趙宏博，沈 宇，方洪壯

(1.佳木斯大學(xué)康復(fù)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154003；2佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

GC-MS法分析紅皮云杉針葉揮發(fā)油成分①

趙宏博1，沈 宇2，方洪壯2

(1.佳木斯大學(xué)康復(fù)醫(yī)學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154003；2佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：初步分析出紅皮云杉針葉揮發(fā)油中的化學(xué)成分。方法：以水蒸氣蒸餾法提取紅皮云杉針葉揮發(fā)油，用GC-MS技術(shù)，采用自動(dòng)解卷積定性系統(tǒng)(AutomatedMassSpectralDeconvolutionandIndentificationSystem,AMDIS)結(jié)合色譜保留指數(shù)進(jìn)行定性分析。結(jié)果：在紅皮云杉針葉揮發(fā)油中共得到74個(gè)色譜峰，最終確定了58種化學(xué)成分，峰面積總和占總含量的92.58%，其中含量最高的物質(zhì)為乙酸龍腦酯。結(jié)論：用GC-MS方法，結(jié)合AMDIS和色譜保留指數(shù)能夠高效快捷的分析重疊峰體系，使定性更加準(zhǔn)確。

紅皮云杉；GC-MS；水蒸氣蒸餾法；AMDIS；色譜保留指數(shù)

紅皮云杉(PiceakoraiensisNakai)為松科云杉屬植物，又名虎尾松，高麗云杉，其耐蔭，喜冷濕環(huán)境，抗病力強(qiáng)，主要分布在我國(guó)小興安嶺、長(zhǎng)白山林區(qū)一帶。現(xiàn)已被證實(shí)松針揮發(fā)油具有重要的藥用價(jià)值，能夠發(fā)揮鎮(zhèn)痛、抗炎、抗菌、鎮(zhèn)咳、化痰、降血脂和降血壓等作用，同時(shí)也是香料、化妝品、食品及化學(xué)工業(yè)上的重要原料[1～6]。國(guó)內(nèi)有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，紅皮云杉揮發(fā)油中的化學(xué)成分在數(shù)量和含量上與其他幾種松科植物存在一定差異[7]，尚未有人將自動(dòng)質(zhì)譜解卷積定性系統(tǒng)(AMDIS)結(jié)合色譜保留指數(shù)對(duì)其揮發(fā)油樣本總離子流圖的重疊色譜峰進(jìn)行解析，更加準(zhǔn)確的對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行定性分析。本研究首次采用GC-MS技術(shù)對(duì)黑龍江省蘿北產(chǎn)紅皮云杉針葉揮發(fā)油樣品進(jìn)行測(cè)定，對(duì)比質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫，應(yīng)用自動(dòng)質(zhì)譜解卷積系統(tǒng)并結(jié)合色譜保留指數(shù)，對(duì)紅皮云杉針葉揮發(fā)油成分進(jìn)行解析，為紅皮云杉的開發(fā)和利用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 儀器和材料

HP7890A-5975型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)安捷倫科技有限公司)；標(biāo)準(zhǔn)玻璃揮發(fā)油提取器(上海滿賢經(jīng)貿(mào)有限公司)。正己烷(天津市大茂化學(xué)試劑廠，分析純)；無水硫酸鈉(上海綠源精細(xì)化工廠，色譜純)；正構(gòu)烷烴混合對(duì)照品C8～C40(美國(guó)AccuStandard公司，編號(hào)：DRH-008S-R2)。紅皮云杉新鮮針葉于2015年8月采于黑龍江省蘿北市，經(jīng)形態(tài)和顯微鑒定為松科、云杉屬植物紅皮云杉(PiceakoraiensisNakai)的針葉。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 供試品溶液制備

取陰干粉碎后的紅皮云杉針葉約50g，置1000mL圓底燒瓶中，加入10倍量的蒸餾水及少許沸石，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，加熱回流6h，分離油層，加適量無水硫酸鈉進(jìn)行脫水，得淡黃色揮發(fā)油，即得。

2.2GC-MS條件

色譜柱為HP-5MS(30m×0.25mm×0.25μm)石英毛細(xì)管柱，進(jìn)樣口溫度280℃，初始柱溫50 ℃，以3 ℃·min-1升至140℃，保持10min，以15℃·min-1升至215℃，以5℃·min-1升至260 ℃，保持2min。載氣為高純氦氣，分流比為40:1，進(jìn)樣量1μL。EI溫度：230℃，接口溫度280℃，四級(jí)桿溫度150℃，掃描范圍30～500aum，溶劑延遲時(shí)間為：3.75min。

2.3 化學(xué)成分分析

取紅皮云杉針葉揮發(fā)油樣品，按照上述實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)樣，獲得樣品的總離子流圖，利用AMDIS解析其中的重疊色譜峰并提取出每個(gè)成分的“純凈”質(zhì)譜圖和相關(guān)色譜信息，并將這些信息與目標(biāo)物譜庫中化合物進(jìn)行比較，利用質(zhì)譜工作站通過NIST08質(zhì)譜庫結(jié)合色譜保留指數(shù)對(duì)各個(gè)色譜峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)確定。采用峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，計(jì)算紅皮云杉針葉揮發(fā)油中各揮發(fā)性成分的相對(duì)百分含量。

3 結(jié)果與討論

3.1 結(jié)果

在設(shè)定條件下對(duì)紅皮云杉針葉揮發(fā)油進(jìn)行測(cè)定，獲得紅皮云杉針葉揮發(fā)油總離子流圖見圖1。通過GC-MS色譜工作站積分，采用AMDIS結(jié)合保留指數(shù)的方法，從供試品樣品中，共得到74個(gè)色譜峰，峰面積百分含量大于0.1的有69個(gè)化合物，占總含量的99.40%，最終確定了58個(gè)化合物見表1。其中，乙酸龍腦酯、龍腦、樟腦等成分的含量較高，分別占26.67%、11.68%和11.10%。所鑒定的化合物中，有40個(gè)化合物是采用質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)確定；有18個(gè)化合物經(jīng)過AMDIS解析并結(jié)合保留指數(shù)輔助定性確定。

表1 紅皮云杉針葉揮發(fā)油化學(xué)成分

＊利用保留指數(shù)解析成分；#利用AMDIS辨別重疊峰。

圖1 紅皮云杉針葉揮發(fā)油的總離子流圖

3.2 討論

AMDIS軟件能夠高效、快捷的分析重疊峰體系，提取“純凈”的質(zhì)譜圖，降低了質(zhì)譜庫檢索的不確定性。同時(shí)結(jié)合保留指數(shù)，對(duì)揮發(fā)油中同分異構(gòu)體的區(qū)分將更加方便、準(zhǔn)確。本研究共確定了供試品中58個(gè)化合物，應(yīng)用AMDIS解析出6個(gè)化合物；應(yīng)用保留指數(shù)解析出12個(gè)化合物。實(shí)踐表明GC-

MS結(jié)合自動(dòng)質(zhì)譜解卷積定性系統(tǒng)和保留指數(shù)輔助定性方法可以提高對(duì)重疊色譜峰的辨別和鑒定能力，準(zhǔn)確的分析出黑龍江蘿北產(chǎn)紅皮云杉針葉揮發(fā)油樣品中的化合物，促進(jìn)了紅皮云杉的開發(fā)與利用。

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佳木斯大學(xué)科學(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目，編號(hào)：S2014-011。

趙宏博(1986～)男，黑龍江佳木斯人，碩士，主管藥師。

沈宇(1986～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，講師。E-mail:shenyu0406@126.com。

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1008-0104(2017)03-0089-03

2016-12-18)