楊森，楊拯，鄢靖欣，徐洲，徐文堅(jiān)，田海燕，代小琳，楊平

血清二胺氧化酶含量與大鼠急性脊髓損傷后腸道運(yùn)動(dòng)功能的關(guān)系①

楊森，楊拯，鄢靖欣，徐洲，徐文堅(jiān)，田海燕，代小琳，楊平

目的測定急性脊髓損傷大鼠血清中二胺氧化酶(DAO)的含量，同時(shí)觀察腸道運(yùn)動(dòng)功能的變化和腸黏膜屏障損傷的程度。方法45只Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為打擊組(A組)、假手術(shù)組(B組)和對照組(C組)，每組15只。采取改良Allen打擊法(10 g×25 mm)損傷大鼠T10脊髓節(jié)段。術(shù)后1 d、3 d、7 d分別對各組大鼠進(jìn)行后肢功能BBB評分，測定大鼠回腸肌電慢波及平滑肌收縮，并做回腸HE染色，ELISA試劑盒測定血清DAO含量。結(jié)果脊髓損傷后1 d、3 d和7 d，A組BBB評分顯著低于C組(P＜0.001)，B組與C組無顯著性差異(P＞0.05)。脊髓損傷后1 d、3 d，A組慢波頻率和振幅低于C組(P＜0.05)，收縮頻率和振幅低于C組(P＜0.05)，B組與C組無顯著性差異(P＞0.05)；脊髓損傷后7 d，三組肌電慢波頻率和振幅、收縮的頻率和振幅均無顯著性差異(P＞0.05)。A組回腸黏膜水腫、倒伏，炎性細(xì)胞浸潤，黏膜下間隙增大。A組腸黏膜損傷Chiu評分高于B組和C組(P＜0.05)。脊髓損傷后1 d、3 d，A組大鼠血清DAO含量高于C組(P＜0.05)，B組與C組無顯著性差異(P＞0.05)；脊髓損傷后7 d，三組間血清DAO含量均無顯著性差異(P＞0.05)。結(jié)論血清DAO含量可以反映大鼠急性脊髓損傷后腸道的運(yùn)動(dòng)功能和黏膜損傷程度。

脊髓損傷；二胺氧化酶；腸道運(yùn)動(dòng)功能；黏膜損傷；大鼠

[本文著錄格式]楊森，楊拯，鄢靖欣，等.血清二胺氧化酶含量與大鼠急性脊髓損傷后腸道運(yùn)動(dòng)功能的關(guān)系[J].中國康復(fù)理論與實(shí)踐,2017,23(6):634-640.

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臨床上，脊髓損傷(spinal cord injury)后患者常出現(xiàn)胃腸功能障礙、大小便失禁、運(yùn)動(dòng)和感覺功能障礙、性功能障礙[1-3]。神經(jīng)源性腸道功能障礙遠(yuǎn)比神經(jīng)源性膀胱障礙和性功能障礙對患者身心健康和生活質(zhì)量的影響嚴(yán)重，也是致殘的常見原因之一[4-5]。脊髓損傷后動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，脊髓損傷后早期小鼠的腸道電活動(dòng)減弱，收縮力降低，腸黏膜的損傷呈漸進(jìn)性加重[6]。在臨床上，患者脊髓損傷后腸道的損傷程度和運(yùn)動(dòng)情況如何，一直缺乏相對特異性的血清學(xué)分子檢測指標(biāo)。

二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)在小腸絨毛上皮細(xì)胞中含量豐富，主要作用為降解腸道中的組胺樣物質(zhì)和組胺，避免組胺引起的過敏樣癥狀發(fā)生；外周血液中的DAO在肝臟被滅活[7]。文獻(xiàn)報(bào)道，腸缺血、炎癥、上皮受損都將導(dǎo)致血漿中DAO含量上升[8]。若小腸黏膜損傷嚴(yán)重，大量的DAO進(jìn)入到外周血循環(huán)中[9]。DAO通過降解多胺，調(diào)節(jié)細(xì)胞有絲分裂和減數(shù)分裂，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖[10-11]。血漿中DAO含量與急性腸系膜缺血和炎癥性腸病造成的上皮損傷程度呈正相關(guān)，而且還可用于胃腸道其他疾病的評估。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究表明，DAO可以是一些抗癌藥對腸黏膜損傷程度的血清分子標(biāo)志物[12-14]。本實(shí)驗(yàn)中，我們探究血清中的DAO含量是否能成為監(jiān)測大鼠急性脊髓損傷后神經(jīng)源性腸道功能障礙的指標(biāo)，為臨床上患者脊髓損傷后，測定血清DAO含量，判斷腸道運(yùn)動(dòng)功能和黏膜損傷程度提供動(dòng)物實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

水合氯醛，批號20100920：成都市科龍化工試劑廠。氯化鈉注射液，批號140914906：武漢濱州雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司。葡萄糖注射液，批號1008296K：安徽雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司。注射用青霉素鈉，批號140403：太極集團(tuán)西南藥業(yè)股份有限公司。DAO試劑盒，批號201507：武漢基因美生物科技有限公司。HC-2518高速離心機(jī)：安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司。680酶標(biāo)儀、洗板機(jī)：BIO-RAD，USA。BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)：成都泰盟有限公司。EclipseE200光學(xué)顯微鏡：尼康儀器有限公司。KD-T電腦生物組織攤烤片機(jī)：浙江省金華市科迪儀器設(shè)備有限公司。TC-120型智能程控生物組織自動(dòng)脫水機(jī)：湖北孝感市泰維電子設(shè)備有限公司。RM2235切片機(jī)：LEICA公司。電子天平：賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司。HRDP-80AB電熱恒溫培養(yǎng)箱：青島海爾特種電冰箱有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康成年Sprague-Dawley大鼠45只，體質(zhì)量180～220 g，由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院四川省人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，許可證號SCXK(川)2013-15。用亞甲基藍(lán)和苦味酸將大鼠進(jìn)行標(biāo)記，亞甲基藍(lán)表示十位，苦味酸表示個(gè)位，從大鼠左前爪開始標(biāo)記，記為1，隨后依次將左側(cè)腹部、左后爪、頸部、腹部、尾部、右前爪、右側(cè)腹部、右后爪、分別記為2、3、4、5、6、7、8、9。得到大鼠1～45的編號，在隨機(jī)數(shù)字表中查詢數(shù)字，采用隨機(jī)數(shù)表法隨機(jī)將大鼠分為打擊組(A組)、假手術(shù)組(B組)和對照組(C組)，每組15只。

1.3 方法

手術(shù)前觀察大鼠運(yùn)動(dòng)功能正常后，3.5%水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉。仔細(xì)觀察大鼠麻醉后呼吸頻率、心跳節(jié)律、肌肉放松程度。大鼠完全麻醉后，俯臥位固定于鼠板上，去除背部胸椎部位的毛，碘伏消毒，鋪上無菌洞巾。確定T10位置，以T10棘突為中心在大鼠背部正中做一長約1～2 cm的切口，暴露棘突和椎板。用手術(shù)刀緊靠棘突兩邊切開背部肌肉，去除T10椎骨上的肌肉，注意勿損傷椎旁血管。用有齒鑷咬除T10棘突，無齒鑷剝開錐板剔除椎旁軟組織，暴露脊髓。用自制數(shù)字式脊髓損傷動(dòng)物模型制備儀打擊大鼠脊髓T10節(jié)段，打擊強(qiáng)度為10 g×25 mm。打擊后即見大鼠雙后肢和軀體發(fā)生不同程度抽搐，鼠尾痙攣性擺動(dòng)，隨后完全松弛，脊髓打擊部位血管明顯充血。模型制備成功。打擊完畢后逐層縫合切口，腹腔注射葡氯鈉2 ml(葡萄糖注射液和氯化鈉注射液1∶1)補(bǔ)液和青霉素鈉1 ml(8×104U)預(yù)防感染。待大鼠清醒后放回飼養(yǎng)籠中單籠飼養(yǎng)。術(shù)后3 d內(nèi)，每天早上定時(shí)腹腔注射葡氯鈉與青霉素鈉。飼養(yǎng)環(huán)境保持適宜的溫度和濕度，定時(shí)清潔籠具，并保持大鼠身體干燥；每天擠壓膀胱排尿3次，至大鼠恢復(fù)自主排尿。

A組施行以上的手術(shù)操作步驟，B組剝離椎板不打擊，C組不切皮和剝離椎板，也不注射青霉素和葡氯鈉。

1.4 評定方法

于造模術(shù)后1 d、3 d、7 d，隨機(jī)取各組動(dòng)物5只進(jìn)行以下測試。

1.4.1 BBB評分

術(shù)后的1 d、3 d和7 d分別對各組大鼠進(jìn)行BBB評分。采用盲法觀察其后肢運(yùn)動(dòng)情況，聯(lián)合考察大鼠后肢各關(guān)節(jié)活動(dòng)、后肢的步態(tài)和協(xié)調(diào)功能。取左右兩側(cè)肢體評分平均值，作為最后得分。

1.4.2 腸平滑肌肌電慢波活動(dòng)

3.5 %水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠后開腹，在距回盲瓣2 cm回腸處腸壁肌層平行插入一對銀絲電極，兩電極相距約5 mm，參考電極夾于皮下，石蠟絕緣紗布覆蓋腹腔；另一端經(jīng)生物電放大器引入到BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)。待電活動(dòng)穩(wěn)定10 min后開始記錄。掃描速度1.00 s/div，電增益500 mV，時(shí)間常數(shù)3 s，高頻濾波20 Hz。連續(xù)記錄30 min。對每只大鼠慢波數(shù)據(jù)樣本剪接基線平穩(wěn)的波形，隨機(jī)截取10個(gè)時(shí)間段以上，對所比較分析的波形取相同的下限，計(jì)算每只大鼠慢波的頻率和振幅的均值。

1.4.3 平滑肌收縮

在回盲部以上剪取回腸2 cm，輕微清除大部分腸內(nèi)容物后，固定于裝有37℃臺式液的恒溫平滑肌槽內(nèi)，另一端連接張力換能器，打開BL-420F生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)測定回腸平滑肌收縮活動(dòng)，待波形出現(xiàn)類似正弦波后開始記錄，掃描速度1.00 s/div，電增益1000 mV，時(shí)間常數(shù)10 s，高頻濾波20 Hz。

1.4.4 腸組織HE染色

3.5 %水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠后，迅速打開大鼠腹腔取回盲瓣上2 cm處回腸組織1～2 cm，用生理鹽水輕柔沖洗腸內(nèi)容物，無菌濾紙吸干表面水分。放置于4%多聚甲醛于4℃冰箱中固定18 h以上。石蠟包埋，切片，梯度酒精水化，HE染色，脫水，中性樹脂封片。待樹脂干片后，光鏡下觀察組織形態(tài)學(xué)改變，采用盲法根據(jù)腸黏膜損傷Chiu評分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評定。

1.4.5 血清DAO含量

大鼠3.5%水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉，立即開腹，腹主動(dòng)脈取全血，37℃恒溫培養(yǎng)箱中靜置30 min，3500 r/min離心10 min，取上清液置于-20℃保存。待用時(shí)取出置于室溫下30 min，ELISA試劑盒測定，具體操作步驟按照說明書進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均用(xˉ±s)表示，各組間均數(shù)比較采用單因素方差分析(One-wayANOVA)和SNK檢驗(yàn)。顯著性水平α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

術(shù)后1 d，A組大鼠靜臥少動(dòng)，雙后肢運(yùn)動(dòng)無力，肌張力下降幾乎為零，無明顯進(jìn)食和飲水活動(dòng)；不能進(jìn)行自主排尿，經(jīng)人工按摩膀胱輔助排尿后，部分大鼠出現(xiàn)嚴(yán)重血尿。B組大鼠運(yùn)動(dòng)功能稍差。C組大鼠運(yùn)動(dòng)功能，飲食和飲水均正常。

術(shù)后3 d，A組大鼠正常進(jìn)食和飲水，雙后肢的運(yùn)動(dòng)功能有所恢復(fù)，肌張力有所升高；絕大多數(shù)大鼠能自主排尿；部分大鼠血尿輕微且仍未恢復(fù)自主排尿功能，其余大鼠尿液均正常。B、C組大鼠活動(dòng)良好，排尿排便正常，狀態(tài)佳。

術(shù)后7 d，A組大鼠傷口痊愈，未見感染、化膿；雙后肢運(yùn)動(dòng)未完全恢復(fù)；所有大鼠均可自主排尿。B、C組大鼠活動(dòng)良好，排尿排便正常，狀態(tài)佳。

2.2 BBB評分

A組BBB評分顯著低于C組(P＜0.001)。B組和C組BBB評分無顯著性差異(P＞0.05)。見表1。

2.3 腸平滑肌肌電慢波活動(dòng)

大鼠急性脊髓損傷后1 d和3 d，A組與C組相比，腸道的肌電慢波頻率顯著降低(P＜0.001)，慢波振幅降低(P＜0.05)。B組和C組肌電慢波頻率和振幅無顯著性差異(P＞0.05)。損傷后7 d，三組肌電慢波的頻率和振幅均無顯著性差異(P＞0.05)。見圖1、表2。

2.4 腸收縮力活動(dòng)

大鼠急性脊髓損傷后1 d、3 d，A組與C組相比，腸道收縮振幅和頻率降低(P＜0.05)。B組和C組相比，腸道收縮力的振幅和頻率無顯著性差異(P＞0.05)。脊髓損傷后7 d，三組腸道收縮力的振幅和頻率均無顯著性差異(P＞0.05)。見圖2、表3。

2.5 腸組織HE染色及黏膜評分

大鼠急性脊髓損傷后1 d，A組的腸黏膜充血、水腫，毛細(xì)血管破裂出血，黏膜下間隙增寬，有的甚至延伸至基底部，上皮細(xì)胞脫落，大量的中性粒細(xì)胞浸潤，派氏淋巴結(jié)增生和出血。

脊髓損傷后1 d、3 d，A組腸黏膜損傷Chiu評分高于B組和C組(P＜0.05)。7 d后A組的腸黏膜損傷程度減輕，黏膜下的間隙變窄，出血減少，水腫減輕。見表4、圖3。

2.6 血清DAO含量

大鼠急性脊髓損傷后1 d、3 d，與C組相比，A組大鼠血清DAO含量升高(P＜0.01)。B組與C組相比，血清DAO含量無顯著性差異(P＞0.05)。大鼠急性脊髓損傷后7 d，三組間血清DAO含量均無顯著性差異(P＞0.05)。見表5。

表2 各組急性脊髓損傷后回腸肌電慢波比較

表3 各組急性脊髓損傷后平滑肌收縮比較

表4 各組腸黏膜損傷Chiu評分比較

表5 各組血清DAO的含量比較(pg/ml)

圖1 大鼠急性脊髓損傷后腸道肌電慢波變化

圖2 大鼠急性脊髓損傷后腸道平滑肌收縮力的變化

3 討論

脊髓損傷是骨科常見的一種嚴(yán)重性損傷，可導(dǎo)致患者肢體運(yùn)動(dòng)和感覺功能部分或全部喪失，排便功能障礙，出現(xiàn)便秘、腹脹、大便失禁、排便耗時(shí)延長、精神壓力增加等一系列問題，不僅嚴(yán)重影響患者自身生活質(zhì)量，也給家庭和社會帶來沉重的負(fù)擔(dān)[15-16]。近年來臨床上關(guān)于急性脊髓損傷后的神經(jīng)源性腸道障礙(neurogenic bowel dysfuncation)報(bào)道越來越多[17-19]，臨床醫(yī)師對于脊髓損傷后的康復(fù)治療和管理體系也越來越全面和細(xì)致[20-21]，同樣也受到基礎(chǔ)科研人員的重視。脊髓損傷后，為了醫(yī)生的精確診斷和提高患者的生活質(zhì)量，美國脊髓損傷協(xié)會制定了標(biāo)準(zhǔn)的國際指南[22]。脊髓損傷后最先出現(xiàn)的就是自主神經(jīng)系統(tǒng)的紊亂[23]，然而在臨床上一直缺乏監(jiān)測急性脊髓損傷后腸道運(yùn)動(dòng)功能和腸黏膜損傷程度相對特異性的血清學(xué)指標(biāo)。

DAO在腸黏膜上皮細(xì)胞中含量豐富，它調(diào)控細(xì)胞的有絲分裂和減數(shù)分裂，調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞內(nèi)組胺樣物質(zhì)的氧化轉(zhuǎn)氨基作用，滅活組胺，減輕腸道的過敏反應(yīng)和胃酸的分泌，其在血液中的含量或活性能夠反映腸道機(jī)械屏障的完整性和黏膜受損傷程度。有文獻(xiàn)報(bào)道[12-14]，血清DAO含量可以監(jiān)測抗癌藥對腸黏膜損傷程度。生理狀態(tài)下循環(huán)血液中的DAO被肝臟滅活。Luk等[24]研究發(fā)現(xiàn)，血清DAO活性與動(dòng)物小腸黏膜DAO含量有相關(guān)性；另有研究表明，血漿DAO含量與急性腸缺血、炎癥性腸病和腸系膜缺血造成上皮損傷呈正相關(guān)[25-28]。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠急性脊髓損傷后1 d和3 d，血清DAO含量明顯升高；脊髓損傷后7 d，血清DAO含量降至正常水平。

圖3 急性脊髓損傷后腸組織HE染色結(jié)果(200×)

腸肌電慢波是激發(fā)腸道蠕動(dòng)的自發(fā)電流，可分為慢波和動(dòng)作電位兩種[29]。有研究顯示，不完全性腸梗阻和小鼠早期脊髓損傷后，腸道的慢波振幅和頻率降低[30]。腸道的動(dòng)作電位易受到腸壁順應(yīng)性、胃腸激素和腸道自主神經(jīng)系統(tǒng)影響，所以本實(shí)驗(yàn)只記錄腸道起搏細(xì)胞(intestinal cajal cell,ICC)產(chǎn)生的慢波活動(dòng)。文獻(xiàn)報(bào)道[6]，腸黏膜受損后腸道的肌電活動(dòng)減弱，脊髓損傷后早期腸黏膜損傷程度呈漸進(jìn)性加重。本研究發(fā)現(xiàn)，在脊髓損傷的早期，腸道慢波電位的振幅和頻率顯著降低，血清DAO的含量也降低；而在后期，慢波電位的頻率和幅度恢復(fù)，血清DAO的含量正常。提示在急性脊髓損傷后早期，血清DAO含量與腸肌電慢波活動(dòng)相關(guān)，血清DAO可以反映脊髓損傷后早期腸道的肌電慢波活動(dòng)。

腸平滑肌收縮力能很好地反映腸道的運(yùn)動(dòng)功能。有研究指出[31-32]，位于腸肌叢及其環(huán)形肌黏膜下邊緣的ICC是胃腸慢波活動(dòng)的起搏器和傳導(dǎo)者，對胃腸道的動(dòng)力起著重要的作用；在某些病理生理情況下，ICC網(wǎng)絡(luò)或細(xì)胞數(shù)量的缺失和減少是導(dǎo)致胃腸動(dòng)力紊亂的原因。脊髓損傷后大鼠腸道的ICC數(shù)量降低。因而脊髓損傷大鼠腸收縮力可以反應(yīng)出大鼠腸道運(yùn)動(dòng)的狀況。本研究發(fā)現(xiàn)，在大鼠急性脊髓損傷后1 d和3 d，腸道的收縮力降低，并且腸平滑肌收縮功能障礙和急性脊髓損傷后腸黏膜損傷程度相關(guān)；脊髓損傷后7 d血清DAO含量與腸道收縮均恢復(fù)正常。提示急性脊髓損傷后早期血清DAO含量與腸道收縮力相關(guān)。

腸組織HE染色顯示，脊髓損傷早期腸黏膜上皮脫落，絨毛變鈍，炎性粒細(xì)胞浸潤，黏膜下基底出現(xiàn)間隙。腸黏膜損傷Chiu評分升高；而后期黏膜損傷恢復(fù)。

綜上所述，急性脊髓損傷后早期，大鼠的運(yùn)動(dòng)功能喪失，后肢癱瘓，腸肌電慢波、收縮力均降低，腸黏膜的損傷程度嚴(yán)重，血清DAO含量升高。而在后期，大鼠的后肢運(yùn)動(dòng)功能有所恢復(fù)，腸的蠕動(dòng)功能和電生理活動(dòng)均有所加強(qiáng)，血清DAO含量降低。血清DAO含量可以反映大鼠急性脊髓損傷后腸道運(yùn)動(dòng)功能和腸黏膜的損傷程度。

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Relationship between Serum Diamine Oxidase Content and Intestinal Motility afterAcute Spinal Cord Injury

YANG Sen,YANG Zheng,YAN Jing-xin,XU Zhou,XU Wen-jian,TIAN Hai-yan,DAI Xiao-lin,YANG Ping
School of Basic Medical Sciences,Chengdu Medical College,Chengdu,Sichuan 610500,China

YANG Ping.E-mail:920192655@qq.com

Objective To measure the level of diamine oxidase(DAO),and observe the intestinal motor and mucosal barrier injury after acute spinal cord injury(SCI)in rats.Methods A total of 45 Sprague-Dawley rats were randomly divided into SCI group(group A,n=15), sham group(group B,n=15)and control group(group C,n=15).SCI model was established with Allen's strike mode(10 g×25 mm)by striking T10spinal segment in rats.One day,three days and seven days after SCI,hind limb motor function was assessed with Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)Scale in each group,the myoelectric slow wave and ileum smooth muscle contractility were measured in rats,ileum tissues were tested with HE staining,and the DAO content of serum was tested with ELISA kit.Results One day,three days and seven days after SCI,the BBB score was significantly lower in group A than in groups B and C(P＜0.001).One day,three days after SCI,the frequency and amplitude of both slow wave and contractility were lower in group A than in groups B and C(P＜0.05);seven days after SCI,there was no significant difference among three groups(P＞0.05).Group A showed ileal mucosal edema,lodging,inflammatory cell infiltration,and submucosal gap increase.The Chiu's score of intestinal mucosal injury was higher in group A than in groups B and C(P＜0.05),as well as the serum DAO content one day and three days after SCI(P＜0.05),and no significant difference was found in the serum DAO content among three groups seven days after SCI(P＞0.05).Conclusion Serum DAO content may respond to the intestinal motor function and mucosal injury after acute SCI in rats.

spinal cord injury;diamine oxidase;intestinal motor function;mucosal injury;rats

R651.2

A

1006-9771(2017)06-0634-07

2016-10-19

2016-12-04)

10.3969/j.issn.1006-9771.2017.06.003

1.四川省教育廳科研計(jì)劃重點(diǎn)項(xiàng)目(No.16ZA0296)；2.成都醫(yī)學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目(No.CXJS201309)；3.四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(No.2015JY0205)；4.四川省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會普及應(yīng)用項(xiàng)目(No.17PJ591)。

成都醫(yī)學(xué)院，四川成都市610500。作者簡介：楊森(1993-)，男，漢族，四川綿陽市人，主要研究方向：脊髓損傷后腸道動(dòng)力障礙機(jī)制。通訊作者：楊平(1977-)，男，遼寧盤錦市人，博士，副教授，主要研究方向：基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)。E-mail:920192655@qq.com。