索南才仁

摘要：在種蛋大頭開(kāi)1.5 cm × 1.0 cm橢圓形口的情況下，就翻蛋和碼蛋方式對(duì)X期雞胚體外發(fā)育的影響進(jìn)行了研究。從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看，①9日齡的存活率兩組分別達(dá)73%和80%，表明0日齡種蛋在大頭開(kāi)孔后，0～8日齡小頭向上翻蛋進(jìn)行孵化是較為合適的。8日齡時(shí)碼蛋方式的轉(zhuǎn)變，即小頭向上轉(zhuǎn)變?yōu)榇箢^向上，使雞胚出現(xiàn)快速死亡，12日齡時(shí)兩組雞胚全部死亡。②對(duì)比6～9日齡的存活率，大頭向上碼蛋組從6日齡到9日齡存活率下降了7%，而橫放碼蛋組的存活率沒(méi)有下降，因此，在8日齡碼蛋方式發(fā)生改變后，兩組存活率的下降并不明顯（P>0.05），但至12日齡時(shí)兩組雞胚均全部死亡。試驗(yàn)結(jié)果表明，8日齡時(shí)，碼蛋方式由小頭向上轉(zhuǎn)變?yōu)榇箢^向上或橫放會(huì)加快雞胚的死亡，尤其是轉(zhuǎn)變?yōu)榇箢^向上。

關(guān)鍵詞：翻蛋次數(shù)；置蛋方式；孵化率

中圖分類(lèi)號(hào)：S831 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2017）05-0010-02

禽類(lèi)胚胎是發(fā)育生物學(xué)研究的良好實(shí)驗(yàn)材料，利用體外培養(yǎng)技術(shù)可以滿(mǎn)足對(duì)各個(gè)發(fā)育階段的胚胎進(jìn)行操作的需要，而且便于觀察。然而雞胚體外培養(yǎng)的孵化率并不高，特別是剛產(chǎn)下的X期的胚胎。郝志明等[1]采用抽蛋清的方法對(duì)X期雞胚體外培養(yǎng)的影響因素進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)抽取1 mL蛋清后，3日齡雞胚的孵化率達(dá)到81.3%，而X期雞胚的孵化率僅為31.3%。為了進(jìn)一步探究造成X期雞胚體外培養(yǎng)孵化率下降的主要原因，本試驗(yàn)就翻蛋和碼蛋方式對(duì)X期雞胚體外培養(yǎng)的影響進(jìn)行了研究，以期提高X期雞胚體外培養(yǎng)的孵化率，促進(jìn)雞胚生物工程技術(shù)的發(fā)展。

1 試驗(yàn)方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)一：在雞蛋大頭頂端開(kāi)1.5 cm×1.0 cm橢圓形口的情況下，翻蛋和碼蛋方式按下述方法進(jìn)行： 0～8日齡小頭向上翻蛋，8～12日齡大頭向上不翻蛋，12日齡以后大頭向上翻蛋（一組）或大頭向上不翻蛋（二組），以研究12日齡后翻蛋對(duì)X期雞胚體外發(fā)育的影響。

試驗(yàn)二：在雞蛋大頭頂端開(kāi)1.5 cm×1.0 cm橢圓形口的情況下，翻蛋和碼蛋方式按下述方法進(jìn)行：0～8日齡小頭向上翻蛋，8～12日齡大頭向上（一組）或橫放（二組）不翻蛋，12日齡后大頭向上（一組）或橫放（二組）翻蛋，以研究8日齡后碼蛋方式對(duì)X期雞胚體外發(fā)育的影響。

1.2 方法

操作全過(guò)程在超凈工作臺(tái)上進(jìn)行。試驗(yàn)前，擦凈超凈工作臺(tái)，將所有器械和試劑置于超凈工作臺(tái)上，紫外線照射30 min以上進(jìn)行消毒。用塑料飲料瓶剪切封口蓋，封口蓋的大小較蛋殼開(kāi)口大2 mm，形狀同蛋殼開(kāi)口。剪好的封口蓋需置于盛有75%乙醇的平皿中浸泡30 min，并分散置于鋪有硫酸紙的超凈工作臺(tái)上，紫外線照射消毒并晾干。種蛋則用酒精棉球擦拭消毒，確保整個(gè)蛋殼表面均被擦拭并晾干。用鉛筆在種蛋的大頭畫(huà)1.5 cm×1.0 cm橢圓，然后用手術(shù)刀片沿所畫(huà)線的外沿在蛋殼上刻出劃痕，除去劃痕內(nèi)的蛋殼和蛋殼膜，切口應(yīng)盡量平滑，除去蛋殼膜時(shí)應(yīng)用鑷子小心向切口處夾取，不得破壞切口外的蛋殼膜。開(kāi)口種蛋用預(yù)制好的塑料封口蓋蓋好，再用封口膠粘合封閉，確保封閉嚴(yán)實(shí)，無(wú)外漏。封好后開(kāi)口向下放置20 min，檢查是否有漏出蛋清的現(xiàn)象，如有需進(jìn)行修補(bǔ)。

按照試驗(yàn)分組的設(shè)計(jì)方案，將開(kāi)過(guò)口的種蛋放置于孵化器托盤(pán)中。

孵化條件：孵化溫度為37.80 ℃，濕度為60%～65%。出雛溫度為37.00 ℃，濕度為70%～75%。翻蛋為自動(dòng)翻蛋，每2 h一次，翻蛋角度為±45°。孵化期間，每日早、晚觀察孵化器2次，并記錄孵化器溫度、濕度和翻蛋次數(shù)。孵化18 d時(shí)落盤(pán)，21 d時(shí)觀察出雛情況[2]。分別在孵化的第3、6、9、12、15和18天進(jìn)行照蛋，觀察胚胎的心臟、胎膜、血管、胚體等，以此來(lái)判斷雞胚的存活以及胚胎的發(fā)育情況。死亡雞胚及時(shí)打開(kāi)，觀察死胚的發(fā)育情況。試驗(yàn)數(shù)據(jù)用百分?jǐn)?shù)表示，并用t檢驗(yàn)對(duì)組間的差異進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果及分析

2.1 12日齡后翻蛋對(duì)X期胚胎體外發(fā)育的影響

本試驗(yàn)的目的是想確定12日齡后翻蛋對(duì)X期雞胚體外發(fā)育有無(wú)影響，但從表1來(lái)看，12日齡后雞胚已全部死亡，因此試驗(yàn)設(shè)計(jì)沒(méi)有達(dá)到預(yù)想的效果。但從9日齡的存活率來(lái)看，兩組的存活率分別達(dá)73%和80%，表明0日齡種蛋在大頭開(kāi)1.5 cm×1.0 cm橢圓形孔后，0～8日齡小頭向上翻蛋進(jìn)行孵化是較為合適的[3]。但8日齡碼蛋方式的轉(zhuǎn)變，即小頭向上轉(zhuǎn)變?yōu)榇箢^向上使雞胚出現(xiàn)快速死亡，至12日齡時(shí)，兩組雞胚均全部死亡。

2.2 8日齡后碼蛋方式對(duì)X期雞胚體外發(fā)育的影響

由表2可見(jiàn)，9日齡存活率方面，大頭向上碼蛋組和橫放碼蛋組的存活率分別為73%和93%，兩組之間具有明顯的差異（P<0.05），但從6～9日齡的存活率來(lái)看，大頭向上碼蛋組6～9日齡存活率下降了7個(gè)百分點(diǎn)，而橫放碼蛋組的存活率沒(méi)有下降，因此，在8日齡碼蛋方式發(fā)生改變后，兩組存活率的下降并不明顯（P>0.05）。但12日齡時(shí)雞胚仍全部死亡[4]。

3 雞胚死亡主要原因分析

研究結(jié)果表明，雞蛋開(kāi)口及抽取蛋清會(huì)對(duì)雞胚的體外發(fā)育產(chǎn)生重要的影響。從本試驗(yàn)結(jié)果可以看出，雞蛋開(kāi)孔對(duì)雞胚的發(fā)育有很大影響。通過(guò)對(duì)死亡雞胚的解剖發(fā)現(xiàn)，死亡雞胚常常出現(xiàn)胎膜與蛋殼膜的粘連、胎膜與蛋殼內(nèi)膜的分離以及雞胚發(fā)育遲緩。蛋殼開(kāi)孔后若翻蛋，可引起胎膜與蛋殼膜的粘連以及胎膜與蛋殼內(nèi)膜的分離，胎膜與蛋殼膜的粘連可破壞胎膜，引起出血和胚胎的死亡；而胎膜與蛋殼內(nèi)膜的分離則影響雞胚營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收，從而影響雞胚的正常生長(zhǎng)發(fā)育。若不進(jìn)行翻蛋，則會(huì)影響雞胚的運(yùn)動(dòng)、血液循環(huán)和生長(zhǎng)發(fā)育，甚至粘連，引起雞胚死亡。

4 結(jié)論

8日齡時(shí)，碼蛋方式由小頭向上轉(zhuǎn)變?yōu)榇箢^向上或橫放會(huì)加快雞胚的死亡，尤其轉(zhuǎn)變?yōu)榇箢^向上時(shí)雞胚更易死亡。

參考文獻(xiàn)：

[1] 郝志明，馬文芝，祁茂銅，等.空氣對(duì)X期雞胚原殼發(fā)育的影響[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，14（5）：45-48.

[2] 楊 寧.現(xiàn)代養(yǎng)雞生產(chǎn)[M].北京：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，1994.125-126.

[3] 郝志明，馬文芝，祁茂銅，等. 雞胚原殼體外培養(yǎng)研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，33（9）：28-31.

[4] ANDACHT T，HU W，IVARIE R. Rapid and improvement method for windowing eggs accessing the stage Ⅹ chicken embryo[J].Molecular Reproduction and Development，2004，69：31-34.