駱 飛，孫 昭，韓 欽，薛春玲，白春梅

1中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，北京 1000522中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所組織工程中心，北京 100005

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·論 著·

肝癌HepG2細(xì)胞分泌的Exosome對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞分化的影響及其相互作用機(jī)制

駱 飛1，孫 昭1，韓 欽2，薛春玲2，白春梅1

1中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，北京 1000522中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所組織工程中心，北京 100005

目的 評(píng)估肝癌HepG2細(xì)胞分泌的Exosome對(duì)間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)分化為腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(CAF)的影響及其相互作用機(jī)制。方法 在人脂肪MSC培養(yǎng)體系中加入HepG2細(xì)胞分泌的Exosome進(jìn)行培養(yǎng)，采用Western blot法檢測(cè)CAF特征性蛋白的表達(dá)情況。將已鑒定為CAF樣條件培養(yǎng)基(CAF-CM)和牛血清白蛋白對(duì)照組分別加至HepG2培養(yǎng)基中，采用Western blot法和定量PCR檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)基因的表達(dá)，MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖，Transwell法檢測(cè)HepG2細(xì)胞的遷移和侵襲。結(jié)果 HepG2細(xì)胞分泌的Exosome表達(dá)CD63、熱休克蛋白(HSP)70和HSP90。將Exosome加入MSC培養(yǎng)體系后14 d，可檢測(cè)到α平滑肌肌動(dòng)蛋白、成纖維細(xì)胞激活蛋白α、白細(xì)胞介素(IL)- 6、IL- 8和IL- 1β等CAF特征性蛋白的表達(dá)。MTS法檢測(cè)CAF-CM組的細(xì)胞增殖OD值為1.075±0.104，明顯高于對(duì)照組的0.874±0.066(P=0.023)和MSC條件培養(yǎng)基組的0.649±0.034(P=0.0005)。CAF-CM組遷移的HepG2細(xì)胞數(shù)為(42.5±9.1)個(gè)，明顯高于對(duì)照組的(18.5±3.1)個(gè)(P=0.001)；CAF-CM組侵襲細(xì)胞數(shù)為(29.0±3.5)個(gè)，明顯高于對(duì)照組的(13.1±3.7)個(gè)(P=0.009)。CAF-CM組Smad交互蛋白1(P=0.040)、β-catenin(P=0.038)、纖連蛋白(P=0.029)和Vimentin(P=0.013)的表達(dá)較對(duì)照組顯著上調(diào)；而CAF-CM組的緊密連接蛋白表達(dá)顯著低于對(duì)照組(P=0.010)。結(jié)論 肝癌HepG2細(xì)胞系分泌的Exosome可誘導(dǎo)脂肪組織來源的MSC分化為CAF，后者又可以促進(jìn)HepG2細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。

Exosome；間充質(zhì)干細(xì)胞；肝癌；腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞

ActaAcadMedSin，2017,39(3)：312-317

腫瘤微環(huán)境中的非腫瘤細(xì)胞對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展起到重要作用，腫瘤相關(guān)的肌成纖維細(xì)胞(cancer-associated myofibroblasts，CAF)是腫瘤微環(huán)境中最常見的非腫瘤細(xì)胞，在腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、血管新生和基質(zhì)形成中扮演重要角色[1- 2]。目前研究認(rèn)為，間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells，MSCs)可能是CAF的主要來源[3]。有證據(jù)支持肝癌細(xì)胞可以促進(jìn)MSC向CAF轉(zhuǎn)化，但其機(jī)制目前尚不完全清楚[4]。Exosome是由細(xì)胞分泌至胞外的囊泡樣小體，可攜帶包括蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等多種物質(zhì)，以細(xì)胞間物質(zhì)交換作為信號(hào)傳遞的途徑[5- 6]。本研究評(píng)估了肝癌HepG2細(xì)胞分泌的Exosome對(duì)正常脂肪來源MSC分化的影響。

材料和方法

脂肪MSC的分離和培養(yǎng) 成人脂肪組織取自吸脂手術(shù)患者(北京協(xié)和醫(yī)院整形外科)，供者為25～35歲的健康女性，均簽訂知情同意書。采用吸脂術(shù)采集出來的脂肪組織用D-Hanks洗去血細(xì)胞和麻醉藥，0.2%Ⅱ型膠原酶消化1 h，再用D-Hanks洗滌2遍以除去膠原酶。離心收集細(xì)胞，以2×106/ml的密度接種于用含95% DMEM/F- 12(美國(guó)Gibco公司)+5%的FBS(美國(guó)Hyclone公司)+20 ng/ml 表皮生長(zhǎng)因子(epidermal growth factor，EGF)+100 U/ml鏈霉素+100 U/ml青霉素的培養(yǎng)基中，37℃、5%CO2、95%濕度的培養(yǎng)箱培養(yǎng)。1 d后換液，棄去未貼壁的細(xì)胞，以后每3 d半量換液。當(dāng)細(xì)胞達(dá)70%～80%融合時(shí)，用0.125%胰蛋白酶- 0.01%EDTA常規(guī)消化傳代。

肝癌HepG2細(xì)胞系培養(yǎng)及Exosome的提取 肝癌HepG2細(xì)胞系購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心，培養(yǎng)體系為H-DMEM+10%FBS。常規(guī)消化傳代。培養(yǎng)48 h后，更換為無血清的H-DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h后，收取上清并以800×g離心5 min、2000×g離心10 min以去除細(xì)胞。將上清液在0.1 mm孔徑的聚醚砜濾膜過濾除去細(xì)胞碎片和大囊泡，隨后以相對(duì)分子質(zhì)量為100 000的濾膜(CentriPlus- 70，美國(guó)Millipore公司)過濾濃縮，上清液的體積從約250～500 ml降低至小于5 ml。然后使用70Ti轉(zhuǎn)子(美國(guó)Beckman Coulter公司)將上清液在4℃以100 000×g超速離心1 h。將所得沉淀重懸于6 ml PBS中，并使用100Ti轉(zhuǎn)子(美國(guó)Beckman Coulter公司)在4℃下以100 000×g超速離心1 h。

共聚焦顯微鏡檢測(cè)HepG2細(xì)胞來源的Exosome進(jìn)入MSC胞漿 將培養(yǎng)3～4代脂肪來源的MSC用pMSCVneo-eGFP慢病毒(美國(guó)Invitrogen公司)干擾，G418壓力篩選，得到95%以上表達(dá)eGFP的MSC后，鋪于直徑3.3 cm的培養(yǎng)皿中，貼壁24 h后，加入DiI紅色熒光染料染色的HepG2來源的Exosome，24 h后固定，Hoechest33342染細(xì)胞核，共聚焦顯微鏡下觀察。

肝癌HepG2細(xì)胞分泌的Exosome誘導(dǎo)脂肪來源MSC的分化 MSC消化計(jì)數(shù)，以2×105/ml的密度接種于6孔板中，貼壁24 h，更換為DF12培養(yǎng)基，實(shí)驗(yàn)組加入100 ng/ml的HepG2細(xì)胞系來源的Exosome，對(duì)照組加入同樣濃度的牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)培養(yǎng)14 d[7]，每3 d半量換液。誘導(dǎo)14 d的CAF和對(duì)照組細(xì)胞去上清，加含10%FBS的H-DMEM完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24 h，收集上清，離心去除細(xì)胞碎片，作為條件培養(yǎng)基。

總RNA抽提和定量PCR檢測(cè) Trizol法抽提總RNA，并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，基因表達(dá)水平用定量PCR的SYBR法檢測(cè)，內(nèi)參為GAPDH。引物序列見表1。

總蛋白提取和Western blot檢測(cè) 提取細(xì)胞或Exosome總蛋白，BCA法定量，各組取40 μg總蛋白進(jìn)行10%SDS-聚丙烯凝膠電泳，并轉(zhuǎn)到PVDF膜上，一抗CD63(美國(guó)Thermo Scientific公司)，熱休克蛋白70(HSP70)、熱休克蛋白90(HSP90)、β-肌動(dòng)蛋白(均購(gòu)自中國(guó)Proteintech Group)，白細(xì)胞介素(interleukin, IL)-1β、α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)、IL- 6、IL- 8(均購(gòu)自英國(guó)Abcam公司)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)、成纖維細(xì)胞激活蛋白α(fibroblast activation protein α，F(xiàn)APA)、緊密連接蛋白(zonula occludens- 1，ZO- 1)、β-catenin、纖連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)、Vimentin、Smad交互蛋白- 1(Smad interacting protein 1，Sip- 1)抗體(均購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司)1∶1000 4℃過夜，內(nèi)參為GAPDH(美國(guó)Santa Cruz公司)，二抗室溫孵育1 h，ECL熒光顯色，照相。

MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖 將HepG2細(xì)胞以3×104/ml密度種入96孔U型板中，6 h后去上清，分別加入H-DMEM完全培養(yǎng)基(對(duì)照組)，BSA-MSC組條件培養(yǎng)基，CAF組條件培養(yǎng)基，培養(yǎng)3 d后，去上清，每孔加入100 μl無血清H-DMEM培養(yǎng)基和20 μl MTS，37℃孵育1 h后，490 nm酶標(biāo)儀檢測(cè)OD值。

細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn) 遷移實(shí)驗(yàn)在Transwell(Costa)小室中進(jìn)行，培養(yǎng)的細(xì)胞常規(guī)消化計(jì)數(shù)，用無血清培養(yǎng)基重懸，200 μl的細(xì)胞懸液(1×106個(gè)細(xì)胞/ml)后加入Transwell的上室，下室加入含10%FBS的H-DMEM培養(yǎng)基500 μl，培養(yǎng) 24 h左右后固定，結(jié)晶紫染色，顯微鏡下計(jì)數(shù)。侵襲實(shí)驗(yàn)是在 Transwell 小室內(nèi)預(yù)先鋪ECM膠，培養(yǎng) 72 h后固定，其他部分同遷移實(shí)驗(yàn)。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

HeG2來源的Exosome的鑒定 Western blot法檢測(cè)結(jié)果顯示，HepG2來源的Exosome可表達(dá)CD63、HSP70和HSP90(圖1A)。透射電子顯微鏡下觀察到 Exosome為30～100 nm的小囊泡結(jié)構(gòu)(圖1B)。

HepG2來源的Exosome可直接進(jìn)入MSC的胞漿 HepG2來源的Exosome用DiI紅色熒光染料染色后，加在eGFP-MSC培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)24 h后固定，共聚焦顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)MSC的胞漿中可見大量紅色的Exosome分布(圖2)。

表 1 定量PCR引物序列

A.Western blot檢測(cè)結(jié)果；B.電鏡圖

A.Western blottling results；B.electron microscopy

圖 1 HepG2來源的Exosome的特征

Fig 1 Characteristics of HepG2-derived Exosome

HepG2來源的Exosome可誘導(dǎo)MSC分化為CAF樣細(xì)胞 將HepG2分泌的Exosome或BSA加入MSC培養(yǎng)體系后培養(yǎng)14 d，Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示，加入Exosome實(shí)驗(yàn)組的IL- 1β、FAPA、α-SMA、IL- 6和IL- 8等CAF特征性蛋白的半定量相對(duì)蛋白灰度表達(dá)分別為1.27±0.22、0.98±0.08、0.70±0.02、1.42±0.13和0.67±0.06，顯著高于對(duì)照組的0.99±0.05(t=5.53，P=0.03)、0.82±0.06(t=8.75，P=0.013)、0.56±0.04(t=6.902，P=0.02)、1.23±0.03(t=4.69，P=0.04)和0.51±0.05(t=15.4，P=0.004)，VEGF水平與對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.96，P=0.058)(圖3)。

CAF樣細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)HepG2增殖的影響 將CAF細(xì)胞條件培養(yǎng)基(CAF-CM)和MSC條件培養(yǎng)基分別用于培養(yǎng)HepG2細(xì)胞，MTS法檢測(cè)結(jié)果顯示，CAF-CM組的OD值為1.075±0.104，明顯高于對(duì)照組的0.874±0.066(t=3.22，P=0.023)和

MSC條件培養(yǎng)基組的0.649±0.034(t=7.89，P=0.0005)。

CAF樣細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)HepG2遷移和侵襲的影響 遷移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CAF-CM組遷移過去的細(xì)胞數(shù)為(42.5±9.1)個(gè)，明顯高于對(duì)照組的(18.5±3.1)個(gè)(t=11.55，P=0.001)。侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CAF-CM組侵襲過去的細(xì)胞數(shù)為(29.0±3.5)個(gè)，也明顯高于對(duì)照組的(13.1±3.7)個(gè)(t=6.06，P=0.009)。定量結(jié)果顯示，CAF-CM組的Sip- 1、β-catenin、FN和Vimentin的基因相對(duì)表達(dá)(以對(duì)照組表達(dá)為1)水平分別為3.62±0.94(t=4.85，P=0.04)、2.11±0.39(t=4.96，P=0.038)、4.08±0.92(t=5.77，P=0.029)和6.19±1.04(t=8.56，P=0.013)，均較對(duì)照組顯著上調(diào)；ZO- 1相對(duì)表達(dá)水平為0.45±0.09，顯著低于對(duì)照組(t=-9.98，P=0.01)(圖4)。

討 論

肝癌是世界范圍內(nèi)最常見的腫瘤之一，目前以手術(shù)治療為主，而對(duì)于晚期不能手術(shù)的患者，治療手段有限。傳統(tǒng)上肝癌對(duì)化療和放療不敏感，而靶向治療受益的患者有限，肝癌治療急需尋找新的治療靶點(diǎn)。目前靶向藥物研究不單只關(guān)注腫瘤細(xì)胞本身，也逐漸著眼于腫瘤所處的微環(huán)境。本研究評(píng)估了肝癌HepG2細(xì)胞分泌的Exosome對(duì)MSC分化的影響及其相互作用機(jī)制，以期肝癌治療提供新的策略。

MSC：間充質(zhì)干細(xì)胞

MSC：mesenchymal stem cell

A. Hoechest33342染色，細(xì)胞核發(fā)藍(lán)色熒光；B. MSC表達(dá)增強(qiáng)綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，eGFR)發(fā)出綠色螢光；C. Dil染色使Exosome發(fā)出紅色熒光；D. 合成圖

A. Hoechest33342 staining，see nuclei showed blue fluorescence；B.MSC express eGFP showed green fluorescence；C. Dil staining，Exosome showed red fluorescence；D. generated the three images together

圖 2 共聚焦顯微鏡檢測(cè)HepG2-Exosome可進(jìn)入MSC的胞漿

Fig 2 Confocal laser scanning microscope shows that hepatoma cell-derived Exosome enter the cytoplasm of MSC

VEGF：血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子；FAPA：成纖維細(xì)胞激活蛋白α；α-SMA：α平滑肌肌動(dòng)蛋白；IL：白細(xì)胞介素；CAF：腫瘤相關(guān)肌成纖維細(xì)胞

VEGF：vascular endothelial growth factor；FAPA：fibroblast activation protein α；α-SMA：α-smooth muscle actin；IL：interleukin；CAF：cancer-associated myofibroblasts

圖 3 Western blot法檢測(cè)HepG2-Exosome培養(yǎng)14 d后CAF特征性蛋白在MSC中的表達(dá)情況

Fig 3 Western blotting shows that the cells expressed the typical characteristic protein of CAF 14 days after culturing of HepG2 cell-derived Exosome

Sip- 1：Smad交互蛋白1；FN：纖連蛋白；ZO- 1：緊密連接蛋白

Sip- 1：Smad interacting protein 1；FN：fibronectin；ZO- 1：zonula occludens- 1

A.Transwell實(shí)驗(yàn)中CAF-CM促進(jìn)HepG2細(xì)胞遷移和侵襲的顯微鏡下代表性結(jié)果(×200)；B.Western blot法檢測(cè)CAF-CM對(duì)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白影響

A.microscopic image of crystal violet staining of Transwell(×200)；

B.the protein expressions of epithelial and mesenchymal makers in dealing with CAF-CM and control

圖 4 CAF細(xì)胞條件培養(yǎng)基對(duì)HepG2細(xì)胞遷移和侵襲的作用

Fig 4 Effects of CAF-CM on cell migration and invasion of HepG2

有研究證實(shí)，膽管癌[8]、前列腺[9]、乳腺癌[10]、胃癌[11]、卵巢癌[12]等上皮來源的腫瘤細(xì)胞系分泌的Exosome可以誘導(dǎo)MSC(骨髓，脂肪，臍帶等來源)中α-SMA表達(dá)顯著升高，從而分化為功能性CAF，但是肝癌細(xì)胞是否有同樣的作用則少見報(bào)道。本研究采用電鏡和Western blot法檢測(cè)了肝癌HepG2細(xì)胞來源的Exosome的特征，結(jié)果示鏡下所見的Exosome為30～100 nm的小囊泡結(jié)構(gòu)，可表達(dá)CD63、HSP70和HSP90抗體，提示成功提取了Exosome。已知CAF為存在于腫瘤間質(zhì)中活化的成纖維細(xì)胞，其特異性標(biāo)志物包括α-SMA、Vimentin和FAPA等[13]，腫瘤細(xì)胞可通過分泌可溶性因子誘導(dǎo)CAF的形成及活化。本研究結(jié)果顯示，人脂肪來源MSC經(jīng)HepG2-Exosome誘導(dǎo)分化后，α-SMA和FAPA等特征性蛋白表達(dá)顯著，IL- 1β、IL- 6和IL- 8等細(xì)胞因子表達(dá)也顯著增高，符合CAF的特點(diǎn)，證實(shí)肝癌細(xì)胞系HepG2可能通過Exosome促進(jìn)脂肪來源MSC轉(zhuǎn)化為CAF。此外，腫瘤細(xì)胞與CAF之間的作用是雙向的，CAF活化后，能夠分泌一系列細(xì)胞因子包括生長(zhǎng)因子、趨化因子、IL- 6等，通過促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)重塑、細(xì)胞增殖、血管生成、細(xì)胞遷徙及EMT等進(jìn)一步維持腫瘤的進(jìn)展[14- 15]。本研究通過增殖和遷移侵襲實(shí)驗(yàn)證實(shí)了CAF條件培養(yǎng)基能增強(qiáng)肝癌細(xì)胞系HepG2的增殖、遷移和侵襲能力，且通過Western blot檢測(cè)和定量PCR驗(yàn)證了轉(zhuǎn)化為CAF樣細(xì)胞的培養(yǎng)基能誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞上皮間質(zhì)化，支持了CAF能促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的觀點(diǎn)。

綜上，本研究結(jié)果顯示，肝癌上皮細(xì)胞來源的Exosome可以誘導(dǎo)正常組織來源的MSC分化為有功能的CAF。若阻斷MSC分化為CAF，可能有助于減緩腫瘤發(fā)展的進(jìn)程，為肝癌等腫瘤治療提供新的靶點(diǎn)。另外，Exosome中富含蛋白和非編碼 RNA，可在細(xì)胞間傳遞多種信號(hào)分子，但其調(diào)控MSC分化的信號(hào)通路的機(jī)制尚不清楚，仍需進(jìn)一步研究。

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Effect of Human Hepatocellular Carcinoma HepG2 Cell-derived Exosome on theDifferentiation of Mesenchymal Stem Cells and Their Interaction

LUO Fei1，SUN Zhao1，HAN Qin2，XUE Chunling2，BAI Chunmei1

1Department of Oncology，PUMC Hospital，CAMS and PUMC，Beijing 100052，China2Center of Excellence in Tissue Engineering，Institute of Basic Medical Sciences，CAMS and PUMC，Beijing 100005，ChinaCorresponding author：BAI Chunmei Tel：010- 69158315，E-mail：baichunmei1964@126.com

Objective To investigate the effect of human hepatocellular carcinoma HepG2 cell-derived Exosome on the differentiation of mesenchymal stem cells(MSC)into cancer-associated myofibroblasts(CAF)and the impacts of CAF on liver cancer cell proliferation，migration，and invasion. Methods The protein expression of HepG2 cell-derived Exosome was detected by Western blotting. MSCs were separated from human adipose tissue and cultured with HepG2 cell-derived Exosome(100 ng/nl)to initiate differentiation. The expressions of mesenchymal markers and several interleukins were also detected by Western blotting. HepG2 cells were co-cultured with the conditioned media(CM)，in which HepG2 Exosome induced the differentiation of MSC into CAF. The expressions of epithelial and mesenchymal markers were detected by real-time polymerase chain reaction(PCR)and Western blotting. Cell proliferation was assessed using MTS assay. Transwell chambers were used in theinvitromigration and invasion assay. Results HepG2 cell-derived particles expressed CD63，70 kilodalton heat shock proteins，and 90 kilodalton heat shock proteins. With the treatment of HepG2 cell-derived Exosome，the expressions of mesenchymal marker α-smooth muscle actin，fibroblast activation protein α，interleukin(IL)- 6，IL- 8，and IL- 1β were up-regulated，while vascular endothelial growth factor had no significant change. The conditioned media which HepG2 Exosome induced MSC differentiation CAF(CAF-CM)could significantly promote HepG2 cells proliferation(1.075±0.104)，compared to BSA control(0.874±0.066，P=0.023)and MSC-CM(0.649±0.034，P=0.0005). CAF-CM could significantly enhance cell migration [(42.5±9.1) cellsvs.(18.5±3.1) cells，P=0.001] and invasion [(29.0±3.5) cellsvs.(13.1±3.7) cells，P=0.009] compared to its control group. Moreover the conditioned medium which HepG2 Exosome induced MSC to differentiate into CAF could also promote the expressions of mesenchyme-related genes Smad interacting protein 1(P=0.040)，β-catenin(P=0.038)，fibronectin(P=0.029)，and Vimentin(P=0.013)and inhibit the expression of epithelial related genes zonula ocdudens- 1(P=0.010).Conclusions Exosome extracted from HepG2 cells can induce human adipose-derived MSC to differentiate into cancer-associated myofibroblasts. CAF-like cells can promote the migration of the liver cancer cell line HepG2.

Exosome；mesenchymal stem cells；liver cancer；cancer-associated myofibroblasts

國(guó)家自然科學(xué)基金(81472785、61435001)Supported by the National Natural Sciences Foundation of China(81472785，61435001)

白春梅 電話：010- 69158315，電子郵件：baichunmei1964@126.com

R735.7

A

1000- 503X(2017)03- 0312- 06

10.3881/j.issn.1000- 503X.2017.03.003

2016- 10- 08)