李鳳元+宋淑英

摘要：在遼寧選取3個(gè)使用不同廠(chǎng)家豬瘟疫苗的生豬養(yǎng)殖場(chǎng)，對(duì)受試場(chǎng)的豬瘟疫苗免疫效果進(jìn)行評(píng)估，比較疫苗免疫效果。結(jié)果表明，在遼寧地區(qū)使用的強(qiáng)制免疫疫苗和杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗，免疫效果較好，其抗體生成率較高，可在遼寧地區(qū)生豬飼養(yǎng)場(chǎng)推廣應(yīng)用，以確保遼寧地區(qū)豬瘟的綜合防控效果。

關(guān)鍵詞：豬瘟疫苗；免疫；效果；遼寧地區(qū)

中圖分類(lèi)號(hào)：S858.28；S851 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1007-273X（2017）05-0007-02

豬瘟（CSF）是由黃病毒科瘟病毒屬的豬瘟病毒（CSFV）引起的一種傳染病。該病具有傳染性強(qiáng)、高度接觸性、熱性等特點(diǎn)[1]。豬是豬瘟病毒的惟一天然宿主，該病毒能夠引起各年齡階段豬發(fā)病。由于具有較高的傳染性和致死性，該病被歸類(lèi)為一類(lèi)動(dòng)物疫病[2，3]。

由于我國(guó)對(duì)豬瘟實(shí)施了較長(zhǎng)時(shí)間的強(qiáng)制免疫，因此該病在我國(guó)的流行和發(fā)病特點(diǎn)均已出現(xiàn)了較大的變化。目前，該病的發(fā)病多為隱性感染，感染病豬多無(wú)明顯發(fā)病癥狀。亞臨床感染或隱性感染病豬多表現(xiàn)為非典型癥狀[4]，但隱性感染病豬可常期帶毒，并向周?chē)h(huán)境排出病毒。隱性感染的母豬可將攜帶的病毒垂直傳播給新生的仔豬，造成木乃伊胎、死胎或仔豬帶毒。當(dāng)機(jī)體在其他因素作用下出現(xiàn)抵抗能力降低時(shí)易造成豬瘟的大規(guī)模暴發(fā)[5]。給生豬養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。疫苗免疫仍是豬瘟防控的首選方案，但目前市場(chǎng)上的豬瘟疫苗品種繁多，各種疫苗免疫效果參差不齊，給豬瘟的防控帶來(lái)不確定因素[6]。本試驗(yàn)在遼寧選取了3個(gè)使用不同廠(chǎng)家豬瘟疫苗的生豬養(yǎng)殖場(chǎng)，對(duì)受試場(chǎng)的豬瘟疫苗免疫效果進(jìn)行評(píng)估，比較疫苗免疫效果，為遼寧地區(qū)豬瘟防控提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 受試豬場(chǎng) 分別在遼寧撫順、錦州、阜新地區(qū)選取3家規(guī)?；i飼養(yǎng)場(chǎng)，每場(chǎng)選取4窩16頭仔豬（公母各半）進(jìn)行豬瘟疫苗免疫效果比較試驗(yàn)。

1.1.2 受試疫苗 撫順豬場(chǎng)使用本省豬瘟強(qiáng)制免疫疫苗；錦州豬場(chǎng)使用杭州某疫苗公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗；阜新豬場(chǎng)使用北京某疫苗公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗。

1.1.3 主要材料 豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒購(gòu)于深圳康百德生物科技有限公司；無(wú)菌注射器、真空采血管、電熱恒溫培養(yǎng)箱（CDF-DX006）、恒溫?cái)?shù)顯水浴鍋（BC303）、多道可調(diào)微量移液器（Eppendorf）、單道可調(diào)微量移液器（Thermo fisher）等由遼寧省重大動(dòng)物疫病應(yīng)急中心提供。

1.2 方法

1.2.1 血液樣品采集 第1次采血：在仔豬23日齡（首免前2 d）時(shí)，對(duì)受試仔豬進(jìn)行前腔靜脈采血，用于測(cè)量母源抗體。第2次采血：在首免后30 d對(duì)各組受試仔豬進(jìn)行第2次采血。第3次采血：在加強(qiáng)免疫后30 d進(jìn)行第3次采血。

1.2.2 疫苗免疫 第1次免疫：在仔豬25日齡時(shí)，于頸側(cè)部注射豬瘟疫苗，注射劑量按照說(shuō)明書(shū)參考劑量進(jìn)行。第2次免疫：在首輪免疫后30 d，仔豬55日齡時(shí)，在頸部肌肉進(jìn)行豬瘟疫苗加強(qiáng)免疫。

1.2.3 豬瘟抗體ELISA檢測(cè)

（1）血清制備。將采集的血液按照常規(guī)血清制備方法室溫放置，當(dāng)析出血清后離心。血清應(yīng)清亮、無(wú)溶血。

（2）洗滌液制備。將濃縮的洗滌液于恒溫水浴鍋中使其保持在25 ℃，搖動(dòng)使沉淀的鹽溶解后用無(wú)菌去離子水進(jìn)行20倍稀釋?zhuān)♂尯蟮南礈煲河? ℃保存。

（3）樣品稀釋。在血清稀釋板中，按1∶40的體積比稀釋待檢血清。同時(shí)按照1∶40的體積比稀釋陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。

（4）加樣方法。取預(yù)包被的檢測(cè)板，將稀釋好的待檢血清100 μL加入檢測(cè)板孔中。陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照各加2個(gè)孔，每孔加入100 μL。輕輕振勻孔中的樣品，放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中溫育30 min。

甩掉孔中的溶液，用洗滌液洗板5次，每孔加入洗滌液200 μL，每次靜置3 min，在干凈的吸水紙上拍干。

每孔加入羊抗豬酶標(biāo)二抗100 μL，放置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中孵育30 min。洗滌5次并在吸水紙上拍干。

每孔先加底物液A 50 μL，再加底物液B 50 μL，混勻后室溫避光顯色10 min。

每孔加入終止液50 μL，并在10 min內(nèi)進(jìn)行結(jié)果測(cè)定。

（5）結(jié)果判定。在酶標(biāo)儀中測(cè)量各孔OD630 nm。試驗(yàn)成立條件為陽(yáng)性對(duì)照孔平均OD630 nm≥1.0，陰性對(duì)照孔平均OD630 nm<0.30。樣品OD630 nm>0.35為陽(yáng)性，否則為陰性。

2 結(jié)果與分析

經(jīng)豬瘟ELISA抗體檢測(cè)試劑盒檢測(cè)，3不同生產(chǎn)廠(chǎng)家生產(chǎn)的豬瘟疫苗免疫后抗體生成率具體情況見(jiàn)表1。由表1可知，受試養(yǎng)殖場(chǎng)豬瘟母源抗體水平均較低，其中阜新場(chǎng)母源抗體水平最低，為0；撫順受試場(chǎng)較高，為6.25%；錦州受試場(chǎng)母源抗體水平最高，為18.75%；首免后，撫順受試場(chǎng)強(qiáng)制免疫疫苗抗體生成水平最高，檢測(cè)抗體陽(yáng)性率為100%；北京某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（阜新受試場(chǎng)）抗體檢測(cè)陽(yáng)性率次之，為87.50%；杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（錦州受試場(chǎng)）抗體檢測(cè)陽(yáng)性率最低，為81.25%。加強(qiáng)免疫后，杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（錦州受試場(chǎng)）抗體檢測(cè)陽(yáng)性率最高，為100%；強(qiáng)制免疫疫苗（撫順受試場(chǎng)）的抗體生成水平次之，檢測(cè)抗體陽(yáng)性率為93.75%；北京某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗（阜新受試場(chǎng)）抗體檢測(cè)陽(yáng)性率最低，為75.00%。

綜合分析表1的3種疫苗抗體檢測(cè)結(jié)果，遼寧地區(qū)使用的豬瘟強(qiáng)制免疫疫苗和杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗在此次試驗(yàn)中豬瘟抗體陽(yáng)性率相對(duì)較好。強(qiáng)制免疫疫苗在首免后，疫苗保護(hù)率可達(dá)100%，加強(qiáng)免疫后抗體保護(hù)率可達(dá)93.75%；杭州某公司生產(chǎn)的疫苗可在加強(qiáng)免疫后達(dá)到100%的抗體保護(hù)率，且首免后抗體保護(hù)率也相對(duì)較高，達(dá)到81.25%。因此這兩種疫苗抗體水平和保護(hù)率較為理想。

3 討論

豬瘟為OIE規(guī)定的A類(lèi)傳染病，是國(guó)際貿(mào)易中重要的檢查傳染病。該病最早在1833于美國(guó)發(fā)現(xiàn)，初稱(chēng)為豬霍亂[7]。最初許多歐洲國(guó)家如荷蘭、比利時(shí)、意大利等已宣布消滅該病，但有報(bào)道指出上述國(guó)家又相繼暴發(fā)豬瘟。在我國(guó)，豬瘟流行特點(diǎn)變化較大，主要以隱性感染和慢性感染為主，易造成母豬帶毒，使仔豬先天性感染，對(duì)豬群健康造成潛在風(fēng)險(xiǎn)，是影響生豬養(yǎng)殖業(yè)的主要疫病之一，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失[8-10]。

目前，豬瘟的防控主要是以疫苗免疫為主。但目前市售豬瘟疫苗種類(lèi)眾多，免疫效果也不盡相同。因此選擇免疫效果好、抗體保護(hù)率高的疫苗，對(duì)豬瘟進(jìn)行有效地綜合防控具有較為實(shí)際的應(yīng)用意義。本試驗(yàn)對(duì)遼寧地區(qū)使用較多的3種豬瘟疫苗的免疫效果進(jìn)行了評(píng)估，結(jié)果表明，在遼寧地區(qū)使用的強(qiáng)制免疫疫苗和杭州某公司生產(chǎn)的豬瘟疫苗其免疫效果較好，抗體生成率較高，可在遼寧地區(qū)生豬飼養(yǎng)場(chǎng)推廣應(yīng)用，以確保遼寧地區(qū)豬瘟的綜合防控效果。

參考文獻(xiàn)：

[1] 劉 建，湯德元，李春燕，等.我國(guó)豬瘟流行新趨勢(shì)與防控措施[J].豬病防控，2013（2）：37-39.

[2] 趙 耘，寧宜寶.豬瘟疫苗研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2004，25（1）：39-42.

[3] 何志強(qiáng)，何雪紅，王 鑫，等.影響豬瘟免疫效果的因素及防治措施[J].畜牧與飼料科學(xué)，2010，31（1）：188-189.

[4] 欒培賢，肖建華，趙 靚，等.豬瘟國(guó)內(nèi)外流行情況概述[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，44（9）：155-160.

[5] 李 娜，孫 元，仇華吉.豬瘟DNA疫苗研究進(jìn)展[J].生物工程學(xué)報(bào)，2010，26（3）：281-289.

[6] 王娟萍，姚敬明，吳 忻，等.規(guī)模化種豬場(chǎng)豬瘟免疫情況調(diào)研[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，39（1）： 184-187.

[7] 姚文生，范學(xué)政，王 琴，等.我國(guó)豬瘟流行現(xiàn)狀與防控措施建議[J].中國(guó)獸藥雜志，2011，45（9）：44-47.

[8] 王春花，孫 元，仇華吉.新型豬瘟疫苗研究進(jìn)展[J].生物工程學(xué)報(bào)，2013，29（7）：880-890.

[9] 王 琴.豬瘟流行現(xiàn)狀及中國(guó)豬瘟凈化策略[J].豬病防控，2012（10）：45-47.

[10] 修金生，吳順意，周倫江，等.不同規(guī)模豬場(chǎng)種豬豬瘟抗體檢測(cè)與豬瘟凈化[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，25（2）：235-238.