hospital of Guangxi University of TCM，Nanning 530023，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standard for Prostatitis capsules.METHODS：TLC method was performed to qualitatively identify Pseudostellaria heterophylla，Acortw tatarinowii，Sargentodoxa cuneata，Rubia cordifolia and Vaccaria segetalis in the preparation.HPLC method was adopted to determine the content of leonurine in the preparation.The determ ination was performed on Agilent Eclipse XDB-C18column w ith mobile phase consisted of methanol-0.025 mol/L potassium dihydrogen phosphate（pH adjusted to 2.5）（24∶76，V/V）w ith phosphoric acidat the flow rate of 1.0 m L/min.The detection wavelength was set at 277 nm，and column temperature was 30℃.The sample size was 10μL.RESULTS：The TLC spots of P.heterophylla，A.tatarinowii，S.cuneate，R.cordifolia，and V.segetalis were clear and well-separated w ithout interference from negative control.The linear range of leonurine were 4.05-81.00μg/m L（r＝0.999 9）.RSDs of precision，stability and reproducibility tests were all lower than 2.0%.The recovery was 98.47%-103.83%（RSD＝2.04%，n＝9）.CONCLUSIONS：Established standard can be used for quality control of Prostatitis capsules.

Prostatitis capsules；Quality standard；TLC；Leonurine；HPLC

R927

A

1001-0408（2017）15-2104-04

2016-11-01

2017-03-06）

（編輯：張 靜）

廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳中醫(yī)藥科技專項課題（No. GZYZ1105）

＊副主任藥師。研究方向：臨床藥學、藥劑學。電話：0771-5840015。E-mail：164589433@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2017.15.25