盧亭，夏慧麗，張今君

（臺州市食品藥品檢驗(yàn)研究院，浙江臺州318000）

液相-原子熒光法測定水產(chǎn)品中無機(jī)砷方法的研究

盧亭，夏慧麗，張今君

（臺州市食品藥品檢驗(yàn)研究院，浙江臺州318000）

以液相色譜-原子熒光聯(lián)用技術(shù)為檢測手段，在現(xiàn)有國標(biāo)檢測方法的基礎(chǔ)上，研究一套檢測動物性水產(chǎn)品中無機(jī)砷含量的樣品前處理方法。該方法以超聲提取為主要手段，被測樣品經(jīng)均質(zhì)后，在60℃下超聲提取60 min，檢測結(jié)果與國標(biāo)法測定結(jié)果之前的相對誤差為3.2%，，方法檢出限為0.01 mg/kg，0～50 μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好，回收率為89.6%～93.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.07%～5.57%，準(zhǔn)確度、精密度均滿足方法學(xué)要求。該法具有操作便捷、干擾少、準(zhǔn)確度好等優(yōu)點(diǎn)，適用于批量水產(chǎn)品種無機(jī)砷的測定。

動物性水產(chǎn)品；無機(jī)砷；超聲提取；液相色譜-原子熒光法

由于工業(yè)和農(nóng)業(yè)的快速發(fā)展，使得河、湖、海水被嚴(yán)重污染，使水產(chǎn)品成為含砷量較高的食物[1]。砷在自然界中以亞砷酸鹽、砷酸鹽、單甲基胂酸、二甲基胂酸、砷甜菜堿、砷膽堿等多種化合物形式存在[2-3]。砷及其化合物已被國際癌癥組織確認(rèn)為致癌物[4]，水產(chǎn)品中的砷以無機(jī)砷和有機(jī)砷兩種形態(tài)存在，無機(jī)砷毒性遠(yuǎn)大于有機(jī)砷[5-7]，我國2012版食品中污染物限量國家標(biāo)準(zhǔn)[8]中規(guī)定了水產(chǎn)品中無機(jī)砷限量，取消了總砷的要求。因此測定無機(jī)砷更具有衛(wèi)生學(xué)意義，符合食品安全需要。

目前食品中無機(jī)砷檢測方法有液相色譜-原子熒光光譜法，液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜法等[9]，由于液相色譜-電感耦合等離子質(zhì)譜法儀器價(jià)格昂貴，普及率低，一般實(shí)驗(yàn)室常用液相色譜-原子熒光光譜法檢測水產(chǎn)品中無機(jī)砷。國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.11-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無機(jī)砷的測定》[10]對動物性水產(chǎn)品中無機(jī)砷的提取采用酸浸泡過夜后90℃恒溫箱中熱浸提2.5 h，該法費(fèi)時(shí)耗能，振搖過程受人為因素影響大，而且存在三價(jià)砷五價(jià)砷轉(zhuǎn)化的問題，而樣品前處理過程中保證待測組分形態(tài)的穩(wěn)定和提取完全是檢測結(jié)果準(zhǔn)確的重要因素之一。本試驗(yàn)利用超聲和溫度對試樣前處理過程進(jìn)行改進(jìn)，建立一種快速、方便、準(zhǔn)確適用于動物性水產(chǎn)品中無機(jī)砷檢測的方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蝦干 市售；1 000 ug/mLAs3+，1 000 ug/mLAs5+美國o2si公司；硝酸（優(yōu)級純）國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；氫氧化鈉-硼氫化鉀混合溶液（20 g/L）（現(xiàn)用現(xiàn)配）；正己烷（色譜純）Honeywell；磷酸二氫銨（分析純）江蘇強(qiáng)盛功能化學(xué)股份有限公司；試驗(yàn)用水：臺州市食品藥品檢驗(yàn)研究院實(shí)驗(yàn)室自制超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

SAP-20、AFS-9330型液相-雙道原子熒光光度計(jì)（配有砷空心陰極燈）：北京吉天儀器有限公司；2150TH 超聲波清洗器（6 L，40 Hz，溫度：室溫-80℃）、數(shù)顯型旋渦混合器（talboys）：上海安譜科學(xué)儀器有限公司；Allegra x-30R離心機(jī)：貝克曼摩爾特有限公司。

1.3 方法

1.3.1 原理

動物性水產(chǎn)品中無機(jī)砷經(jīng)稀硝酸超聲提取后，以液相色譜進(jìn)行分離，分離后的目標(biāo)化合物在酸性環(huán)境下與KBH4反應(yīng)，生成氣態(tài)砷化合物，以原子熒光光譜儀進(jìn)行測定。按保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

1.3.2 樣品前處理

準(zhǔn)確稱取經(jīng)粉碎過80目篩的樣品1.0 g于50 mL離心管中，加0.15 mol/L的硝酸20.0 mL旋渦混勻后置于超聲波清洗器中提取，以8 000 r/min離心15 min后取上清液5 mL于10 mL離心管中，加入5 mL正己烷，振搖1 min后，8 000 r/min離心15 min，棄去上層正己烷。按此過程重復(fù)一次，吸取下層清液，經(jīng)0.45 μm水相濾膜過濾及C18小柱凈化后進(jìn)樣，同時(shí)做試劑空白試驗(yàn)。

1.3.3 儀器參數(shù)條件

色譜柱：陰離子交換色譜柱（HAMILTONPRP-X100 10μm 250 mm×4.1 mm）。梯度洗脫：流動相 A：1 mmol/L磷酸氫二銨溶液（pH6.0）；流動相B：20 mmol/L磷酸氫二銨溶液（pH6.0）。流動相、光譜等參數(shù)條件同國家標(biāo)準(zhǔn)GB 5009.11-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中總砷及無機(jī)砷的測定》[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 超聲時(shí)間、溫度的確定

選擇超聲溫度 40、60、80℃在 15 min～120 min進(jìn)行超聲提取交叉試驗(yàn)，具體見表1。

表1 超聲溫度、時(shí)間對無機(jī)砷提取的影響Table 1 Effects of ultrasonic temperature and time on the extraction of arsenic

由表1可以看出，在超聲時(shí)間60 min前，無機(jī)砷的提取受溫度影響比較大，在一定范圍內(nèi)溫度高提取率高；在120 min后無機(jī)砷的提取均趨于穩(wěn)定。超聲溫度為40℃時(shí)，從90 min后無機(jī)砷含量趨于穩(wěn)定，超聲溫度為60、80℃時(shí)，從60 min后無機(jī)砷含量趨于穩(wěn)定。根據(jù)表1綜合考慮方法的節(jié)能省時(shí)，優(yōu)選60℃，60 min為本試驗(yàn)超聲提取的溫度和時(shí)間。

2.2 線性方程和檢出限

配制系列無機(jī)砷標(biāo)準(zhǔn)溶液，在0～50 μg/L范圍內(nèi)，考察其線性試驗(yàn)結(jié)果。結(jié)果表明，在0～50 μg/L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=28 154x-3 857，相關(guān)系數(shù)R2為0.999 1，線性關(guān)系良好。方法檢出限為0.01 mg/kg完全可以滿足動物性水產(chǎn)品中無機(jī)砷的分析要求[8]。

按本試驗(yàn)法，在最佳試驗(yàn)測定條件下，精密稱取同一蝦干樣品12份，對無機(jī)砷含量進(jìn)行低、中、高樣品加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Comparison of experimental results

結(jié)果表明，加標(biāo)回收率在89.6%～93.2%之間，加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果滿意，符合理化檢驗(yàn)方法回收率要求[11]，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=3）為 1.07%～5.57%，符合理化檢驗(yàn)方法精密度要求[11]，表明該方法適合動物性水產(chǎn)品中無機(jī)砷含量的檢測。

2.3 對比試驗(yàn)

本試驗(yàn)法和國標(biāo)法分別對同一動物性水產(chǎn)品中無機(jī)砷含量進(jìn)行6次平行測定，測定結(jié)果見表3。

由表3可知，本試驗(yàn)法與國標(biāo)法測得的數(shù)值相對誤差為3.2%遠(yuǎn)小于10%，符合理化方法準(zhǔn)確度要求[11]。

表3 對比試驗(yàn)結(jié)果Table 3 The results of recovery tests

3 結(jié)論

將超聲波提取技術(shù)用于動物性水產(chǎn)品無機(jī)砷的前處理，本試驗(yàn)研究結(jié)果表明在60℃超聲波提取60 min的測定結(jié)果與國標(biāo)法（浸泡過夜，90℃振搖2.5 h）的測定結(jié)果無明顯差異。本方法在0～50 μg/L范圍線性良好，方法檢出限為0.01 mg/kg，精密度和準(zhǔn)確度較好，符合方法學(xué)要求，適合實(shí)際樣品的分析。本試驗(yàn)法自動化程度較高，受人為環(huán)境因素影響少，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，同時(shí)具備操作簡便、快速和耗能低等優(yōu)點(diǎn)，值得大范圍推廣應(yīng)用。

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[11]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局,中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會.GB/T 27404-2008,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食品理化檢測[S].北京:中國標(biāo)準(zhǔn)出版社,2008

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Study on Liquid Phase-atomic Fluorescence Spectrometry Method for Determination of Inorganic Arsenic in Aquatic Products

LU Ting，XIA Hui-li，ZHANG Jin-jun
（Taizhou Institute for Food and Drug Control，Taizhou 318000，Zhejiang，China）

A sample pretreatment method to detect inorganic arsenic in aquatic products of animal origin is developed.In this method，the objective is obtained by using extracted ultrasonically at 60℃ for 60 min.The experimental results show that the relativeerror is less than 3.2%against the national standard method.The limits of detection were 0.01 mg/kg，and the recoveries of standard addition were 89.6%-93.2%，respectively.The relative standard deviations（RSD）of this precision were 1.07%-5.57%.The established method has stable recoveries，high sensitivity，specificity，low interference and time-saving，which can be meet the determination requirements of mass aquatic products.

aquatic products of animal origin；inorganic arsenic；ultrasound extraction；liquid phase-atomic fluorescence spectrometry

2016-12-26

盧亭（1983—），女（漢），工程師，本科，研究方向：食品安全與檢測分析。

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.13.038