夏盛隆 薛戰(zhàn)雄 蔡振寨 夏宣平 湯一冰 蔣 益&

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院消化內(nèi)科1(325000) 病理科2

?

Th1、Th2和Th17細(xì)胞失衡與克羅恩病的關(guān)系*

夏盛隆1#薛戰(zhàn)雄1蔡振寨1夏宣平1湯一冰2蔣 益1&

溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院消化內(nèi)科1(325000) 病理科2

背景：免疫功能紊亂是炎癥性腸病發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，研究發(fā)現(xiàn)Th1、Th2和Th17細(xì)胞比例失衡與腸道免疫失調(diào)相關(guān)。目的：探討Th1、Th2和Th17細(xì)胞失衡與克羅恩病(CD)的關(guān)系。方法：收集2013年1月—2014年12月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院收治的CD患者36例，同期行腸息肉摘除術(shù)患者40例作為對(duì)照組，分別取病變部位腸組織和正常腸組織，采用real-time PCR和免疫組化法檢測(cè)Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(T-bet、GATA-3、RORγt)和細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表達(dá)。結(jié)果：與對(duì)照組相比，CD組腸組織中T-bet、RORγt mRNA表達(dá)、IFN-γ、IL-17A mRNA和蛋白表達(dá)以及代表Th1/Th2、Th17/Th2比例的T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值均顯著增高(P<0.05)，各轉(zhuǎn)錄因子與相應(yīng)細(xì)胞因子表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。IFN-γ和IL-17A免疫陽(yáng)性物質(zhì)均定位于細(xì)胞質(zhì)，在CD患者中陽(yáng)性細(xì)胞主要分布于上皮層和黏膜固有層。分層分析顯示活動(dòng)期CD的上述指標(biāo)均顯著高于緩解期(P<0.05)；活動(dòng)期CD代表Th17/Th1比例的RORγt/T-bet比值亦較緩解期顯著增高(P<0.05)。結(jié)論：腸組織中Th1、Th2和Th17細(xì)胞失衡與CD密切相關(guān)，Th1、Th17細(xì)胞極化可能在其中起重要作用，活動(dòng)期CD以Th17細(xì)胞極化為著。

Crohn?。?Th1細(xì)胞； Th2細(xì)胞； Th17細(xì)胞

傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為克羅恩病(Crohn’s disease, CD)主要是由Th1型免疫反應(yīng)介導(dǎo)，與Th2細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-4(IL-4)、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子無(wú)關(guān)。近年來(lái)，隨著Th17細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)，一些學(xué)者提出Th17細(xì)胞極化可能是炎癥性腸病(IBD)的發(fā)病機(jī)制之一[1-2]，但亦存在不同觀點(diǎn)[3]。如有研究發(fā)現(xiàn)，以IL-17A抗體拮抗Th17細(xì)胞功能非但不能誘導(dǎo)CD臨床緩解，還可能導(dǎo)致炎癥進(jìn)展[4]；經(jīng)治療獲得臨床緩解的CD患者，外周血Th17細(xì)胞比例反而顯著高于活動(dòng)期[5]。一項(xiàng)對(duì)德國(guó)IBD患者的研究[6]顯示，在活動(dòng)期IBD患者炎癥黏膜中特異性聚集的Th17細(xì)胞兼有Th1細(xì)胞特性[干擾素-γ(IFN-γ)+IL-17+CD4+T細(xì)胞]。對(duì)意大利CD患者的研究[7]發(fā)現(xiàn)，病程較長(zhǎng)的CD患者病變腸黏膜中Th1、Th2、Th17型細(xì)胞因子表達(dá)均顯著上調(diào)。本研究擬檢測(cè)浙江地區(qū)漢族CD患者腸組織中的Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(T-bet、GATA-3、RORγt)和細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17A)表達(dá)水平，并分析其比例失衡與CD的關(guān)系，以期為深入揭示CD的免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。

材料與方法

一、研究對(duì)象

收集2013年1月—2014年12月溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院消化內(nèi)科收治的CD患者36例，其中男性16例，女性20例，平均年齡(31.22±5.88)歲，CD診斷參照《炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(2012年·廣州)》[8]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)臨床、實(shí)驗(yàn)室、影像學(xué)、內(nèi)鏡、組織病理學(xué)檢查綜合確立。疾病活動(dòng)性的評(píng)估采用簡(jiǎn)化CD活動(dòng)指數(shù)(CDAI)[8]，入組患者緩解期(≤4分)10例，活動(dòng)期(≥5分)26例。同期選取于該院行腸息肉摘除術(shù)的患者40例作為對(duì)照組，其中男性19例，女性21例，平均年齡(30.61±6.13)歲，經(jīng)相關(guān)檢查排除感染性疾病、腫瘤、自身免疫性疾病。兩組受試者均為相互間無(wú)血緣關(guān)系的浙江地區(qū)漢族居民，性別構(gòu)成和平均年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，受試者均簽署知情同意書。

二、方法

1. 標(biāo)本采集：CD患者取病變部位腸組織，對(duì)照組腸息肉患者取相同部位正常腸組織，一部分以 0.9%NaCl溶液反復(fù)沖洗后液氮快速冷卻，-80 ℃冰箱保存，用于real-time PCR；另一部分4%多聚甲醛溶液固定，石蠟包埋，制作病理切片。

2. Real-time PCR檢測(cè)Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子表達(dá)：以TRIzol試劑(Thermo Fisher Scientific)提取腸組織總RNA，檢測(cè)RNA純度和濃度，使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(上海捷瑞生物工程有限公司)逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，以之為模板行real-time PCR，引物由武漢谷歌生物科技有限公司設(shè)計(jì)、合成(表1)。25 μL反應(yīng)體系中含cDNA 2.5 μL、上下游引物各1.0 μL、2×SYBR Green qPCR Mix(北京鼎國(guó)昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司)12.5 μL和適 量去離子水。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min；95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，循環(huán)40次。2-△△CT法計(jì)算目的基因mRNA相對(duì)表達(dá)量。

表1 Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和細(xì)胞因子PCR引物序列

目的基因引物序列β-actinF5’-CACCCAGCACAATGAAGATCAAGAT-3’ (內(nèi)參)R5’-CCAGTTTTTAAATCCTGAGTCAAGC-3’T-betF5’-TGTGACCCAGATGATTGTGC-3’R5’-TGGAAAGTAAAGATATGCGTGTT-3’GATA-3F5’-CGAGATGGCACGGGACACTA-3’R5’-TGGTCTGGATGCCTTCCTTCTT-3’RORγtF5’-GAAGTGGTGCTGGTTAGGATGT-3’R5’-TTGCAGAGATGATGATGAAAGG-3’IFN-γF5’-CAGCTCTGCATCGTTTTGGG-3’R5’-GTTCCATTATCCGCTACATCTGAA-3’IL-4F5’-CCACAGGCACAAGCAGCTG-3’R5’-CAGGCCCCAGAGGTTCCT-3’IL-17AF5’-ATGGGGAAAATGAAACCCTC-3’R5’-TCAGCTCCTTTCTGGGTTGT-3’

3. 免疫組化法檢測(cè)Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)：腸組織石蠟包埋，5 μm厚切片，常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，枸櫞酸抗原修復(fù)液95 ℃ 40 min，3% H2O225 min，5%山羊血清封閉，滴加鼠抗人IFN-γ、IL-4、IL-17A抗體(1∶20稀釋，Santa Cruz Biotechnology)，4 ℃過(guò)夜，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，PBS沖洗切片3次，滴加HRP標(biāo)記山羊抗鼠二抗(武漢三鷹生物技術(shù)有限公司)，37 ℃ 50 min，PBS洗滌，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，二甲苯脫水，中性樹膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察。細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色免疫陽(yáng)性物質(zhì)為陽(yáng)性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野(×200)，Image-Pro Plus 6.0軟件進(jìn)行半定量分析。目的蛋白相對(duì)表達(dá)量以陽(yáng)性區(qū)域積分光密度值(IOD)與陽(yáng)性面積(μm2)的比值表示。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)

Real-time PCR檢測(cè)顯示，CD組腸組織中T-bet、RORγt mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，兩組間GATA-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì) 學(xué)意義(P>0.05)；活動(dòng)期CD T-bet、RORγt mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于緩解期(P<0.05)，兩亞組間GATA-3 mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。上述結(jié)果表明CD患者尤其是活動(dòng)期CD患者腸組織中有大量Th1、Th17細(xì)胞浸潤(rùn)。

二、Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)

Real-time PCR檢測(cè)顯示，CD組腸組織中IFN-γ、IL-17A mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，兩組間IL-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；活動(dòng)期CD IFN-γ、IL-17A mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著高于緩解期(P<0.05)，兩亞組間IL-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表2)。

免疫組化法檢測(cè)顯示，IFN-γ、IL-4、IL-17A免疫陽(yáng)性物質(zhì)均定位于細(xì)胞質(zhì)，蛋白表達(dá)在CD組和對(duì)照組中的趨勢(shì)與mRNA表達(dá)一致。在CD患者的腸組織中，IFN-γ+、IL-17A+細(xì)胞主要分布于上皮層和黏膜固有層，表達(dá)強(qiáng)度顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，其中活動(dòng)期CD又顯著高于緩解期(P<0.05)；IL-4在CD組和對(duì)照組腸組織中均為少量棕黃色表達(dá)，CD組與對(duì)照組間、活動(dòng)期與緩解期CD間表達(dá)強(qiáng)度差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。上述結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)CD患者腸組織中有大量Th1、Th17細(xì)胞浸潤(rùn)，相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)水平顯著上調(diào)，以活動(dòng)期CD為著(表2、圖1)。

三、Th1、Th2、Th17細(xì)胞失衡與CD的關(guān)系

Spearman秩相關(guān)系數(shù)分析顯示，CD患者腸組織中的T-bet、GATA-3、RORγt mRNA表達(dá)分別與INF-γ、IL-4、IL-17A mRNA表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.551,P=0.012;r=0.621,P=0.027;r=0.542,P=0.002)。分別以T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3和RORγt/T-bet比值表示Th1/Th2、Th17/Th2和Th17/Th1比例，結(jié)果顯示T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，兩組間RORγt/T-bet比值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，提示Th1、Th17細(xì)胞極化與CD密切相關(guān)；與緩解期CD相比，活動(dòng)期CD不僅T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值顯著增高(P<0.05)，RORγt/T-bet比值亦顯著增高(P<0.05)，表明活動(dòng)期CD腸組織中Th1、Th17細(xì)胞增多且以Th17細(xì)胞為著(表3)。

表1 腸組織Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)

表2 腸組織Th1、Th2、Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)

圖1 對(duì)照組和CD組腸組織IFN-γ、IL-4、IL-17A免疫組化染色(×200)

討 論

免疫功能紊亂是IBD發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，研究發(fā)現(xiàn)Th1、Th2和Th17細(xì)胞比例失衡與腸道免疫失調(diào)有密切關(guān)聯(lián)[9]，效應(yīng)CD4+T細(xì)胞異?；罨菍?dǎo)致腸黏膜免疫反應(yīng)異常及其后續(xù)炎癥反應(yīng)的重要機(jī)制之一， 幼稚T細(xì)胞向不同方向極化后產(chǎn)生的相應(yīng)細(xì)胞因子反應(yīng)是決定IBD發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸的重要病理生理因素。Th1和Th2細(xì)胞是CD4+T細(xì)胞中較早 被發(fā)現(xiàn)的亞群。通常認(rèn)為抗原呈遞細(xì)胞分泌IFN-γ后作用于幼稚T細(xì)胞上的轉(zhuǎn)錄因子STAT1，后者轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核內(nèi)激活Th1細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子T-bet，促進(jìn)幼稚T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化。Th1細(xì)胞主要分泌INF-γ、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、IL-2等促炎細(xì)胞因子，增強(qiáng)免疫細(xì)胞殺傷細(xì)胞內(nèi)病原體的能力。在IL-4的作用下，幼稚T細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子GATA-3激活，通過(guò)下游靶基因表達(dá)使幼稚T細(xì)胞向Th2細(xì)胞分化，后者主要分泌IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子。Th2細(xì)胞可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體以清除細(xì)胞外病原體，并協(xié)助激活B細(xì)胞調(diào)節(jié)體液免疫。Th17細(xì)胞是一類具有與Th1、Th2細(xì)胞亞群不同分化機(jī)制和功能特征的新型CD4+T細(xì)胞亞群，RORγt和RORα是調(diào)控其分化進(jìn)程的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子(RORα主要起協(xié)同RORγt的作用)，主要分泌IL-17A、IL-17F、IL-21、IL-22等，在誘導(dǎo)TNF-α、IL-1β等促炎細(xì)胞因子、CXC趨化因子、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)表達(dá)，以及中性粒細(xì)胞的增殖、成熟、趨化等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[3,10]。盡管Th1、Th2、Th17細(xì)胞因轉(zhuǎn)錄因子和功能特征不同而被歸為不同CD4+T細(xì)胞亞群，但三者在分化和功能上相互制約、相互影響，共同維持機(jī)體免疫穩(wěn)態(tài)。

表3 腸組織Th1/Th2、Th17/Th2、Th17/Th1細(xì)胞比例

本研究real-time PCR和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示，CD患者腸組織中Th1、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(T-bet、RORγt)和細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-17A)表達(dá)均較對(duì)照組顯著上調(diào)，分別代表Th1/Th2、Th17/Th2比例的T-bet/GATA-3、RORγt/GATA-3比值亦較對(duì)照組顯著增高，提示Th1、Th17細(xì)胞極化與CD密切相關(guān)，與既往國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道的Th1、Th17細(xì)胞在CD發(fā)病中起重要作用的觀點(diǎn)相符[11-13]。理論上，腸組織中Th1、Th17細(xì)胞數(shù)量異常增多將促進(jìn)IFN-γ、TNF-α、IL-17A、IL-17F等促炎細(xì)胞因子分泌，激活NF-κB等炎癥信號(hào)通路，誘導(dǎo)或加重腸道炎癥反應(yīng)。值得注意的是，本研究并未發(fā)現(xiàn)代表Th17/Th1細(xì)胞比例的RORγt/T-bet比值在CD患者與對(duì)照者之間存在顯著差異，而Li等[14]的研究卻發(fā)現(xiàn)CD患者腸黏膜固有層CD4+T細(xì)胞中Th17細(xì)胞比例顯著增高，Th1細(xì)胞比例顯著降低，與本研究結(jié)果不符，可能與研究對(duì)象臨床病理特征不同以及T細(xì)胞亞群檢測(cè)方法的差異有關(guān)。

本研究進(jìn)一步分析了活動(dòng)期與緩解期CD間Th1、Th2、Th17細(xì)胞比例的差異，結(jié)果顯示活動(dòng)期CD腸組織中Th1、Th17細(xì)胞相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子表達(dá)和Th1/Th2、Th17/Th2比例均較緩解期進(jìn)一步增高。令人感興趣的是，與緩解期CD相比，活動(dòng)期CD代表Th17/Th1比例的RORγt/T-bet比值亦顯著增高，表明疾病活動(dòng)期時(shí)Th17細(xì)胞極化較Th1細(xì)胞更為明顯。既往國(guó)內(nèi)外較多研究[1-2,11-13,15]發(fā)現(xiàn)CD患者外周血或腸組織中的Th1、Th17細(xì)胞比例或數(shù)量與疾病活動(dòng)性呈正相關(guān)。然而亦有研究結(jié)果持不同觀點(diǎn)。加拿大一項(xiàng)研究[14]表明，CD患者腸黏膜固有層Th1細(xì)胞比例與內(nèi)鏡疾病活動(dòng)性評(píng)分Rutgeerts評(píng)分無(wú)相關(guān)性，以英夫利昔單抗誘導(dǎo)CD臨床緩解后，Th1細(xì)胞比例未見明顯改變。丹麥學(xué)者Dige等[5]報(bào)道，活動(dòng)期CD患者以阿達(dá)木單抗誘導(dǎo)臨床緩解后，外周血中IL-17A+IL-21+Th17細(xì)胞比例較活動(dòng)期增加2～3倍。Raza等[16]的研究結(jié)果則顯示CD患者外周血單核細(xì)胞分泌的IL-17A水平與疾病活動(dòng)性無(wú)關(guān)。一項(xiàng)隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照臨床試驗(yàn)甚至發(fā)現(xiàn)，人IL-17A單克隆抗體蘇金單抗(secukinumab)用于中重度活動(dòng)期CD患者的誘導(dǎo)緩解治療不僅無(wú)效，甚至可升高炎癥指標(biāo)血清C-反應(yīng)蛋白和糞乳鐵蛋白水平[4]。因此，Th1、Th17細(xì)胞極化與CD疾病活動(dòng)性的關(guān)系仍有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，本研究結(jié)果表明腸組織中Th1、Th2、Th17細(xì)胞失衡與浙江地區(qū)漢族人群CD發(fā)病和病情進(jìn)展密切相關(guān)，Th1、Th17細(xì)胞極化可能在其中起重要作用，活動(dòng)期CD 以Th17細(xì)胞極化為著。本研究采用腸息肉患者的正常腸組織作為對(duì)照，盡管目前尚無(wú)證據(jù)認(rèn)為腸息肉的發(fā)生、發(fā)展與CD4+T細(xì)胞亞群失衡有關(guān)，但此對(duì)照設(shè)置仍可能存在潛在偏倚。后續(xù)擬納入行結(jié)腸鏡檢查的健康體檢者作為對(duì)照以進(jìn)一步明確CD4+T細(xì)胞亞群失衡與CD發(fā)病的確切關(guān)系。

1 高楠，戴娟，張光波，等. 外周血 Th17細(xì)胞在炎癥性腸病活動(dòng)度評(píng)估中的臨床意義[J]. 胃腸病學(xué), 2015, 20 (12): 713-716.

2 劉雪平，王軼，趙治彬，等. 炎癥性腸病患者外周血Th17細(xì)胞的變化及其臨床意義[J]. 胃腸病學(xué), 2010, 15 (5): 284-287.

3 Monteleone I, Sarra M, Pallone F, et al.Th17-related cytokines in inflammatory bowel diseases: friends or foes?[J]. Curr Mol Med, 2012, 12 (5): 592-597.

4 Hueber W, Sands BE, Lewitzky S, et al; Secukinumab in Crohn’s Disease Study Group. Secukinumab, a human anti-IL-17A monoclonal antibody, for moderate to severe Crohn’s disease: unexpected results of a randomised, double-blind placebo-controlled trial[J]. Gut, 2012, 61 (12): 1693-1700.

5 Dige A, St?y S, Rasmussen TK, et al. Increased levels of circulating Th17 cells in quiescent versus active Crohn’s disease[J]. J Crohns Colitis, 2013, 7 (3): 248-255.

6 Globig AM, Hennecke N, Martin B, et al. Comprehensive intestinal T helper cell profiling reveals specific accumulation of IFN-γ+IL-17+coproducing CD4+ T cells in active inflammatory bowel disease[J]. Inflamm Bowel Dis, 2014, 20 (12): 2321-2329.

7 Zorzi F, Monteleone I, Sarra M, et al. Distinct profiles of effector cytokines mark the different phases of Crohn’s disease[J]. PLoS One, 2013, 8 (1): e54562.

8 中華醫(yī)學(xué)會(huì)消化病學(xué)分會(huì)炎癥性腸病學(xué)組. 炎癥性腸病診斷與治療的共識(shí)意見(2012年·廣州)[J]. 胃腸病學(xué), 2012, 17 (12): 763-781.

9 Strober W, Fuss IJ.Proinflammatory cytokines in the pathogenesis of inflammatory bowel diseases[J]. Gastro-enterology, 2011, 140 (6): 1756-1767.

10 關(guān)家喜，周宇. Th17細(xì)胞在炎癥性腸病發(fā)病機(jī)制作用的研究進(jìn)展[J]. 胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志, 2012, 21 (2): 114-117.

11 戴娟，張光波，高楠，等. 炎癥性腸病患者外周血輔助性T細(xì)胞1和輔助性T細(xì)胞17水平及其臨床意義[J]. 中華內(nèi)科雜志, 2013, 52 (5): 375-378.

12 Olsen T, Rismo R, Cui G, et al.TH1 and TH17 interactions in untreated inflamed mucosa of inflammatory bowel disease, and their potential to mediate the inflammation[J]. Cytokine, 2011, 56 (3): 633-640.

13 Chao K, Zhang S, Yao J, et al.Imbalances of CD4(+) T-cell subgroups in Crohn’s disease and their relationship with disease activity and prognosis[J]. J Gastroenterol Hepatol, 2014, 29 (10): 1808-1814.

14 Li J, Ueno A, Fort Gasia M, et al. Profiles of Lamina Propria T Helper Cell Subsets Discriminate Between Ulcerative Colitis and Crohn’s Disease[J]. Inflamm Bowel Dis, 2016, 22 (8): 1779-1792.

15 Iboshi Y, Nakamura K, Ihara E, et al.Multigene analysis unveils distinctive expression profiles of helper T-cell-related genes in the intestinal mucosa that discriminate between ulcerative colitis and Crohn’s disease[J]. Inflamm Bowel Dis, 2014, 20 (6): 967-977.

16 Raza A, Ahmed K, Navaneethan U, et al. The levels of IL-17 secreted by Lipopolysaccharide-stimulated Peripheral Blood Mononuclear Cells (PBMC) in Inflammatory Bowel Disease (IBD) patients significantly correlated with disease severity in Ulcerative colitis but not in Crohn’s disease[J]. Am J Gastroenterol, 2011, 2s: S486.

(2016-12-11收稿；2017-01-16修回)

Imbalance among Th1, Th2 and Th17 Cells and Crohn’s Disease

XIAShenglong1,XUEZhanxiong1,CAIZhenzhai1,XIAXuanping1,TANGYibing2,JIANGYi1.

1DepartmentofGastroenterology,2DepartmentofPathology,theSecondAffiliatedHospitalofWenzhouMedicalUniversity,Wenzhou,ZhejiangProvince(325000)

Correspondence to: JIANG Yi, Email: wzjiangyi@yeah.net

Background: Dysregulated immune response is crucial for the pathogenesis of inflammatory bowel disease. Recent studies suggested that imbalance among Th1, Th2 and Th17 cells was closely related to the aberrant intestinal immune response. Aims: To investigate the association of imbalance among Th1, Th2 and Th17 cells and Crohn’s disease (CD). Methods: Thirty-six CD patients admitted from Jan. 2013 to Dec. 2014 at the Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University were enrolled; 40 patients undergoing intestinal polypectomy were collected as controls. Inflamed and normal mucosal tissues were obtained from CD patients and the controls, respectively; expressions of Th1, Th2 and Th17 cells related transcriptional factors (T-bet, GATA-3 and RORγt) and cytokines (IFN-γ, IL-4 and IL-17A) were determined by real-time PCR and immunohistochemistry. Results: In comparison with the controls, mRNA expression of T-bet and RORγt, mRNA and protein expressions of IFN-γ and IL-17A, as well as the ratios for T-bet/GATA-3 and RORγt/GATA-3, which represented balance of Th1/Th2 and Th17/Th2, respectively, were all significantly increased in inflamed mucosal tissue in CD patients (P<0.05). Expression of each of the three transcriptional factors was positively correlated with its corresponding cytokine (P<0.05). IFN-γ+and IL-17A+cells mainly located in the intestinal epithelial layer and lamina propria with cytoplasmic immunoreactivities in CD patients. In the stratified analysis, all the above-mentioned parameters were significantly higher in active CD than in inactive CD (P<0.05); furthermore, the ratio for RORγt/T-bet, which represented balance of Th17/Th1, was also increased significantly in active CD (P<0.05). Conclusions: Imbalance among Th1, Th2 and Th17 cells in intestinal mucosal tissue was closely related with CD. Polarization of Th1 and Th17 cells are involved in this process, and Th17 polarization is predominant in active disease.

Crohn Disease; Th1 Cells; Th2 Cells; Th17 Cells

10.3969/j.issn.1008-7125.2017.06.003

浙江省自然科學(xué)基金(LY14H030012，LY15H030018，LY16H160055，LY17H030011)；浙江省衛(wèi)生科技計(jì)劃資助項(xiàng)目(2012KYA132)；溫州市科技局資助項(xiàng)目(Y20160102)

#Email: 526315332@qq.com

&本文通信作者，Email: wzjiangyi@yeah.net