杜 冰 謝湘林 方圣博 宮 睿 劉宏雁

(吉林大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室, 吉林 長(zhǎng)春 130021)

血栓心脈寧治療缺血再灌注大鼠血管性癡呆的機(jī)制

杜 冰 謝湘林 方圣博 宮 睿 劉宏雁

(吉林大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室, 吉林 長(zhǎng)春 130021)

目的 研究血栓心脈寧對(duì)缺血再灌注致血管性癡呆(VD)大鼠腦組織乙酰膽堿(Ach)、膽堿酯酶(AchE)、自由基及相關(guān)酶的影響，探討血栓心脈寧對(duì)大鼠VD治療作用機(jī)制。方法 雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)夾閉再灌注同時(shí)腹腔注射硝普鈉建立VD大鼠模型，按體重隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(吡拉西坦0.5 g/kg)、小劑量組(血栓心脈寧1.1 g/kg)和大劑量組(血栓心脈寧2.2 g/kg)，連續(xù)灌胃給藥2個(gè)月，行為學(xué)實(shí)驗(yàn)后，檢測(cè)腦組織Ach、AchE、自由基及相關(guān)酶。結(jié)果 與模型組相比，小劑量組大鼠腦組織AchE活性及Ach含量無(wú)明顯變化，大劑量組AchE活性降低，Ach含量升高(均P<0.05)；小劑量組大鼠總超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量均無(wú)明顯變化，大劑量組大鼠SOD活性升高(P<0.05)，MDA含量降低(P<0.05)；小、大劑量組大鼠腦組織過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性均無(wú)明顯變化(P>0.05)。結(jié)論 血栓心脈寧治療大鼠VD機(jī)制可能與其提高抗自由基酶活性、減少自由基損傷及降低腦組織AchE活性，提高Ach含量有關(guān)。

血栓心脈寧；血管性癡呆；膽堿酯酶；自由基

血管性癡呆(VD)是由于缺血性腦卒中、出血性腦卒中和腦區(qū)低灌注等腦血管疾病所致的嚴(yán)重認(rèn)知功能障礙綜合征，在我國(guó)，現(xiàn)已成為僅次于阿爾茨海默病(AD)的第二大老年癡呆病癥。血栓心脈寧以珍貴傳統(tǒng)中藥材為原料制作而成，其中主要成分川芎、毛冬青、水蛭、丹參等，具有益氣活血，開(kāi)竅止痛的功效，適用于腦血栓、冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病、心絞痛等病癥，其治療機(jī)制主要有改善血液循環(huán)系統(tǒng)、減少血栓形成、抗自由基損傷等。研究組前期實(shí)驗(yàn)證實(shí)血栓心脈寧對(duì)缺血再灌注致大鼠VD有治療作用〔1，2〕，本實(shí)驗(yàn)從膽堿系統(tǒng)及自由基方面探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥品及試劑 血栓心脈寧片(粉末) 由吉林華康藥業(yè)股份有限公司提供，批號(hào)：110901；吡拉西坦片由天津今世制藥有限公司提供，批號(hào)H12020667；考馬斯亮藍(lán)蛋白測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131108；乙酰膽堿酯酶(AchE)測(cè)定試劑盒，批號(hào)20131111；乙酰膽堿(Ach)測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131114；過(guò)氧化氫酶(CAT)測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131111；總超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131109 ；谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131106；丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131207；Na+-K+-ATPase測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131114；Ca2+-Mg2+-ATP測(cè)定試劑盒，批號(hào)：20131114，以上試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)Wistar大鼠100只，體重250～350 g,雄性，合格證號(hào)SCXK-(吉)2007-0003，由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 Wistar大鼠雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)夾閉再灌注同時(shí)腹腔注射硝普鈉降壓法建立VD大鼠模型，造模成功后的65只大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組，模型組，陽(yáng)性對(duì)照組(吡拉西坦片0.5 g/kg)，小劑量組(血栓心脈寧1.1 g/kg)，大劑量組(血栓心脈寧2.2 g/kg)，上述藥品以0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制，連續(xù)灌胃給藥2個(gè)月，制備腦勻漿，按試劑盒說(shuō)明書(shū)測(cè)定AchE、Ach、MDA、SOD、CAT、GSH-Px、Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中由于動(dòng)物死亡等原因，最終各組動(dòng)物數(shù)量為假手術(shù)組12只，模型組10只，陽(yáng)性對(duì)照組8只，小劑量組7只，大劑量組7只。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0軟件包進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 膽堿能系統(tǒng)含量測(cè)定 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織AchE活性、Ach含量明顯降低(均P<0.05)；與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組及小劑量組大鼠腦組織AchE活性及Ach含量無(wú)明顯變化(P>0.05)；大劑量組大鼠腦組織AchE活性降低(P<0.05)，Ach含量明顯升高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

2.2 自由基及其相關(guān)酶的含量測(cè)定 與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織MDA含量明顯升高(P<0.01)，SOD活性降低(P<0.05)。與模型組相比較，陽(yáng)性對(duì)照組及小劑量組大鼠腦組織MDA無(wú)明顯變化，SOD含量有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；大劑量組大鼠腦組織MDA含量下降(P<0.05)，SOD活性升高(P<0.05)。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織GSH-Px、CAT、Na+-K+-ATPase、 Ca2+-Mg2+-ATPase明顯降低(P<0.05)。與模型組比較，陽(yáng)性對(duì)照組Na+-K+-ATPase、 Ca2+-Mg2+-ATPase活性升高(P<0.05)，小劑量和大劑量組大鼠腦組織GSH-Px、CAT、Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase無(wú)明顯變化(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組腦組織AchE和Ach的水平比較

與模型組比較：1)P<0.05，下表同

表2 各組腦組織自由基及相關(guān)酶的水平比較±s)

3 討 論

本次實(shí)驗(yàn)采用雙側(cè)頸總動(dòng)脈反復(fù)夾閉再開(kāi)放，合并腹腔注射硝普鈉致大鼠VD模型，此模型可模擬急性、短時(shí)間缺血性疾病，例如血壓降低、短暫性腦缺血發(fā)作、急性缺血性腦卒中等引起的VD。研究發(fā)現(xiàn)，膽堿能系統(tǒng)與記憶的形成和保存有著密切聯(lián)系，膽堿能神經(jīng)通路參與學(xué)習(xí)記憶的過(guò)程，VD伴有腦組織膽堿系統(tǒng)功能降低〔3～6〕。本研究大鼠腦組織AchE活性明顯降低，Ach含量明顯降低，血栓心脈寧對(duì)大鼠膽堿能神經(jīng)通路起到了保護(hù)和改善作用。腦組織是最容易受氧化損傷的組織，大鼠腦缺血再灌流的急性期大量的自由基形成，自由基在VD發(fā)生和治療中起到重要作用〔7～9〕，其對(duì)腦組織的損害集中表現(xiàn)為對(duì)生物膜的攻擊，自由基在缺血組織中急速蓄積，破壞周?chē)?xì)胞的生物膜結(jié)構(gòu)，引起細(xì)胞壞死。MDA是生物體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)的氧化終產(chǎn)物，會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性，其含量高低可以反映氧自由基水平和脂質(zhì)過(guò)氧化的強(qiáng)度和速度，是了解氧自由基致機(jī)體組織細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)之一〔10,11〕。機(jī)體的內(nèi)源性抗氧化酶，研究較多的是SOD和GSH-Px，SOD能消除生物體在新陳代謝過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)，GSH-Px是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的一種重要的過(guò)氧化物分解酶，可以保護(hù)細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)及功能不受過(guò)氧化物的干擾及損害〔12～14〕。ATP酶是分布在組織細(xì)胞核細(xì)胞器生物膜上的一種內(nèi)膜蛋白，有Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶等，腦組織缺血缺氧時(shí)，造成的腦能量障礙、興奮性氨基酸(EAA)的大量釋放和自由基的過(guò)度產(chǎn)生會(huì)使ATP酶活性下降，引發(fā)鈣超載等過(guò)程引起神經(jīng)元細(xì)胞凋亡，發(fā)生不可逆的損傷〔15,16〕。本研究表明，大劑量血栓心脈寧治療VD大鼠與減少腦內(nèi)自由基損傷有關(guān)，小劑量血栓心脈寧改善缺血再灌注VD大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能與提高膽堿系統(tǒng)功能，降低自由基損傷無(wú)關(guān)，其他機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。

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〔2015-11-14修回〕

(編輯 曹夢(mèng)園)

吉林省中醫(yī)藥管理局科研基金資助(2010-115)

劉宏雁(1962-),女,教授,博士,主要從事中樞藥理方面的研究。

杜 冰(1990-),女,碩士,主要從事中樞藥理的實(shí)驗(yàn)研究。

R285；R332

A

1005-9202(2017)11-2652-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.11.022