梁藝懷，張京佶，石利利，劉濟寧，楊海榮，趙榆，楊鴻波，李俊，趙玉艷，殷浩文,*

1. 上海市檢測中心生物與安全檢測實驗室，上海 2012032. 環(huán)境保護部南京環(huán)境科學研究所，南京2100423. 沈陽化工研究院有限公司測試評價中心，沈陽1100214. 貴州省分析測試研究院，貴陽 5500025. 蘇州華測安評化學品技術服務有限公司，蘇州 215121

稀有鮈鯽作為化學品生態(tài)毒性測試魚類模式生物的標準化實踐

梁藝懷1，張京佶1，石利利2，劉濟寧2，楊海榮3，趙榆3，楊鴻波4，李俊4，趙玉艷5，殷浩文1,*

1. 上海市檢測中心生物與安全檢測實驗室，上海 2012032. 環(huán)境保護部南京環(huán)境科學研究所，南京2100423. 沈陽化工研究院有限公司測試評價中心，沈陽1100214. 貴州省分析測試研究院，貴陽 5500025. 蘇州華測安評化學品技術服務有限公司，蘇州 215121

魚類模式生物在化學品生態(tài)毒性測試中占有重要地位，中國尚沒有合適的標準化本土實驗魚種。國家環(huán)境保護部第7號令《新化學物質環(huán)境管理辦法》對本土受試生物用于生態(tài)毒性測試提出了要求。稀有鮈鯽(Gobiocypris rarus)是一種我國特有的小型淡水鯉科魚類，具有成為標準試驗魚種的潛能。首個以稀有鮈鯽為標準供試生物的化學品魚類急性毒性試驗國家標準已經(jīng)發(fā)布實施，其他測試方法的標準化工作正在持續(xù)進行中。本文闡述了研發(fā)稀有鮈鯽為標準供試生物的依據(jù)，對相關標準化研究工作進行了分析、歸納和總結，并提出了未來工作的方向和需求。

化學品；稀有鮈鯽；生態(tài)毒性；模式生物；標準化

魚類模式生物是生命科學基礎研究的實驗材料之一，是藥物、食品、化學品等安全性評價和效果試驗的活試劑[1]。動物實驗的目標是追求能準確反映實驗過程的可靠數(shù)據(jù)。無論是科學研究、環(huán)境監(jiān)測還是毒性檢測，實驗動物的質量是實驗數(shù)據(jù)可重復性(repeatability)、再現(xiàn)性(reproducibility)和可比性(comparability)的基石。在化學品安全管理中，高質量的數(shù)據(jù)更是有效執(zhí)法的依據(jù)。

某一種模式生物要成為實驗動物，并得到廣泛認可和應用必然要經(jīng)過標準化研究。這也是實驗動物區(qū)別于其他類動物的本質特征。魚類模式生物中最為人所知的當屬斑馬魚(zebrafish，Danio rerio)，其在生態(tài)毒理學評價中應用廣泛，已成為僅次于小鼠的第二優(yōu)先脊椎模式生物[2]，得到國際標準化組織(International Organization for Standardization，ISO)、經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(Organization for Economic Co-operation and Development，OECD)，以及歐洲化學工業(yè)生態(tài)學與毒理學中心(European Chemical Industry Ecology and Toxicology Center，ECETOC)等權威組織認可。斑馬魚在遺傳學控制、微生物學控制、環(huán)境控制、營養(yǎng)學控制等方面的相關標準化工作已經(jīng)取得了諸多進展[3]。在這方面，中國起步較晚，近10年來我國在環(huán)境科學研究領域有較多的本土物種參與到對環(huán)境質量、風險評估的應用研究中，包括稀有鮈鯽(Gobiocypris rarus)、鯉魚(Cyprinus carpio)、草魚(Ctenopharyngodon idellus)、鰱魚(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙魚(Aristichthys nobilis)、麥穗魚(Pseudorasbora parva)等本土獲取的魚種[4-5]，但是這些研究絕大部分是集中在生態(tài)學和生態(tài)毒理學層面，對本土實驗魚種的實驗室內模式物種的標準化研發(fā)和應用尚在起步階段。由于我國化學品管理法規(guī)的需求，我國本土魚種稀有鮈鯽是目前標準化前景較好的魚種，已經(jīng)在化學品毒性測試領域中累積了較多的實踐經(jīng)驗，但要成為一種化學品測試普遍認可的模式生物還需深入開展與物種特征鑒定、飼養(yǎng)規(guī)范、毒性響應的穩(wěn)定性、實驗條件的適宜性、毒物敏感性等一系列標準化研究與驗證工作。本文旨在闡述研發(fā)稀有鮈鯽為化學品測試的標準供試生物的依據(jù)；承前啟后，對已開展的實驗室內和實驗室間的相關的質量與測試技術標準化工作進行分析、歸納和總結，提出未來工作的方向和需求。

1 以本土魚種作為模式生物應用于化學品生態(tài)毒性測試的必要性(The necessity of native fish species as model organism used in chemical ecotoxicity testing )

魚類作為水生生態(tài)毒性試驗體系中的頂級脊椎動物，在化學品生態(tài)毒性試驗體系中有著不可替代的作用。因此，發(fā)達國家早在化學品安全管理體系建立之初，就通過大量標準化研究推出符合管理要求、具有科學基礎的代表性試驗魚種。國際標準化組織(ISO)在20上世紀80年代即推薦斑馬魚(Danio rerio)、黑頭軟口鰷 (Pimephales promelas)、藍鰓魚(Lepomis macrochirus)、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)和青鳉(Oryzias latipes)等魚種作為為毒性試驗材料魚。這些標準化工作為發(fā)達國家在化學品安全管理全球化的過程中爭得了絕對的主導權，并將管理體系和標準化技術的優(yōu)勢延伸擴大到化學品生產(chǎn)、國際貿易等經(jīng)濟活動方面。

目前全球化學品測試體系基本上以經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(OECD)發(fā)布的《化學品測試指南》系列技術指南文件(TGD)為框架。從測試方法到生物物種，歐美占了絕對的主導地位(表1)。生態(tài)保護上的特異性是全球公認的，我們需要有符合我國環(huán)境保護特點的試驗魚種。2010年10月15日國家環(huán)境保護部頒布實施《新化學物質環(huán)境管理辦法》(第7號令)[6]，其中第十條規(guī)定新化學物質的“生態(tài)毒理學特性測試報告，必須包括在中國境內用中國的供試生物按照相關標準的規(guī)定完成的測試數(shù)據(jù)”。這從行政管理上奠定了保護我國生態(tài)環(huán)境安全的基礎，也為后續(xù)生態(tài)毒性測試技術標準化的突破預留了空間。

在世界貿易組織(WTO)框架下，工業(yè)產(chǎn)品安全性數(shù)據(jù)關聯(lián)的技術標準已成為各國保護本國環(huán)境和經(jīng)濟的關鍵技術手段。作為化學品進出口和生產(chǎn)大國，強調在與國際標準接軌的同時，也應該關注我國本土的特點，尤其在具有地域性特征的生態(tài)問題上。通過制定我國特有魚種的標準系列，不僅能夠提升我國化學品安全管理的水準，切實落實管理上要求的用中國特有的供試生物進行測試，還能推動我國標準化戰(zhàn)略從遵從國際標準向兼容并蓄中國自主標準的方向轉化。

表1 OECD化學品測試指南中的魚類測試方法及推薦魚種Table 1 Fish tests and recommended species in OECD guidelines for chemical testing

稀有鮈鯽(Gobiocypris rarus)是我國特有的一種小型鯉科魚類。因其性成熟時間短、繁殖季節(jié)長、產(chǎn)卵量較大，可常年人工繁殖，具有成為標準試驗魚種的潛能[17]。因其生物學特征研究已較為系統(tǒng)，國內許多科研單位、測試機構使用稀有鮈鯽開展生命科學研究或生態(tài)毒性檢測[18-20]。正因為稀有鮈鯽存在的諸多優(yōu)勢和工作基礎，它成為我國化學品魚類測試方法標準化的首選受試魚種。

2 稀有鮈鯽種群建立與質量標準化研究(Rare minnow resource and quality standards)

數(shù)量充足、質量合格的稀有鮈鯽胚胎、幼魚或成魚的供應，是順利進行各類毒性試驗的前置條件。只有實現(xiàn)稀有鮈鯽的實驗室規(guī)范化養(yǎng)殖，才能為相關國家標準的研制和實施提供保障。

中國科學院水生生物研究所王劍偉研究員通過國家科技支撐計劃項目“實驗動物新品種的種群建立與質量標準化研究” (2011BAI15B01)，建立了稀有鮈鯽普通級和清潔級資源保存基地，制定了微生物、寄生蟲、遺傳、病理、飼料、環(huán)境等6個實驗稀有鮈鯽質量標準和相關條件控制標準，以及飼養(yǎng)管理技術規(guī)范、生物學特性描述規(guī)范、數(shù)據(jù)測定技術規(guī)范，還完成了實驗稀有鮈鯽分子遺傳標記檢測、4種細菌多重PCR檢測、致病性嗜水氣單胞菌等5種病原細菌檢測、分枝桿菌檢測、寄生蟲檢測等技術操作規(guī)程的編制[21-23]。這些工作的完成，為稀有鮈鯽成為符合化學品環(huán)境管理要求的生態(tài)毒性測試受試生物奠定了基礎。

3 稀有鮈鯽國家標準的研制以及在其他毒性測試方法適用性研究(Development of national standards related to rare minnow and research on its applicability to other toxicity testing methods)

在經(jīng)濟合作與發(fā)展組織(OECD)化學品測試指南生物系統(tǒng)效應部分中，涉及魚類的測試方法占了將近1/4。在我國現(xiàn)行有效的化學品測試方法國家標準中，無論是試驗程序還是試驗生物，幾乎都是對OECD指南的等同轉化，鮮有技術創(chuàng)新。而遵循國際規(guī)范，驗證稀有鮈鯽的適用性并使之標準化，對完善我國的化學品生態(tài)毒性測試技術體系、落實環(huán)保部第7號令，具有重要意義。目前，已有一項稀有鮈鯽的化學品測試國家標準發(fā)布實施，另一項國家標準正在研制過程中。另外，為了應對國際上日趨嚴格的脊椎動物動物使用限制，以稀有鮈鯽胚胎為材料的替代試驗標準化基礎研究已經(jīng)啟動；而管理部門對篩查新化學物質中潛在內分泌干擾物的技術需求，也使得稀有鮈鯽在該領域的適用性研究具有現(xiàn)實意義。

3.1 國家標準《化學品 稀有鮈鯽急性毒性試驗》的研制

我國化學品管理法規(guī)要求，魚類急性毒性試驗是必須在中國境內完成的測試項目之一[6]。通過試驗可獲得化學品對中國受試生物的急性毒性數(shù)據(jù)，并為后續(xù)毒性試驗的設計和觀察提供依據(jù)。同時，急性毒性試驗由于時間短、易操作、試驗條件便于控制等特點，成為我國化學品管理規(guī)定的生態(tài)毒性試驗中最基礎層面的數(shù)據(jù)要求。

首個以稀有鮈鯽為標準供試生物的國家標準《GB/T 29763-2013化學品 稀有鮈鯽急性毒性試驗》[24]已經(jīng)由上海市檢測中心聯(lián)合原環(huán)境保護部化學品登記中心、中國科學院水生生物研究所、中國檢驗檢疫科學研究院、環(huán)境保護部南京環(huán)境科學研究所、沈陽化工研究院有限公司安全評價中心5家單位共同研制完成，并正式頒布實施。在此之前，有關稀有鮈鯽的研究大多是將稀有鮈鯽作為科學研究的材料，尚未見標準化方面的報道。生態(tài)毒理學應用研究較少，尤其在標準化基礎研究方面。

為解決上述標準化過程中的短板，上海市檢測中心生物與安全檢測實驗室在多年應用稀有鮈鯽進行毒性實驗的基礎上于2009年啟動了為期2年的標準化專項研究，并延續(xù)一年補充數(shù)據(jù)基礎和完成實驗室間的比對驗證，完成了稀有鮈鯽急性毒性試驗結果的重復性和再現(xiàn)性論證，并進一步開展了與現(xiàn)行標準魚種的可比性和敏感性研究。

(1) 稀有鮈鯽急性毒性試驗結果的重復性和再現(xiàn)性研究

研究選擇重鉻酸鉀和3, 4-二氯苯胺為參比物。結果表明，同一實驗室內部相同試驗條件下，不同體長稀有鮈鯽對同一化學品的敏感性略有差異。同一實驗室內6次重復試驗比較顯示，2種參比物對稀有鮈鯽 96 h半數(shù)致死濃度(96 h-LC50)值在質量控制范圍之內，不同體長的稀有鮈鯽試驗結果體現(xiàn)了較好的重復性。同時，6個實驗室間的比對結果顯示，稀有鮈鯽的急性毒性試驗結果在不同實驗室間具有良好的再現(xiàn)性[25]。

(2) 稀有鮈鯽與斑馬魚試驗結果的可比性

通過實驗數(shù)據(jù)和文獻分析2種方式獲得稀有鮈鯽和斑馬魚(現(xiàn)行國際標準魚種之一)對化學品敏感性特征數(shù)據(jù)集合(表2)。結果顯示，受試化學品對稀有鮈鯽與斑馬魚的96 h-LC50數(shù)值接近，基本處于同一數(shù)量級，提示2種試驗魚對受試化學品毒性響應的差異不大。因此，稀有鮈鯽作為一種中國本土的試驗魚種，具有敏感性與國際主流的標準魚種斑馬魚相近的特點，適宜作為魚類急性毒性試驗的標準魚種。

3.2 國家標準《化學品 稀有鮈鯽幼體生長試驗》的研制

通過《化學品 稀有鮈鯽急性毒性試驗》國家標準的發(fā)布和實施，稀有鮈鯽成為了化學品生態(tài)毒性測試領域的標準實驗魚種，然而，僅依據(jù)急性毒性數(shù)據(jù)來進行化學品的危害評估和風險評估是遠遠不夠的?；瘜W品在對試驗生物長期重復暴露時可能產(chǎn)生與急性毒性試驗不同的毒作用，而動物的生長衰老也可能影響毒作用的性質和程度。與急性毒性數(shù)據(jù)相比，慢性毒性數(shù)據(jù)能夠提供更多的效應終點，在進行某一化學品毒性的種間外推時慢性毒性數(shù)據(jù)具有較小的不確定性和評估因子，能夠優(yōu)化風險評估的結論。因此，必須持續(xù)推動我國標準試驗魚種用于化學品生態(tài)毒性測試的標準化戰(zhàn)略，開展稀有鮈鯽在化學品慢性毒性試驗方法的標準化研究。2014年9月國家標準化管理委員會批準了由上海市檢測中心牽頭，環(huán)境保護部固體廢物與化學品管理技術中心、中科院水生生物研究所、中國檢驗檢疫科學研究院、南京環(huán)境保護研究所、浙江省農業(yè)科學院農產(chǎn)品質量標準研究所共同參與的《化學品 稀有鮈鯽幼體生長試驗》國家標準編制任務(項目編號20140324-T-469)，該慢性毒性試驗標準的研制，有助于我國特有試驗魚種測試標準的系列化，為稀有鮈鯽最終成為國際公認的標準試驗魚種創(chuàng)造條件。

表2 化合物對稀有鮈鯽和斑馬魚的急性毒性(96 h-LC50)比較Table 2 Comparison of acute toxicity (96 h-LC50) between Gobiocypris rarus and Danio rerio

目前，標準研制團隊以重鉻酸鉀和3,4-二氯苯胺為參比物質，開展稀有鮈鯽幼體生長試驗結果的重復性研究，這項參比物研究匯集了國內5家同類實驗室，共同開展比對試驗，以期對試驗結果的再現(xiàn)性進行評價。這些工作成果將成為《化學品 稀有鮈鯽幼體生長試驗》國家標準的重要依據(jù)，為2017年底前完成標準草案的編制和送審奠定基礎。

3.3 利用稀有鮈鯽進行魚類相關替代試驗的適用性研究

歐美國家的動物福利法規(guī)對采用脊椎動物作為實驗材料提出了越來越嚴格的限制。比如，歐洲動物福利法要求科學研究遵從3R(replacement, reduction and refinement)原則，盡可能地減少脊椎動物的使用，開發(fā)和驗證出可替代整體生物的試驗方法(如，細胞、組織、胚胎)[36-37]。其中，首選用于替代魚體暴露的方法為胚胎暴露。目前，OECD已頒布多個有關魚類胚胎毒性試驗的方法，如魚類胚胎急性毒性試驗(OECD TG 236)[15]、魚類早期生活階段毒性試驗(OECD TG 210)[9]、魚類胚胎-卵黃囊吸收階段短期毒性試驗(OECD TG 212)[10]。隨著國際上化學品毒性測試技術的升級換代，我國則剛完成傳統(tǒng)意義上的化學品安全測試體系框架建設，在體外活體替代試驗的測試技術、驗證和標準化等關鍵環(huán)節(jié)上還存在空白，相關工作大多還停留在毒性效應研究階段[18,38-43]。因此，需要緊跟國際大趨勢，在稀有鮈鯽急性、慢性毒性試驗標準的研制基礎上，開展該魚種的替代潛力研究，進行胚胎毒性試驗關鍵技術攻關，為魚類替代試驗的標準化積累數(shù)據(jù)，實現(xiàn)相關替代試驗技術的革新。

3.4 利用稀有鮈鯽篩查內分泌干擾物質的適用性研究

環(huán)境中的許多化學物質可能與人體和野生生物的內分泌系統(tǒng)產(chǎn)生相互作用，從而導致某些不良影響，比如損害動物體和人體的生殖系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)。就管理部門而言，對內分泌干擾物質的進行有效監(jiān)管的前提是正確識別，而傳統(tǒng)的測試方法已難以滿足這方面的需求。1998年OECD便啟動了優(yōu)先工作計劃，開發(fā)了一組魚類測試方法(229魚類短期繁殖試驗[12]，230雌激素、雄激素活性與芳香化酶活性抑制魚類21天短期篩選試驗[13]、234魚類性發(fā)育試驗[14]以及240青鳉擴展一代繁殖試驗[16])，用于篩選并測定對魚類內分泌系統(tǒng)具有干擾效應的活性物質。上述方法推薦的試驗用魚包括黑頭軟口鰷(Pimephales promelas)、日本青鳉(Oryzias latipes)、斑馬魚(Danio rerio)，主要采用卵黃蛋白原(VTG)和第二性征作為觀測指標，或伴有繁殖力的檢測，甚至性腺組織病理學分析。由于內分泌干擾物質對環(huán)境和人類健康的潛在危害和風險，此類物質的篩查和評價終會成為我國化學品安全管理的一個重點。近10年來，國內學者利用稀有鮈鯽作為受試生物，開展了各類環(huán)境污染物的內分泌干擾效應研究[44-54]。然而，對于OECD魚類內分泌干擾物篩查試驗，有關稀有鮈鯽的適用性驗證工作才剛剛起步，需要國內的科研和測試機構共同努力，為相關方法建立國家標準積累關鍵數(shù)據(jù)和技術，也為未來國家職能部門的管理需求進行技術儲備。

4 展望(Outlook)

總之，稀有鮈鯽作為特有的本土魚種，在我國多年來的化學品管理和環(huán)境保護中具有重要的意義和實踐，已經(jīng)具備了化學品測試標準化的基礎。相關的實驗室和研究機構應該在遵從與國際一致的標準化原則的前提下，科學地驗證和評價稀有鮈鯽對化學品魚類測試方法的適用性，不斷擴大稀有鮈鯽作為化學品測試模式生物的使用范圍，在化學品測試實踐中累積物種穩(wěn)定性和敏感性數(shù)據(jù)，完善物種鑒定要求和飼養(yǎng)條件。這些都是未來稀有鮈鯽標準化工作的需求和研究方向。

[1] 吳淑勤, 黃志斌等，水生實驗動物——劍尾魚[M]. 北京: 中國農業(yè)出版社, 2005: 1-5

Wu S Q, Huang Z B, et al. Aquatic Laboratory Animal: Swordtail Fish (Xiphophorus helleri) [M]. Beijing: China Agriculture Press, 2005: 1-5 (in Chinese)

[2] Lammer E, Carr G J, Wendler K, et al. Is the fish embryo toxicity test (FET) with the zebrafish (Danio rerio) a potential alternative for the fish acute toxicity test? [J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology, 2009, 149(2): 196-209

[3] 何嘉玲, 劉靜, 王天奇, 等. 斑馬魚的質量標準化[J]. 中國實驗動物學報, 2014, 22(6): 99-102

He J L, Liu J, Wang T Q, et al. Research of zebrafish quality standardization [J]. Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica, 2014, 22(6): 99-102 (in Chinese)

[4] 王曉南, 鄭欣, 閆振廣, 等. 水質基準魚類受試生物篩選[J]. 環(huán)境科學研究, 2014, 27(4): 341-348

Wang X N, Zheng X, Yan Z G, et al. Screening of native fishes for deriving aquatic life criteria [J]. Research of Environmental Sciences, 2014, 27(4):341-348 (in Chinese)

[5] 王曉南, 劉征濤, 閆振廣,等. 麥穗魚物種敏感性評價[J]. 環(huán)境科學, 2013, 34(6): 2329-2334

Wang X N, Liu Z T, Yan Z G, et al. Species sensitivity evaluation of Pseudorasbora parva [J]. Environmental Science, 2013, 34(6): 2329-2334 (in Chinese)

[6] 環(huán)境保護部. 環(huán)境保護部令部令 第7號. 新化學物質環(huán)境管理辦法[Z]. 北京：環(huán)境保護部, 2010

MEP. The Order No. 7, The Ministry of Environmental Protection of the PRC. The Provisions on Environmental Administration of New Chemical Substances [Z]. Beijing: MEP, 2010 (in Chinese)

[7] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 203: Fish, Acute Toxicity Test [S]. Paris: OECD, 1992

[8] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 204: Fish, Prolonged Toxicity Test: 14-Day Study [S]. Paris: OECD, 1984

[9] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 210: Fish, Early-Life Stage Toxicity Test [S]. Paris: OECD, 1992

[10] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 212: Fish, Short-term Toxicity Test on Embryo and Sac-Fry Stages [S]. Paris: OECD, 1998

[11] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 215: Fish, Juvenile Growth Test [S]. Paris: OECD, 2000

[12] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 229: Fish Short Term Reproduction Assay [S]. Paris: OECD, 2012

[13] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 230: 21-day Fish Assay: A Short-Term Screening for Oestrogenic and Androgenic Activity, and Aromatase Inhibition [S]. Paris: OECD, 2009

[14] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 234: Fish Sexual Development Test [S]. Paris: OECD, 2011

[15] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 236: Fish Embryo Acute Toxicity (FET) Test [S]. Paris: OECD, 2013

[16] OECD. Guidelines for Testing of Chemicals, 240: Medaka Extended One Generation Reproduction Test (MEOGRT) [S]. Paris: OECD, 2015

[17] 曹文宣, 王劍偉. 稀有鮈鯽——一種新的魚類實驗動物[J]. 實驗動物科學與管理, 2003, 20(z1): 96-99

Cao W X, Wang J W. Rare minnow: A new laboratory animal in China [J]. Laboratory Animal Science and Management, 2003, 20(z1): 96-99 (in Chinese)

[18] 楊亞洲, 蔡磊明, 孟智啟, 等. 毒死蜱對稀有鮈鯽不同生命階段的毒性效應[J]. 農藥學學報, 2014, 16(1): 78-83

Yang Y Z, Cai L M, Meng Z Q, et al. Toxicity effects of chlorpyrifos to different life stages of Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Chinese Journal of Pesticide Science, 2014, 16(1): 78-83 (in Chinese)

[19] 吳本麗, 曹巖, 羅思, 等. 封閉群稀有鮈鯽對幾種常見化學品的敏感性[J]. 中國環(huán)境科學, 2014, 34(4): 1059-1066

Wu B L, Cao Y, Luo S, et al. Sensitivity of rare minnow (Gobiocypris rarus, IHB) to several common chemicals [J]. China Environmental Science, 2014, 34(4):1059-1066 (in Chinese)

[20] 陳曦, 洪響生, 吳慧敏, 等. 稀有鮈鯽神經(jīng)發(fā)育相關基因的克隆、同源性分析及組織分布[J]. 生態(tài)毒理學報, 2016, 11(1): 173-181

Chen X, Hong X L, Wu H M, et al. Cloning, homology analysis, and distribution of neural development related genes of Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2016, 11(1): 173-181 (in Chinese)

[21] Zhang D F, Zhang Q Q, Li A H. Development of a multiplex PCR assay for rapid and simultaneous detection of four genera of fish pathogenic bacteria [J]. Letters in Applied Microbiology, 2014, 59(5): 471-478

[22] Wu B L, Luo S, Wang J W. Effects of temperature and feeding frequency on ingestion and growth for rare minnow [J]. Physiology & Behavior, 2015, 140: 197-202

[23] Wu B L , Xiong X Q , Xie S Q , et al. Dietary lipid and gross energy affect protein utilization in the rare minnow Gobiocypris rarus [J]. Chinese Journal of Oceanology & Limnology, 2016(4): 1-9

[24] 中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局, 中國國家標準化管理委員. GB/T 29763—2013 化學品 稀有鮈鯽急性毒性試驗[S]. 北京: 中國標準出版社, 2014

General Administration of Quality Supervision, Inspection and Quarantine of the PRC, and Standardization Administration of the PRC. GB/T 29763-2013 Chemicals—Rare Minnow (Gobiocypris rarus) acute toxicity test [S]. Beijing: Standards Press of China, 2014 (in Chinese)

[25] 張京佶, 殷浩文, 趙華清. 稀有鮈鯽對重鉻酸鉀和3,4-二氯苯胺急性毒性研究[J]. 中國實驗動物學報, 2014, 22(2):57-61

Zhang J J, Yin H W, Zhao H Q. Acute toxicity of potassium bichromate and 3,4-dichloroaniline in Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Acta Laboratorium Animals Scientia Sinica, 2014, 22(2): 57-61 (in Chinese)

[26] 周永欣, 成水平, 胡煒, 等. 稀有鮈鯽——一種新的魚類毒性試驗材料[J]. 動物學研究, 1995, 16(1): 59-63

Zhou Y X, Cheng S P, Hu W, et al. A new toxicity test organism-Gobiocypris rarus [J]. Zoological Research, 1995, 16(1): 59-63 (in Chinese)

[27] 姜福全. 稀有鮈鯽急性、亞慢性毒性試驗方法及其在東湖底泥毒性研究中的應用[D]. 北京：中國科學院研究生院, 2006

Jiang F Q. Methods of acute and subchronic toxicity test using Gobiocypris rarus and their application in toxicity study of sediment in Donghu Lake [D]. Beijing: Graduate School of Chinese Academy of Sciences, 2006 (in Chinese)

[28] 陳家長, 胡庚東, 瞿建宏. 鉛和鉻對魚類聯(lián)合毒性的研究[J]. 浙江水產(chǎn)學院學報, 1998, 17(3): 169-173

Chen J C, Hu G D, Qu J H. Study on joint toxicity of lead and chromium [J]. Journal of Zhejiang College of Fisheries, 1998, 17(3): 169-173 (in Chinese)

[29] 修瑞琴, 許永香, 高世榮, 等. 砷與鎘、鋅離子對斑馬魚的聯(lián)合毒性實驗[J]. 中國環(huán)境科學, 1998, 18(4): 349-352

Xiu R Q, Xu Y X, Gao S R, et al. Joint toxicity test of arsenic with cadmium and zinc ions to zebrafish,Brachynanio rerio [J]. China Environmental Science, 1998, 18(4): 349-352 (in Chinese)

[30] 汪紅軍, 李嗣新, 周連鳳, 等. 5種重金屬暴露對斑馬魚呼吸運動的影響[J]. 農業(yè)環(huán)境科學學報, 2010, 29(9): 1675-1680

Wang H J, Li S X, Zhou L F, et al. The effect of exposure to five kinds of heavy metals on respiratory movement of zebra fish (Brachydanio rerio) [J]. Journal of Agro-Environment Science, 2010, 29(9): 1675-1680 (in Chinese)

[31] 劉信勇, 朱琳. 多壁碳納米管存在環(huán)境下Pb、Zn對斑馬魚毒性的變化[J]. 生態(tài)毒理學報, 2009, 4(6): 829-833

Liu X Y, Zhu L. The change of the toxicity of Pb and Zn on zebrafish in the case of the existence of multi-walled carbon nanotubes [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2009, 4(6): 829-833 (in Chinese)

[32] 李偉民, 尹大強, 李時銀, 等. 氯代苯胺對斑馬魚的急性毒性及3D-QSAR分析[J]. 環(huán)境科學研究, 2002, 15(2): 6-7

Li W M, Yin D Q, Li S Y, et al. Acute toxicity of chloroanilines to zebra fish and 3D-QSAR analysis [J]. Research of Environmental Sciences, 2002, 15(2): 6-7 (in Chinese)

[33] 盧玲, 沈英娃. 酚類、烷基苯類、硝基苯類化合物和環(huán)境水樣對劍尾魚和鮈鯽的急性毒性[J]. 環(huán)境科學研究, 2002, 15(4): 57-59

Lu L, Shen Y W. Acute toxicity of phenol, alkyl benzene, nitrobenzene and water sample to sword fish (Xiphophorus helleri) and rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Research of Environmental Sciences, 2002, 15(4): 57-59 (in Chinese)

[34] 楊霓云, 王魯聽, 王宏, 等. 3種刺激性化學試劑對魚類的急性毒性[J]. 環(huán)境科學研究, 2005, 18(1): 21-27

Yang N Y, Wang L T, Wang H, et al. Acute toxicity of three kinds of stimulating chemical warfare agents to fish [J]. Research of Environmental Sciences, 2005, 18(1): 21-27 (in Chinese)

[35] 范亞維, 周啟星. 水體甲苯、乙苯和二甲苯對斑馬魚的毒性效應[J]. 生態(tài)毒理學報, 2009, 4(1): 136-141

Fan Y W, Zhou Q X. Toxic effects of toluene, ethylbenzene and xylene in waters on zebrafish Brachydanio rerio [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2009, 4(1): 136-141 (in Chinese)

[36] Russell W M S, Burch R L. Principles of Humane Experimental Technique [M]. London: Methuen & Co Ltd., Universities Federation for Animal Welfare (UFAW), 1992

[37] Rusche B. The 3Rs and animal welfare—Conflict or the way forward? [J]. ALTEX, 2003, 20(Suppl 1): 63-76

[38] Zhu B, Wu Z F, Li J, et al. Single and joint action toxicity of heavy metals on early developmental stages of Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Ecotoxicology and Environmental Safety, 2011, 74(8): 2193-2202

[39] 魯增輝. 氨氮對稀有鮈鯽胚胎及卵黃囊期仔魚的毒性效應研究[D]. 重慶：西南大學, 2012

[40] Zhu B, Liu T Q, Wang G X. Developmental toxicity of 3,4-dichloroaniline on rare minnow (Gobiocypris rarus) embryos and larvae [J]. Chemosphere, 2013, 90: 1132-1139

[41] Zhu B, Gong Y X, Liu L, et al. Toxic effects of triazophos on rare minnow (Gobiocypris rarus) embryos and larvae [J]. Chemosphere, 2014, 108: 46-54

[42] Zhu B, Liu G L, Ling F, et al. Development toxicity of functionalized single-walled carbon nanotubes on rare minnow embryos and larvae [J]. Nanotoxicology, 2015, 9(5): 579-590

[43] 蔣金花, 吳聲敢, 陳江濱, 等. 三唑酮對斑馬魚和稀有鮈鯽不同生長階段的急性毒性比較[J]. 生態(tài)毒理學報, 2015, 10(5): 150-156

Jiang J H, Wu S G, Chen J B, et al. Acute toxicity effects of triadimefon on different life stages of zebrafish (Danio rerio) and Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2015, 10(5): 150-156 (in Chinese)

[44] Zhong X, Xu Y, Liang Y, et al. The Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) as an in vivo model for endocrine disruption in freshwater teleosts: A full life-cycle test with diethylstilbestrol [J]. Aquatic Toxicology, 2005, 71(1): 85-95

[45] 鐘雪萍, 徐盈, 梁勇, 等. 稀有鮈鯽生命早期的己烯雌酚暴露對生長發(fā)育與繁殖的影響[J]. 水生生物學報, 2005, 29(6): 667-672

Zhong X P, Xu Y, Liang Y, et al. Effects of diethylstilbestrol exposure in early life stage on development and reproduction in rare minnow, Gobiocypris rarus [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2005, 29(6): 667-672 (in Chinese)

[46] 廖濤, 徐盈, 鐘雪萍, 等. EE2對稀有鮈鯽和斑馬魚幼魚體內卵黃蛋白原誘導的比較[J]. 水生生物學報, 2005, 29(5): 513-517

Liao T, Xu Y, Zhong X P, et al. Comparative vitellogenic responses in zebrafish (Brachydanio rerio) and rare minnow (Gobiocypris rarus) exposed to 17α-ethinylestradiol [J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2005, 29(5): 513-517 (in Chinese)

[47] 劉阿朋. 17α-甲基睪酮和三丁基錫氧化物暴露對稀有鮈鯽的影響[D]. 武漢：華中農業(yè)大學, 2006

Liu A P. Influences of rare minnow (Gobiocypris rarus) to exposure of 17α-methyltestosterone and bis(tributyltin)oxide [D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University, 2006 (in Chinese)

[48] Zha J, Wang Z, Wang N, et al. Histological alternation and vitellogenin induction in adult rare minnow (Gobiocypris rarus) after exposure to ethynylestradiol and nonylphenol [J]. Chemosphere, 2007, 66(3): 488-495

[49] Zha J, Sun L, Zhou Y, et al. Assessment of 17alpha-ethinylestradiol effects and underlying mechanisms in a continuous, multigeneration exposure of the Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Toxicology and Applied Pharmacology, 2008, 226(3): 298-308

[50] Li W, Zha J, Spear P A, et al. Changes of thyroid hormone levels and related gene expression in Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) during 3-amino-1,2,4-triazole exposure and recovery [J]. Aquatic Toxicology, 2009, 92(1): 50-57

[51] 熊力, 馬永鵬, 張曉崢, 等. 五氯酚對稀有鮈鯽卵黃蛋白原及p53的誘導效應[J]. 環(huán)境科學, 2012, 33(6): 1858-1864

Xiong L, Ma Y P, Zhang X Z, et al. Induction effects of pentachlorophenol on vitellogenin and p53 in Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Chinese Journal of Environmental Science, 2012, 33(6): 1858-1864 (in Chinese)

[52] 王小芳. 鄰苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)對稀有鮈鯽的內分泌干擾效應研究[D]. 北京：中國科學院大學, 2013

Wang X F. Endocrine disruption by di-(2-ethylhexyl)-phthalate in Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [D]. Beijing: University of Chinese Academy of Sciences, 2013 (in Chinese)

[53] 楊亞洲. 三種農藥對稀有鮈鯽內分泌干擾效應初步研究[D]. 杭州：浙江師范大學, 2014

Yang Y Z. Preliminary study of endocrine disrupting effects of three pesticides on rare minnow [D]. Hangzhou: Zhejiang Normal University, 2014 (in Chinese)

[54] 郭勇勇, 周炳升. 苯并芘對稀有鮈鯽的內分泌干擾效應研究[J]. 環(huán)境科學學報, 2015, 35(9): 3006-3012

Guo Y Y, Zhou B S. Endocrine disruption effects of benzo (a) pyrene on Chinese rare minnow (Gobiocypris rarus) [J]. Acta Scientiae Circumstantiae, 2015, 35(9):3006-3012 (in Chinese)

◆

Standardization ofGobiocyprisrarusas Fish Model Used in Chemical Ecotoxicity Testing

Liang Yihuai1, Zhang Jingji1, Shi Lili2, Liu Jining2, Yang Hairong3, Zhao Yu3, Yang Hongbo4, Li Jun4, Zhao Yuyan5, Yin Haowen1,*

1. Bioassay and Safety Assessment Laboratory, Shanghai Academy of Public Measurement, Shanghai 201203, China2. Nanjing Institute of Environmental Sciences of the Ministry of Environmental Protection, Nanjing 210042, China3. Testing Evaluation Center Shenyang Research Institute of Chemical Industry CO., LTD., Shenyang 110021, China4. Guizhou Academy of Testing and Analysis, Guiyang 550002, China5. Centre Testing International (Suzhou), Suzhou 215121, China

26 November 2016 accepted 20 March 2017

Fish models play an important role in chemical ecotoxicity testing, but no Chinese native fish species have been fully agreed on in this area. As the Provisions on Environmental Administration of New Chemical Substances (the Order No. 7, released by the Ministry of Environmental Protection of China) require, native test organisms would be preferred in ecotoxicity testing. Rare minnow (Gobiocypris rarus) is one species of small freshwater fish endemic to China, and probably is able to serve as a promising standardized test fish. While the first national standard for fish acute toxicity test adopting rare minnow has been developed and issued in China, other work on standardization of testing methods relevant to rare minnow is still ongoing. This article explained the foundation to develop rare minnow as standardized test fish, analyzed and summarized the related standardization issues, and also pointed out the trend and the demand of research in future.

chemicals; Gobiocypris rarus; ecotoxicity; model organism; standardization

上海市科委技術標準專項 (15DZ0504100)

梁藝懷(1981-)，男，高級工程師，研究方向為生態(tài)毒理學，E-mail: liangyh@apm.sh.cn；

*通訊作者(Corresponding author)， E-mail: yinhw@apm.sh.cn

10.7524/AJE.1673-5897.20161126003

2016-11-26 錄用日期：2017-03-20

1673-5897(2017)2-002-09

X171.5

A

殷浩文(1959-)，男，教授級高級工程師，主要從事化學品風險評價和生態(tài)毒理學研究，發(fā)表學術論文50余篇，專著及合著6部。

梁藝懷, 張京佶, 石利利, 等. 稀有鮈鯽作為化學品生態(tài)毒性測試魚類模式生物的標準化實踐[J]. 生態(tài)毒理學報，2017, 12(2): 2-10

Liang Y H, Zhang J J, Shi L L, et al. Standardization of Gobiocypris rarus as fish model used in chemical ecotoxicity testing [J]. Asian Journal of Ecotoxicology, 2017, 12(2): 2-10 (in Chinese)