鐘方麗，金龍哲，王曉林*，薛健飛，戰(zhàn)凱利

（1.吉林化工學(xué)院 化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林 吉林 132022；2.延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 延吉 133001）

大孔吸附樹脂純化黃芪莖總黃酮的工藝及其抗氧化性

鐘方麗1，金龍哲2，王曉林1*，薛健飛1，戰(zhàn)凱利1

（1.吉林化工學(xué)院 化學(xué)與制藥工程學(xué)院，吉林 吉林 132022；2.延邊朝鮮族自治州農(nóng)業(yè)科學(xué)院，吉林 延吉 133001）

考察了LX-36型大孔吸附樹脂純化黃芪莖總黃酮的工藝條件及其體外抗氧化性。以總黃酮的吸附率及解吸率為參考指標(biāo)，采用單因素和正交試驗(yàn)法對(duì)黃芪莖總黃酮的純化工藝進(jìn)行優(yōu)化；通過黃芪莖總黃酮樣品液對(duì)DPPH·（二苯代苦味?；杂苫ⅰH（羥基自由基）的清除率來考察其體外抗氧化活性。結(jié)果表明，黃芪莖總黃酮的最佳純化工藝條件為：樣品液的生藥質(zhì)量濃度為0.06 g/mL，pH為3.5，樣品液體積/樹脂質(zhì)量為15 mL/g。振蕩吸附時(shí)間為3.0 h，洗脫劑為80%（體積分?jǐn)?shù)）的乙醇溶液，振蕩解吸時(shí)間為1 h，解吸液體積/樹脂質(zhì)量為25 mL/g，在此條件下，黃芪莖浸膏中總黃酮的含量由7.16%提高到13.55%；黃芪莖總黃酮樣品液對(duì)DPPH·、·OH具有較強(qiáng)的清除能力，而且其清除活性隨黃芪莖總黃酮樣品液質(zhì)量濃度的增加而增強(qiáng)。

黃芪莖；總黃酮；大孔吸附樹脂；純化；抗氧化

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2017-4-20 14:09:45

0 引言

黃芪是臨床應(yīng)用非常廣泛的常用中藥材之一，傳統(tǒng)上以黃芪的根部入藥，為藥食同源的益氣藥，東北地區(qū)產(chǎn)量很大，具有補(bǔ)氣固表、利尿等功效，用于氣虛乏力、內(nèi)熱消渴、表虛自汗等病癥的治療[1]，目前對(duì)于黃芪根的藥理作用、化學(xué)成分的研究較多[2-4]。黃酮類物質(zhì)是黃芪根中重要的活性成分之一，主要包括毛蕊異黃酮及苷、芒柄花素、芒柄花苷、金雀異黃酮、美的紫檀素等[5-7]。許多天然黃酮類物質(zhì)均具有較好的抗氧化性能及抗癌、抗病毒、增強(qiáng)人體免疫力、抗衰老、降血脂等多種生理活性[8-11]。研究表明，黃芪總黃酮是黃芪抗氧化、清除自由基的主要活性成分[12]，黃芪總黃酮具有抗腫瘤、抗損傷、抗突變、調(diào)節(jié)免疫、抗心肌缺血、保肝、抗炎等多種藥理作用[13-15]。大孔吸附樹脂是一種高分子聚合物吸附劑，其比表面積大而且具有多孔性，對(duì)天然活性物質(zhì)具有選擇性好、吸附容量大的優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于天然植物中總黃酮的純化[16-17]。黃芪地上部分的藤莖多作為廢物丟棄，本試驗(yàn)開展黃芪莖總黃酮純化工藝的研究，旨在變廢為寶，減少資源的浪費(fèi)，提高藥農(nóng)收益，為黃芪莖的深入研究和開發(fā)奠定良好的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘆丁對(duì)照品（供含量測(cè)定用）：成都曼思特生物科技有限公司；黃芪莖：吉林省均林中草藥種植有限公司；DPPH·：上海如吉生物科技有限公司；鄰二氮菲：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；水為重蒸餾水；大孔吸附樹脂（LX-19、LX-8、LSA-21、LSA-10、AB-8、LX-36、D101）：西安藍(lán)曉科技有限公司；硫酸亞鐵、硝酸鋁、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、無水乙醇等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

TU-1810型紫外可見分光光度計(jì)：北京普析通用儀器有限責(zé)任公司；KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；FA2004N型電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；SHZ-D型循環(huán)水真空泵：河南省鞏義市英峪儀器一廠；DMG-9076A型電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；SHA-B型水浴恒溫振蕩器：金壇市科析儀器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作及樣品總黃酮含量測(cè)定

稱取120℃干燥至恒質(zhì)量的蘆丁對(duì)照品10 mg，精確稱定，放入50 mL容量瓶中，加入60%的乙醇水溶液溶解并定容，搖勻，制成質(zhì)量濃度為0.20 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。精確量取上述對(duì)照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分別放入10 mL容量瓶中，先加入5%NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min，后加入10%Al（NO3）3溶液0.3 mL，搖勻，放置6 min，再加入4%NaOH溶液4.0 mL，最后加入60%乙醇水溶液定容，搖勻，放置15 min。以試劑空白為參比，按照分光光度法，在510 nm處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁對(duì)照品質(zhì)量濃度（mg/mL)為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線[18]?；貧w方程：A=12.915 C+0.013 6，R=0.999 4。結(jié)果表明蘆丁質(zhì)量濃度在0.002～0.010 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

量取黃芪莖提取液、大孔吸附樹脂吸附后的溶液和解吸液適量，分別放入10 mL容量瓶中，按上述顯色方法顯色，以相應(yīng)試劑為空白，在510 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算大孔樹脂對(duì)黃芪莖總黃酮的吸附率、解吸率及浸膏總黃酮含量。計(jì)算公式如下[19]：

式中：C0為起始黃芪莖提取液的總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；C1為大孔吸附樹脂吸附后溶液的總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；C2為解吸液的總黃酮質(zhì)量濃度，mg/mL；V1為樣品液的體積，mL；V2為解吸液的體積，mL；m1為解吸液干燥后固體的稱樣量，mg；m2為解吸液中總黃酮的測(cè)定量，mg。

1.3.2 大孔吸附樹脂的預(yù)處理

稱取 D-101、LX-19、AB-8、LX-8、LSA-10、LSA-21、LX-36等7種大孔吸附樹脂各40 g加入玻璃柱中，按參考文獻(xiàn)[19]進(jìn)行預(yù)處理，備用。

1.3.3 黃芪莖總黃酮提取液的制備

稱取黃芪莖粉末15 g，加入80%乙醇水溶液300 mL，在40℃水浴中超聲波高頻提取80 min，過濾，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.21～1.24（60℃，比重計(jì)法測(cè)定），蒸餾水定容至250 mL容量瓶中，備用。

1.3.4 大孔吸附樹脂純化黃芪莖總黃酮工藝條件的優(yōu)化

1.3.4.1 大孔吸附樹脂的選擇

稱取1.3.2節(jié)已預(yù)處理好的 7種濕樹脂各2 g，分別放入到錐形瓶中，每瓶中各加入生藥質(zhì)量濃度為0.06 g/mL的黃芪莖總黃酮提取液30 mL。室溫振蕩吸附2 h，靜置24 h，過濾，分別吸取每瓶的上清液適量，放入10 mL容量瓶中，按1.3.1節(jié)方法顯色，測(cè)定每種樹脂吸附后溶液的吸光度，計(jì)算每種樹脂對(duì)總黃酮的吸附率。

將吸附總黃酮的大孔吸附樹脂抽濾至干，再放回原來的錐形瓶中，每瓶中各加入80%乙醇水溶液50 mL，室溫振蕩解吸2 h，靜置24 h，過濾，分別吸取每瓶的上清液適量，放入10 mL容量瓶中，按1.3.1節(jié)方法顯色，測(cè)定各解吸液吸光度，計(jì)算每種樹脂對(duì)總黃酮的解吸率。

1.3.4.2 大孔吸附樹脂純化黃芪莖總黃酮的單因素試驗(yàn)

稱取若干份LX-36型大孔吸附樹脂，每份2 g，分別放入錐形瓶中，每瓶中分別加入30 mL黃芪莖總黃酮提取液，在其他試驗(yàn)條件固定的前提下，分別考察吸附時(shí)間（1、2、3、4、5、6、7 h）、提取液的pH值（3、4、5、6、7、8）、提取液的生藥質(zhì)量濃度（0.01、0.012、0.015、0.02、0.03、0.06、0.12、0.18 g/mL）、提取液體積/樹脂質(zhì)量（10、15、20、25、30 mL/g）對(duì)總黃酮吸附率的影響。在最佳吸附條件及其他試驗(yàn)條件固定的前提下，分別考察解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)（0、10%、30%、50%、70%、80%、90%、95%）、解吸液體積/樹脂質(zhì)量（5、15、20、25、30、35、40 mL/g）、解吸時(shí)間（0.5、1、2、3、4 h）對(duì)總黃酮解吸率的影響。

1.3.4.3 大孔吸附樹脂純化黃芪莖總黃酮的正交試驗(yàn)

通過上述單因素試驗(yàn)結(jié)果可知，提取液體積/樹脂質(zhì)量對(duì)黃芪莖總黃酮吸附率的影響最?。唤馕鼤r(shí)間、解吸液體積/樹脂質(zhì)量對(duì)黃芪莖總黃酮解吸率影響很小，所以沒有對(duì)上述3個(gè)因素進(jìn)行正交試驗(yàn)考察。在正交試驗(yàn)中選擇對(duì)純化效果影響較大的4個(gè)因素，即對(duì)提取液的生藥質(zhì)量濃度、提取液的pH值、吸附時(shí)間、解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)按四因素三水平進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，因素與水平見表1。

1.3.5 工藝驗(yàn)證性試驗(yàn)

稱取3份LX-36型大孔吸附樹脂各2 g，分別放入3個(gè)錐形瓶中，每瓶中分別加入生藥質(zhì)量濃度為0.06 g/mL的黃芪莖總黃酮提取液30 mL（解吸液體積/樹脂質(zhì)量為15 mL/g），調(diào)節(jié)提取液的pH為3.5，振蕩吸附3.0 h，過濾。然后將吸附總黃酮的大孔吸附樹脂抽濾至干，再放回原來的錐形瓶中，每瓶中各加入80%乙醇水溶液50 mL，振搖解吸1.0 h，過濾，按1.3.4.1節(jié)方法測(cè)定吸光度，計(jì)算黃芪莖總黃酮的吸附率和解吸率。分別吸取30 mL黃芪莖總黃酮提取液、解吸液倒入蒸發(fā)皿（質(zhì)量恒定）中水浴揮發(fā)，然后放入干燥箱中于60℃干燥至恒質(zhì)量，計(jì)算黃芪莖干浸膏中總黃酮的含量。

表1 正交試驗(yàn)因素與水平Table 1 Factors and levels of orthogonal experiment

1.3.6 體外抗氧化性試驗(yàn)

1.3.6.1 DPPH·清除率的測(cè)定試驗(yàn)

將黃芪莖總黃酮提取液配成質(zhì)量濃度為0.195、0.293、0.390、0.488、0.585 mg/mL的樣品液。分別吸取上述不同質(zhì)量濃度的黃芪莖樣品液2.0 mL，放于10 mL比色管中，加入0.2 mmoL/L的DPPH·溶液（新鮮配制）2.0 mL，混勻，在室溫下避光反應(yīng)30 min，以50%乙醇溶液作空白對(duì)照，在517 nm處測(cè)定其A樣品。其他條件不變，用2.0 mL蒸餾水代替測(cè)定A樣品中的黃芪莖樣品液，其他操作同上，在517 nm處測(cè)定A空白。分別吸取不同質(zhì)量濃度的黃芪莖樣品液2.0 mL于10 mL比色管中，加入2.0 mL無水乙醇，混勻，其他操作同上，在517 nm處測(cè)定A對(duì)照。

將Vc配成與黃芪莖提取液相同質(zhì)量濃度的對(duì)照溶液，按照上述方法同樣操作。計(jì)算黃芪莖總黃酮提取液、Vc溶液對(duì)DPPH·的清除率[20]。

DPPH·清除率/%=[(A空白-A樣品+A對(duì)照)/A空白]× 100。

1.3.6.2 ·OH清除率的測(cè)定試驗(yàn)

分別吸取1.3.6.1節(jié)中不同質(zhì)量濃度的黃芪莖樣品液1.0 mL，放入10 mL比色管中，加入1.0 mL濃度為1.5 mmoL/L的鄰二氮菲無水乙醇溶液，然后依次加入 2.0 mL磷酸鹽緩沖液（pH為 7.4～7.5）、濃度為0.75 mmoL/L的FeSO4溶液1.0 mL，混勻，加入1.0 mL 0.1%的H2O2，37℃下恒溫反應(yīng)1.0 h，于536 nm處測(cè)定其吸光度（As）。其他條件不變，用蒸餾水代替測(cè)定As中的黃芪莖樣品液，于536 nm處測(cè)定其吸光度（Ap）。其他條件不變，用蒸餾水替代測(cè)定Ap試驗(yàn)中的0.1%的H2O2，于536 nm處測(cè)定其吸光度（Ab）。

將Vc配成與黃芪莖提取液相同質(zhì)量濃度的對(duì)照溶液，按照上述方法同樣操作。計(jì)算黃芪莖總黃酮提取液、Vc溶液對(duì)·OH的清除率[21]。

·OH清除率/%=[(As-Ap)/(Ab-Ap)]×100。

2 結(jié)果與分析

2.1 大孔吸附樹脂的選擇試驗(yàn)結(jié)果

在相同的試驗(yàn)條件下，經(jīng)過靜態(tài)吸附與解吸附試驗(yàn)，考察7種不同型號(hào)的大孔吸附樹脂對(duì)黃芪莖總黃酮的靜態(tài)吸附率和解吸率，結(jié)果見表2。由表2可知，吸附率最高的大孔吸附樹脂為L(zhǎng)X-36（89.04%），然后是LSA-21（74.46%）。二者的解吸率分別為91.86%、94.74%，通過對(duì)吸附率和解吸率的綜合考慮，選擇LX-36型大孔吸附樹脂對(duì)黃芪莖總黃酮進(jìn)行純化工藝的優(yōu)化。

表2 大孔樹脂的選擇試驗(yàn)結(jié)果Table 2 The selection of macroporous resins

2.2 單因素試驗(yàn)

2.2.1 各因素對(duì)總黃酮吸附率的影響（圖1）

通過圖1A可知，在吸附時(shí)間為1～3 h范圍內(nèi)，總黃酮的吸附率隨著吸附時(shí)間的延長(zhǎng)而快速上升，當(dāng)吸附時(shí)間延長(zhǎng)到3 h時(shí)吸附率達(dá)到最高值，繼續(xù)延長(zhǎng)吸附時(shí)間總黃酮的吸附率略有下降，但變化不是很明顯，為了進(jìn)一步考察吸附時(shí)間對(duì)總黃酮吸附率的影響，選擇吸附時(shí)間為2.5、3.0、3.5 h進(jìn)行正交試驗(yàn)。通過圖1B可知，在pH3～8范圍內(nèi)，總黃酮的吸附率開始隨著pH值的上升而迅速提高，當(dāng)樣品液的pH值為4.0時(shí)吸附率最高，而后隨著樣品液pH值的持續(xù)升高吸附率快速下降，為了進(jìn)一步考察樣品液pH值對(duì)吸附率的影響，選擇樣品液pH值為3.5、4.0、4.5進(jìn)行正交試驗(yàn)。通過圖1C可知，隨著樣品液生藥質(zhì)量濃度的逐漸升高，總黃酮的吸附率迅速提高，當(dāng)樣品液生藥質(zhì)量濃度增加到0.06 g/mL時(shí)，吸附率達(dá)到了最高值，之后隨著樣品液生藥質(zhì)量濃度的繼續(xù)升高吸附率開始下降，為了進(jìn)一步考察樣品液生藥質(zhì)量濃度對(duì)吸附率的影響，選擇樣品液生藥質(zhì)量濃度為0.03、0.06、0.12 g/mL進(jìn)行正交試驗(yàn)。通過圖1D可知，當(dāng)樣品液體積/樹脂質(zhì)量在10～15 mL/g之間時(shí)，吸附率較高，當(dāng)樣品液體積/樹脂質(zhì)量在15 mL/g時(shí)，總黃酮的吸附率達(dá)到最大值92.00%，之后隨著樣品液體積的增加吸附率逐漸降低，當(dāng)樣品液體積/樹脂質(zhì)量提高到30 mL/g時(shí)，總黃酮的吸附率最低為80.19%，最大值與最低值之差為11.81%，在影響黃芪莖總黃酮吸附率的4個(gè)因素中影響最小，由試驗(yàn)結(jié)果可見，樣品液體積越大總黃酮的吸附率越低，而樣品液用量太少又影響生產(chǎn)效率，所以綜合考慮確定樣品液體積/樹脂質(zhì)量的最佳值為15 mL/g。

圖1 吸附時(shí)間、樣品液pH值、樣品生藥濃度及樣品液體積/樹脂質(zhì)量對(duì)總黃酮吸附率的影響Fig.1 Effects of absorption time，pH value of sample solution，concentration of crude extract and ratio of sample solution volume to resin weight on the absorption rate of TFs

2.2.2 各因素對(duì)總黃酮解吸率的影響（圖2）

通過圖2A可知，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高總黃酮的解吸率逐漸增大，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)升高到80%時(shí)解吸率達(dá)到最大值83.08%，繼續(xù)提高乙醇體積分?jǐn)?shù)，總黃酮的解吸率則開始逐漸下降，為了進(jìn)一步考察解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)解吸率的影響，選擇解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%、80%、85%進(jìn)行正交試驗(yàn)。通過圖2B可知，隨著解吸液體積/樹脂質(zhì)量的增大解吸率逐漸提高，當(dāng)解吸液體積/樹脂質(zhì)量增大到25 mL/g時(shí)解吸率達(dá)到了最高值90.67%，繼續(xù)增加解吸液體積/樹脂質(zhì)量的比值對(duì)解吸率影響不明顯，所以將解吸液體積/樹脂質(zhì)量的比值確定為25 mL/g。通過圖2C可知，當(dāng)解吸時(shí)間由0.5 h延長(zhǎng)到1 h時(shí)解吸率由64.38%提高到90.63%，繼續(xù)延長(zhǎng)解吸時(shí)間解吸率變化不明顯，所以將解吸時(shí)間確定為1 h。

2.3 正交試驗(yàn)

由表2可知，黃芪莖總黃酮的最佳純化工藝條件為A2B2C1D2，各個(gè)因素影響順序?yàn)椋航馕阂掖俭w積分?jǐn)?shù)>樣品液生藥質(zhì)量濃度>吸附時(shí)間>樣品液pH，最佳純化試驗(yàn)條件為：在100 mL具塞三角瓶中加入生藥質(zhì)量濃度為0.06 g/mL的黃芪莖總黃酮提取液，將其pH值調(diào)為3.5，樣品液體積/樹脂質(zhì)量為15 mL/g，振蕩吸附3.0 h，然后用體積分?jǐn)?shù)為80%的乙醇解吸液振蕩解吸1.0 h，解吸液體積/樹脂質(zhì)量為25 mL/g。

圖2 解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)、解吸液體積/樹脂質(zhì)量、解吸時(shí)間對(duì)總黃酮解吸率的影響Fig.2 Effects of volume fraction of ethanol，ratio of eluent solution volume to resin weight and desorption time on the desorption rate of TFs

2.4 工藝驗(yàn)證性試驗(yàn)

按照2.3節(jié)的最佳純化條件進(jìn)行3次工藝驗(yàn)證性試驗(yàn)，黃芪莖總黃酮的吸附率和解吸率分別為 92.67%、92.46%、92.96%和 93.14%、93.08%、93.97%，平均吸附率和解吸率分別為92.70%和93.40%，干浸膏中總黃酮含量由 7.16%提高到13.55%。

2.5 體外抗氧化性試驗(yàn)

維生素C（Vc）是天然植物中的一種水溶性抗氧化劑，也是血漿中最有效的抗氧化劑，其通過還原作用消除有害氧自由基的毒性，常用作研究天然產(chǎn)物抗氧化能力的對(duì)照品，所以本文中以Vc為對(duì)照測(cè)定黃芪莖總黃酮的體外抗氧化活性。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果及分析Table 2 The experimental results of orthogonal experiment

2.5.1 DPPH·清除率的測(cè)定試驗(yàn)（圖3）

DPPH·的乙醇溶液呈深紫色，在517 nm處有明顯吸收峰，當(dāng)在體系中加入抗氧化劑時(shí)，其溶液在517 nm處的吸光度值變小，從而可以測(cè)定黃芪莖總黃酮樣品液對(duì)DPPH·的清除能力[22]，由圖3可知，隨著總黃酮樣品液和Vc溶液質(zhì)量濃度的增加，二者對(duì)DPPH·的清除率逐漸提高，當(dāng)二者的質(zhì)量濃度達(dá)到0.585 mg/mL時(shí)，其對(duì)DPPH·的清除率分別為88.91%、91.30%，但總黃酮樣品液質(zhì)量濃度為 0.195 mg/mL時(shí)，對(duì) DPPH·的清除率為84.96%，遠(yuǎn)高于同質(zhì)量濃度Vc溶液對(duì)DPPH·的清除率，由此可見，二者對(duì)DPPH·均具有很強(qiáng)的清除活性，而且低濃度的黃芪莖總黃酮樣品液對(duì)DPPH·就具有較強(qiáng)的清除能力，而且明顯強(qiáng)于Vc溶液。

2.5.2 ·OH清除率的測(cè)定試驗(yàn)（圖4）

·OH是一種活潑自由基，對(duì)人體健康危害較大。本試驗(yàn)采用鄰二氮菲-亞鐵化學(xué)法測(cè)定黃芪莖總黃酮樣品液對(duì)·OH的清除能力[23-24]，由圖4可知，隨著總黃酮樣品液和Vc溶液質(zhì)量濃度的增加，二者對(duì)·OH的清除率逐漸提高，其中黃芪莖總黃酮樣品液隨著質(zhì)量濃度的增加其對(duì)·OH的清除率增加趨勢(shì)非常明顯，當(dāng)其質(zhì)量濃度由0.195 mg/mL增加到0.585 mg/mL時(shí)，其對(duì)·OH的清除率由5.94%提高到77.27%，而同質(zhì)量濃度的Vc溶液對(duì)·OH的清除率僅由21.14%提高到41.28%，由此可見雖然二者對(duì)·OH均具有清除活性，但高濃度的黃芪莖總黃酮樣品液對(duì)·OH清除能力明顯強(qiáng)于Vc溶液。

圖3 提取液及Vc對(duì)照液對(duì)DPPH·的清除能力Fig.3 The DPPH·scavenging activity of extraction

圖4 提取液及Vc對(duì)照液對(duì)·OH的清除能力Fig.4 The·OH scavenging activity of solution and Vc extraction solution and Vc

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用大孔吸附樹脂法對(duì)黃芪莖總黃酮的純化工藝進(jìn)行了探索，并通過考察樣品液對(duì)DPPH·和·OH的清除率探索了其體外抗氧化活性。結(jié)果表明，LX-36型大孔吸附樹脂對(duì)黃芪莖總黃酮純化的最佳工藝條件：樣品液的生藥質(zhì)量濃度為0.06 g/mL，樣品液體積/樹脂質(zhì)量為15 mL/g，體系pH為3.5，吸附時(shí)間3.0 h，解吸液乙醇體積分?jǐn)?shù)為80%，解吸液體積/樹脂質(zhì)量為25 mL/g，解吸時(shí)間為1.0 h。在上述工藝條件下LX-36型大孔吸附樹脂對(duì)黃芪莖總黃酮的平均吸附率和解吸率分別為92.70%和93.40%，純化后的干浸膏中總黃酮的含量由7.16%提高到13.55%。黃芪莖總黃酮樣品液對(duì)DPPH·和·OH均具有顯著的清除能力，且低濃度樣品液對(duì)DPPH·清除能力明顯強(qiáng)于Vc溶液，高濃度樣品液對(duì)·OH清除能力明顯強(qiáng)于Vc溶液。

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PURIFICATION OF TOTAL FLAVONOIDS FROM ASTRAGALUS STEMS WITH MACROPOROUS RESIN AND THEIR ANTIOXIDANT ABILITY

ZHONG Fangli1，JIN Longzhe2，WANG Xiaolin1，XUE Jianfei1，ZHAN Kaili1
（1.School of Chemistry and Pharmaceutical Engineering，Jilin Institute of Chemical Technology，Jilin 132022，China；2.Yanbian Academy of Agricultural Science，Yanji 133001，China）

The purification technology of total flavonoids（TFs） from Astragalus stems with LX-36 type macroporous resin and theirs antioxidant ability in vitro were investigated in this study.The purification process of TFs was optimized by single factor and orthogonal test while adsorption and desorption ratio as evaluation indexes.The antioxidant ability of TFs extraction solution in vitro were measured by DPPH· and·OH scavenging experiments.The results showed that the optimum purification conditions of TFs were as follows：the crude drug concentration of 0.06 g/mL；pH of sample solution of 3.5；solution volume to resin mass ratio of 15 mL/g;shaking adsorption time of 3.0 h；eluent of 80%ethanol solution（volume fraction）；eluent volume to resin mass ratio of 25 mL/g and shaking desorption time of 1.0 h，respectively.The purity of TFs from Astragalus stems extracts could be enhanced from 7.16%to 13.55%under the optimal conditions.The TFs in Astragalus stems had strong scavenging activity on DPPH·and·OH，and the scavenging activity was increased with the increasing of TFs concentration in the extraction solution.

Astragalus stems；total flavonods；macroporous resin；purification；antioxidant activity

TS201.2

B

1673-2383(2017)02-0088-07

http://kns.cnki.net/kcms/detail/41.1378.N.20170420.1409.030.html

2016-08-22

鐘方麗（1970-），女，山東安丘人，教授，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)成分的分離與生物活性研究。

*通信作者