刁曉艷, 何 燕

(貴州醫(yī)科大學(xué), 1. 心血管科; 2. 分子生物學(xué)教研室, 貴州 貴陽, 550025)

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CYP17A1基因多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的相關(guān)性研究

刁曉艷1, 何 燕2

(貴州醫(yī)科大學(xué), 1. 心血管科; 2. 分子生物學(xué)教研室, 貴州 貴陽, 550025)

目的 探討CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)多態(tài)性與原發(fā)性高血壓關(guān)系。方法 選取原發(fā)性高血壓患者143例和健康體檢者199例。應(yīng)用TaqMan探針分析CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)多態(tài)性的基因型，并探討其相關(guān)性，采用逐步Logistic回歸分析，分析獲得性因素對(duì)高血壓的影響。結(jié)果 經(jīng)χ2檢驗(yàn), 2組間基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 2組間等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。TT和CT基因型較CC基因型對(duì)于患病具有較高風(fēng)險(xiǎn), CC基因型的個(gè)體患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)分別是攜帶TT基因型的0.370倍，攜帶T等位基因的個(gè)體患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶C等位基因的1.776倍。獲得性因素中，空腹血糖、甘油三酯及年齡較高的人群具有更高的患病風(fēng)險(xiǎn)。結(jié)論 CYP17A1基因rs11191548多態(tài)性與原發(fā)性高血壓發(fā)病可能相關(guān)，其中TT基因型及T等位基因的個(gè)體患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)升高，獲得性因素對(duì)高血壓的發(fā)病有顯著影響。

原發(fā)性高血壓; CYP17A1; 基因多態(tài)性; 獲得性因素

高血壓是指以體循環(huán)動(dòng)脈血壓增高為主要特征，并可伴有心、腦、腎等器官的功能或器質(zhì)性損害的臨床綜合征。原發(fā)性高血壓(EH)是由遺傳因素與環(huán)境因素相互作用所致的復(fù)雜性疾病[1]。近年來，臨床上對(duì)細(xì)胞色素p450c17alpha蛋白(CYPP17A1基因)多態(tài)性與EH發(fā)病的相關(guān)性研究較為重視[2-6]。本研究探討貴陽市部分漢族人群CYPP17A1基因多態(tài)性與EH發(fā)病的相關(guān)性，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年3月—2015年3月在本院心內(nèi)科門診及心內(nèi)科住院部就診的原發(fā)性高血壓(EH)患者143例，設(shè)為高血壓組，其中男69例，女74例，平均年齡(59.41±11.88)歲。EH患者血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中國高血壓基層管理指南(2014年修訂版)中的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：繼發(fā)性高血壓患者; 合并瓣膜疾病、心肌病患者; 合并肝、腎衰竭患者; 孕婦、哺乳期婦女; 有精神疾病史或?yàn)E用藥物者等。另選擇本院門診的健康體檢者199例為對(duì)照組，其中男87例，女112 例，平均年齡(54.95±11.06)歲?；颊呔鶡o高血壓家族史，無各類心血管、腦血管、腎、內(nèi)分泌等方面疾病。2組患者性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。2組均為貴州籍漢族人，且互相均無血緣關(guān)系。

1.2 方法

① 抽取患者清晨空腹靜脈血，檢測(cè)血脂指標(biāo)(包括甘油三酯、總膽固醇)、血糖和尿酸。② 采用國際標(biāo)準(zhǔn)化方法測(cè)量身高、體質(zhì)量。計(jì)算體質(zhì)量指數(shù)(BMI), BMI=體質(zhì)量/身高2(kg/m2)。③ 基因分型：按經(jīng)典常規(guī)法(酚-氯仿法)抽提白細(xì)胞DNA, 溶于TE; 紫外吸收法定量后標(biāo)化為30 ng/μL, -40 ℃?zhèn)溆?。?yīng)用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。PCR反應(yīng)為10 μL體系: DNA(濃度為30 ng/μL)1.5 μL, 通用TaqMan PCR Master Mix 5 μL, 雙蒸水3.25 μL, 20×基因分型探針及引物0.25 μL。其中TaqMan PCR Master Mix、基因分型探針及引物均購自美國ABI公司，探針分別用FAM、VIC染料標(biāo)記。反應(yīng)條件為: 95 ℃10 min活化AmpliTaq金牌酶后, 95 ℃15 s, 60 ℃ 1 min 20 s, 共55個(gè)循環(huán)。儀器采用美國ABI公司生產(chǎn)的Step one Plus PCR儀，讀取FAM/VIC熒光判斷基因分析結(jié)果。FAM熒光探針識(shí)別T等位基因, VIC熒光探針識(shí)別C等位基因。每塊96孔板設(shè)3孔陰性對(duì)照，并隨機(jī)抽取5%樣本復(fù)測(cè)，一致性為100%。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)和單因素方差分析。各組的基因型和等位基因頻率采用直接計(jì)數(shù)法, Hardy-Weinberg平衡吻合度檢驗(yàn)基因型分布，采用χ2檢驗(yàn)的方法，組間基因型和等位基因頻率的比較采用χ2檢驗(yàn)或確切概率法檢驗(yàn)。高血壓的危險(xiǎn)因素采用多因素Logistic回歸分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 2組一般資料及臨床生化指標(biāo)比較

2組性別、尿酸、膽固醇、體質(zhì)量指數(shù)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), EH組年齡、血糖、甘油三酯與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 高血壓組和對(duì)照組臨床生化指標(biāo)比較

與對(duì)照組相比較, *P<0.05。

2.2 高血壓組與對(duì)照組CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)基因型分布的H-W平衡檢驗(yàn)

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，2組的基因型頻率均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P>0.05)。

2.3 高血壓組及對(duì)照組的基因型和等位基因頻率分布

經(jīng)χ2檢驗(yàn), 2組基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 2組等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 而各組中不同性別者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 高血壓組與對(duì)照組CYP17A1基因型和等位基因頻率比較

與對(duì)照組比較, *P<0.05。

2.4 CYP17A1基因rs11191548多態(tài)性與原發(fā)性高血壓的風(fēng)險(xiǎn)分析

對(duì)rs11191548進(jìn)行單因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，攜帶rs11191548基因CT基因型和CC基因型的個(gè)體患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)分別是攜帶TT基因型的0.574及0.370倍，攜帶T等位基因的個(gè)體患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶C等位基因的1.776倍。見表3。

2.5 多因素分析

以是否患高血壓為因變量，性別、年齡、空腹血糖、尿酸、甘油三酯、膽固醇、體質(zhì)量指數(shù)、rs11191548基因型為自變量，進(jìn)行非條件Logistic回歸分析，結(jié)果顯示年齡、空腹血糖、甘油三酯是高血壓發(fā)病的危險(xiǎn)因素，見表4。

表3 CYP17A1基因多態(tài)性與高血壓的風(fēng)險(xiǎn)分析

表4 貴州省漢族原發(fā)性高血壓危險(xiǎn)因素的多因素Logistic回歸分析

3 討 論

CYP17A1基因編碼細(xì)胞色素P450c17alpha蛋白，影響類固醇17alpha-羥化酶和17, 20 裂解酶活性，在類固醇的生存途徑的調(diào)控中起著重要的作用。CYP17A1在腎上腺及性腺表達(dá)量較多，其rs11191548位點(diǎn)的突變可導(dǎo)致17alpha-羥化酶/17, 20 裂解酶缺陷癥，從而損害腎上腺和性腺中類固醇激素的合成。當(dāng)這兩種酶的活性同時(shí)缺乏時(shí)，此時(shí)孕烯醇酮向鹽皮質(zhì)激素方向轉(zhuǎn)化，血中的11-去氧皮質(zhì)酮、皮質(zhì)酮、醛固酮的水平升高，而血中皮質(zhì)醇、性激素水平降低, 17α羥類固醇激素水平極低，促性腺激素及促腎上腺皮質(zhì)激素代償性的呈高分泌狀態(tài)，因而刺激腎上腺皮質(zhì)增生和17-脫氧類固醇前體如孕酮、孕烯醇酮、脫氧皮質(zhì)酮、皮質(zhì)酮等發(fā)揮鹽皮質(zhì)激素功能，引起水鈉潴留，血壓增高[7]。

近年來，很多研究致力于rs11191548與高血壓相關(guān)性，但是結(jié)論有所爭議, Newton-Cheh[2]在歐洲家系及印度-亞洲家系的樣本進(jìn)行研究中認(rèn)為位于10q24.3的CYPl7A1基因的rs11191548與收縮壓(SBP)相關(guān)。Hong等[3]選擇了7551例韓國人，研究發(fā)現(xiàn)CYPl7A1基因rs11191548位點(diǎn)攜帶C最小等位基因能顯著降低SBP、舒張壓(DBP)及高血壓的患病風(fēng)險(xiǎn)。 而LI等[5]選取了2111例上海地區(qū)漢族人群進(jìn)行研究表明, CYPl7A1基因rs11191548位點(diǎn)攜帶C最小等位基因的能增加高血壓的患病風(fēng)險(xiǎn)。Lin[6]與先前的歐洲人群和中國漢族人群不同，在畬族人群中未發(fā)現(xiàn)rslll91548突變與高血壓有顯著的相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示, rs11191548基因型與等位基因頻率在貴州省漢族的EH組和對(duì)照組中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, CT基因型和CC基因型的個(gè)體患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)分別是攜帶TT基因型的0.574及0.370倍，攜帶T等位基因的個(gè)體患高血壓的風(fēng)險(xiǎn)是攜帶C等位基因的1.776倍。這可能提示CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)上T等位基因與高血壓的發(fā)病相關(guān)。本研究對(duì)EH組和對(duì)照組的一般情況及相關(guān)生化結(jié)果等進(jìn)行多元回歸分析，結(jié)果顯示年齡、空腹血糖、甘油三酯是高血壓發(fā)病的危險(xiǎn)因素，此時(shí)基因多態(tài)性的影響就被排除在外了，這也提示原發(fā)性高血壓的發(fā)病是多因素的，環(huán)境及獲得性因素對(duì)高血壓發(fā)病的影響有可能比基因還大，在高血壓的一級(jí)預(yù)防中要重視體質(zhì)量，血糖、血脂的控制。

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Association between CYP17A1 gene polymorphism and essential hypertension

DIAO Xiaoyan1, HE Yan2

(1.CardiovascularDepartment; 2.DepartmentofMolecularBiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang,Guizhou, 550025)

Objective To investigate the relationship between rs11191548 gene locus polymorphism in CYP17A1 gene and essential hypertension. Methods A total of 143 patients with essential hypertension and 199 healthy subjects were selected. TaqMan probe was used to analyze the genotype of rs11191548 gene locus in CYP17A1 gene and their correlation was analyzed. Stepwise Logistic regression analysis was used to analyze the influence of acquired factors on hypertension. Results There was significant difference in genotype distribution and allele frequency distribution between the two groups (P<0.05). TT and CT genotype had higher risk for diseases compared with CC genotype, the CC genotype of the risk of hypertension was 0.370 times with the TT genotype, and individuals carrying the T allele were 1.776 times the risk of hypertension with C allele. Fasting blood glucose, triglycerides, and older people were more likely to have a higher risk of hypertension. Conclusion The rs11191548 polymorphism of CYP17A1 gene may be associated with the pathogenesis of essential hypertension, and the individuals with TT genotype and T allele may be at increased risk of developing hypertension. Acquired factors have a significant impact on the incidence of hypertension.

essential hypertension; CYP17A1; gene polymorphism; acquired factors

2017-01-20

R 544.1

A

1672-2353(2017)13-008-04

10.7619/jcmp.201713003