曹玉美，孫龍，蘭云，葉至樹，陸江，梁恒英，顏輝孟，伍少欽

（廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西 橫縣 530317）

CpG DNA 佐劑對(duì)豬偽狂犬病疫苗免疫效果的影響

曹玉美，孫龍，蘭云，葉至樹，陸江，梁恒英，顏輝孟，伍少欽

（廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)，廣西 橫縣 530317）

為了明確CpG DNA佐劑對(duì)豬偽狂犬病疫苗免疫效果的影響，本試驗(yàn)在豬偽狂犬病野毒陰性場(chǎng)隨機(jī)選擇了90頭育肥豬（分為3組，每組30頭），分別設(shè)為豬偽狂犬病疫苗+CpG DNA佐劑組（A），豬偽狂犬病疫苗組（B），間隔30d二次免疫豬偽狂犬病疫苗組（C），比對(duì)A、B、C組豬只在首免前、二免前、二免后30d、出欄前的豬偽狂犬病免疫抗體水平。結(jié)果顯示：在合格率方面，A組與C組相當(dāng)，且均優(yōu)于B組；在抗體平均值方面，A組能夠更快地刺激機(jī)體對(duì)豬偽狂犬病毒的免疫反應(yīng)，產(chǎn)生保護(hù)性抗體。結(jié)論：CpG DNA佐劑對(duì)豬偽狂犬病疫苗有增效作用，且免疫抗體上升快，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。

CpG DNA佐劑；豬偽狂犬病；疫苗；免疫抗體

豬偽狂犬病是一種由豬偽狂犬病毒引起的急性傳染病，可引發(fā)妊娠母豬流產(chǎn)、死胎及呼吸道癥狀。該病在豬群具有傳播快、死亡率高、流行范圍廣、傳播途徑多、病原體頑固等特點(diǎn)，每年給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的損失。目前，進(jìn)行疫苗接種是預(yù)防、控制甚至消滅偽狂犬病最主要的措施之一。國內(nèi)外已經(jīng)有很好的基因缺失弱毒苗可用于控制與凈化，但在育肥階段單純免疫一針豬偽狂犬病疫苗，所產(chǎn)生的免疫抗體水平有限，不足以保護(hù)整個(gè)育肥期；間隔30d免疫豬偽狂犬病疫苗，能獲得良好的免疫抗體，但是增加人工及疫苗等成本。CpG DNA是一種DNA序列，其核心是一些未甲基化的CpG基序，具有免疫激活功能。為了減少工作量、節(jié)約成本，探討CpG DNA佐劑對(duì)豬接種偽狂犬病疫苗是否有增效作用，在減少免疫次數(shù)的情況下，我們開展了本試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 試驗(yàn)豬：105～175日齡育肥豬，源自廣西農(nóng)墾永新畜牧集團(tuán)有限公司良圻原種豬場(chǎng)一個(gè)育肥場(chǎng)；飼養(yǎng)方式按良圻原種豬場(chǎng)既定操作規(guī)程進(jìn)行；CpG DNA佐劑：來源于某生物制品廠，豬偽狂犬病活疫苗：購自國外某疫苗公司，豬偽狂犬病gB抗體ELISA試劑盒。主要儀器設(shè)備：BioTek-ELx800儀，各種規(guī)格移液器，普通離心機(jī)。

1.2 試驗(yàn)分組及處理 選擇豬偽狂犬病野毒呈陰性的育肥豬90頭，隨機(jī)分為3組，每組30頭，分別設(shè)為豬偽狂犬病疫苗+CpG DNA佐劑組（A），豬偽狂犬病疫苗組（B），間隔30d二次免疫豬偽狂犬病疫苗組（C）。各組免疫時(shí)間及方式見表1。

1.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法 分別于免疫前、二免前、二免后30d、出欄前對(duì)每頭試驗(yàn)豬進(jìn)行前腔靜脈采血（2～3mL），血液置室溫下1h凝固后以3000r/min離心3min，取上清，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｑ鍣z測(cè)豬偽狂犬病免疫抗體，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。判斷標(biāo)準(zhǔn)：S/N值＜0.6為陽性，0.6～0.7為可疑，≥0.7為陰性；S/N值＜0.2為合格。

表1 各組免疫時(shí)間、方式

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件進(jìn)行單因子方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 免疫抗體陽性率及合格率 詳見表2、圖1和圖2。豬偽狂犬病抗體陽性率方面：免疫前，A、B、C組均處于低水平；二免前、二免后、出欄前，3組均呈上升趨勢(shì)。

豬偽狂犬病抗體合格率方面：免疫前，A、B、C組抗體均處于低水平；二免前，A組較B、C組抗體上升快，二免后30d，A、B、C組抗體均呈上升趨勢(shì)，且A、C組優(yōu)于B組；出欄前，A、C組抗體合格率達(dá)100%，免疫抗體水平相當(dāng)，遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于B組。

表2 各組免疫抗體陽性率及合格率情況

圖1 各組抗體陽性率趨勢(shì)

圖2 各組抗體合格率趨勢(shì)

2.2 免疫抗體平均值 由表3可知，首次免疫前抗體水平：A、B、C組差異不顯著；二免前：A組與B組差異不顯著，B組與C組差異不顯著，A組與C組差異顯著，從抗體平均值優(yōu)越性來看，A＞B＞C；二免后30d抗體：A、B、C組差異不顯著，從抗體平均值優(yōu)越性來看，A＞C＞B；出欄前抗體：A、B、C組差異不顯著，從抗體平均值優(yōu)越性來看，A＞C＞B。綜合所有數(shù)據(jù)分析得出：A組免疫抗體上升快，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，上市前維持了理想的抗體水平。

表3 各組免疫抗體差異性比較

3 討論

疫苗免疫效果受諸多因素的影響，包括疫苗質(zhì)量、動(dòng)物個(gè)體差異、母源抗體水平、免疫佐劑等。要想疫苗產(chǎn)生較高的、全面的特異性免疫反應(yīng)，一般同時(shí)需要具有體液免疫和細(xì)胞免疫，而疫苗佐劑能夠起到增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用。大量試驗(yàn)證實(shí)，CpG DNA佐劑的核心CpG基序具有免疫激活功能。

本研究主要比對(duì)了CpG DNA佐劑與豬偽狂犬病弱毒疫苗配伍免疫，豬偽狂犬疫苗一次免疫及豬偽狂犬病疫苗兩次免疫的效果，結(jié)果證實(shí)佐劑配伍的效果明顯。在合格率方面，CpG佐劑參與組的免疫效果與二次免疫豬偽狂犬病疫苗的效果相當(dāng)，均優(yōu)于偽狂犬病疫苗一次免疫組。在抗體平均值方面，CpG佐劑能夠更快地刺激機(jī)體對(duì)豬偽狂犬病毒的免疫反應(yīng)，較快地產(chǎn)生保護(hù)性抗體。盡管二針注射豬偽狂犬病疫苗仍能在出欄前有較高的免疫保護(hù)力，但是首免后的抗體上升時(shí)間較佐劑參與組慢，人工耗費(fèi)大。

豬偽狂犬病疫苗每1mL為2.25元，CpG每頭份（0.5mL）為4元。疫苗免疫應(yīng)激主要表現(xiàn)在當(dāng)天吃料停止，增重停止，推遲出欄，推遲出欄每天耗料約7.74元。因此，從免疫效果和成本上綜合選擇，A組只免疫一針，能夠保持較好的免疫水平，且可大幅度減少人工投入，值得推薦。

4 結(jié)論

CpG DNA佐劑對(duì)豬偽狂犬病疫苗有免疫增效作用，免疫抗體上升快，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，臨床上推薦使用。目前，CpG DNA佐劑在口蹄疫疫苗免疫方面的應(yīng)用較多，在偽狂犬病疫苗上的研究較少，相信在不久的將來，CpG DNA作為一種佐劑分子，將會(huì)運(yùn)用得更多，在控制疫病方面起到重要作用。

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S852.52

B

1001-8964（2017）06-0024-03

2017-02-22

受優(yōu)質(zhì)瘦肉型配套系種豬選育與產(chǎn)業(yè)化示范項(xiàng)目（桂科重14121003-2-3）

曹玉美（1983-），女，廣西賀州人，畜牧師，研究方向：規(guī)?；i場(chǎng)主要疫病控制與凈化。