黃景晟 陳遂 吳志成（廣州質量監(jiān)督檢測研究院，廣東 廣州 511477）

山竹果皮中羥基檸檬酸含量分析

黃景晟 陳遂 吳志成（廣州質量監(jiān)督檢測研究院，廣東 廣州 511477）

羥基檸檬酸主要來自于藤黃屬植物的果皮，如山竹、南瓜等。羥基檸檬酸能夠抑制ATP檸檬酸裂解酶作用，阻止乙酰輔酶A形成，故被利用于瘦身食品中。但過量攝取可能導致人體的傷害。

1 實驗材料

市售冷凍山竹、C18液相層析管柱、1.pH測定儀、高效能液相層析儀、恒溫水浴槽、超音波振蕩器、二次去離子水由Milli-QSP試藥級純水系統(tǒng)制得、精秤天秤、低速離心機、微電腦微波爐、旋渦混合器、減壓濃縮機、固相萃取管柱、均質機、紫外光-可見光光譜儀。

2 實驗方法

2.1 樣品前處理

冷凍山竹樣品解凍后，將果肉取出，只取果皮的部分進行實驗，將其剪至碎狀進行制備及萃取。

2.2 山竹中羥基檸檬酸的萃取

將前處理后的山竹果皮與水以1：2的比例混合，并以60℃水浴萃取20分鐘，接著以6μm的濾紙過濾，并重復一次此萃取及過濾步驟，再以活性碳去除山竹果皮萃取液中的花青素，并減壓濃縮至25mL，接著加入50mL乙醇去除萃取液中的果膠，經(jīng)離心后取上清液進行減壓濃縮至25mL，并儲存于4℃供作檢液。

2.3 山竹中羥基檸檬酸的分析

將前處理過后的樣品進行萃取，供作檢液。取樣品萃取檢液20μL注射至HPLC，以C18液相層析管柱，移動相為0.1%磷酸水溶液進行層析，并根據(jù)標準品波峰的滯留時間對照樣品的層析圖譜，以確定羥基檸檬酸的波峰，將其積分面積帶入標準溶液的檢量線中，計算出羥基檸檬酸的濃度。

表一、羥基檸檬酸之偵測極限與定量極限

2.4 以HPLC進行羥基檸檬酸含量分析

（1）移動相中磷酸比例的探討

使用0.0125,%、0.02%、0.05%、0.1%及0.2%phosphoricacid?solution作為移動相進行沖提，流速為1mL/min，比較羥基檸檬酸標準品波峰的分辨率及滯留時間，評估不同濃度下分析標準品的穩(wěn)定性，找出最佳的磷酸比例。

（2）管柱

以C18液相層析管柱分析羥基檸檬酸的標準溶液。

（3）偵測波長

以紫外光偵測器于波長210nm進行偵測。

（4）標準品檢量線的制作

精確秤取59.6%的羥基檸檬酸標準品10mg，以移動相定溶至5mL，并配制成7.45、11.175、14.9、29.8、59.7ppm及223.5、298、447、596、1192ppm，以0.22μm的濾膜過濾，使用前面所述的HPLC最適分析條件分析，以波峰面積為縱軸，以濃度為橫軸，制作成低濃度及高濃度兩種標準溶液的檢量線，以適合不同樣品的分析。

（5）計算公式

C：檢液中HCA的濃度(μg/mL)

D：稀釋倍數(shù)

V：定溶體積(mL)

W：檢體的重量(g)

3 山竹果皮中羥基檸檬酸的分析

山竹果皮萃取物使用C18管柱并以0.1%的磷酸水溶液為移動相進行分析的層析圖如圖1(a)所示，而含298ppmHCA標準品的山竹萃取物層析圖如圖1(b)所示，標準品的滯留時間為6.9分鐘。兩圖比較之后，可發(fā)現(xiàn)圖1(a)的圖譜中沒有羥基檸檬酸的波峰，因此顯示在山竹果皮中并未含有羥基檸檬酸。而在山竹中亦未測得羥基檸檬酸的存在。

圖1 、山竹果皮萃取液之高效液相層析圖

(a)不含HCA標準品；(b)含298 ppm HCA標準品移動項：0.1%磷酸水溶液

管柱：C18

偵測器：UV detectorat210 nm

流速：1.0mL/min

波峰名稱：1.羥基檸檬酸

4 結語

（1）使用HPLC-UV及InertSustain,C18管柱進行羥基檸檬酸層析的最適分析條件為：于波長210nm下，使用0.2%磷酸水溶液為移動相，以流速1.0mL/min進行沖提，以此磷酸濃度作為移動相較不易造成羥基檸檬酸的解離，且在進行樣品分析時具有良好的分離效果。

（2）本實驗檢測的樣品中，依其包裝標示的用量攝取，皆未超過國際權威組織的每日食用限量1500mg。

[1]高效液相色譜法測定陳皮多甲氧基黃酮部位中3種黃酮的含量[J].吳宏偉.藥物分析雜志.2007(12).

[3]柑橘皮中多甲氧基黃酮的體外抗氧化活性研究[J].單楊.食品科學.2007(08).