王昆侖 莫為春 高明強 吳士青 宋衛(wèi)平 王 偉

(復(fù)旦大學附屬金山醫(yī)院急診醫(yī)學科，上海 201508)

瑞舒伐他汀鈣對老年膿毒癥模型大鼠急性肺損傷的干預(yù)作用

王昆侖 莫為春 高明強 吳士青 宋衛(wèi)平 王 偉

(復(fù)旦大學附屬金山醫(yī)院急診醫(yī)學科，上海 201508)

目的 探討瑞舒伐他汀鈣對老年膿毒癥大鼠急性肺損傷的干預(yù)作用。方法 將72只老年雄性Wistar大鼠隨機分為假手術(shù)組、模型組、瑞舒伐他汀鈣干預(yù)組，每組24只。干預(yù)組及模型組采用改良盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)方法建立老年膿毒癥ALI大鼠模型，假手術(shù)組建立假手術(shù)模型。術(shù)前1 w干預(yù)組開始每日給予瑞舒伐他汀鈣，劑量2.5 mg·kg-1·d-1。模型組和假手術(shù)組同一時間給予等量生理鹽水。實驗前24 h灌注藥物后禁食，自由飲水。每組大鼠平均分為3個亞組，分別于術(shù)后6、12和24 h取材。應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清細胞因子白細胞介素(IL)-2、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α水平、檢測動脈血氧分壓(PaO2)并觀察肺組織的病理改變。結(jié)果 模型組PaO2明顯低于假手術(shù)組和干預(yù)組(P<0.05)，且隨時間延長而降低。模型組血清細胞因子IL-2、IL-6、TNF-α水平高于假手術(shù)組和干預(yù)組(P<0.05)，與模型組比，干預(yù)組肺損傷程度較輕。結(jié)論 瑞舒伐他汀鈣能抑制老年膿毒癥大鼠ALI的炎癥反應(yīng)、改善氧分壓，進而減輕ALI。

膿毒癥；急性肺損傷；瑞舒伐他汀鈣；細胞因子

膿毒癥是機體各種促炎癥介質(zhì)，如腫瘤壞死因子(TNF)-α、白細胞介素(IL)-6、IL-1、IL-2等大量釋放，引起全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)，導(dǎo)致炎癥擴散，死亡率仍然高達35%～70%。肺是膿毒癥最易受損的器官，急性肺損傷(ALI)出現(xiàn)最早，發(fā)生率最高。應(yīng)用藥物抑制炎癥因子釋放以及阻斷炎癥級聯(lián)反應(yīng)的方法，成為治療膿毒癥的熱點。他汀類藥物除調(diào)脂作用外，還有其他生物學作用，如減少血管炎癥的氧化應(yīng)激反應(yīng)，改善內(nèi)皮細胞功能，調(diào)節(jié)細胞免疫功能等。研究證實脂溶性辛伐他汀能改善膿毒癥動物模型的預(yù)后，提高生存率〔1〕。本研究擬采用水溶性瑞舒伐他汀鈣干預(yù)雄性老年Wistar膿毒癥ALI大鼠，觀察各項細胞因子的變化情況，分析其在老年膿毒癥大鼠ALI中的價值。

1 資料與方法

1.1 實驗動物與模型制備 清潔級老年雄性老年Wistar大鼠72只，體重(250±50)g，由中國醫(yī)學科學院上海實驗動物部提供。飼養(yǎng)于恒溫(20℃)清潔飼養(yǎng)室，12 h∶12 h光-暗周期，給予經(jīng)高壓滅菌處理的大鼠飼料，充足水分，通風良好，溫度適宜。本實驗符合國家衛(wèi)生研究所實驗動物使用指南要求，方案得到復(fù)旦大學附屬金山醫(yī)院動物應(yīng)用倫理委員會許可。實驗分組：將72只老年雄性Wistar大鼠隨機分成3組，即假手術(shù)組、模型組、瑞舒伐他汀鈣干預(yù)組，每組24只。采用改良盲腸結(jié)扎穿孔術(shù)(CLP)建立膿毒癥大鼠模型，對假手術(shù)組建立假手術(shù)模型。

1.2 實驗指標 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清標本中TNF-α、IL-2、IL-6水平。應(yīng)用血氣分析儀測定動脈血氧分壓(PaO2)。右肺以10%甲醛固定，用于病理組織檢查，光鏡下觀察肺組織炎癥細胞浸潤情況。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0軟件進行單因素方差分析及q檢驗。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般表現(xiàn) 在CLP后大鼠出現(xiàn)精神倦怠、躁動、寒戰(zhàn)、腹脹、眼角分泌物增多、豎毛等表現(xiàn)，術(shù)畢觀察腹腔有膿液滲出，惡臭，盲腸腫脹變黑，發(fā)生壞疽、粘連的認為模型復(fù)制成功〔2〕。

2.2 各組各時點TNF-α水平比較 模型組6 h TNF-α水平即明顯增高，12 h達高峰，24 h后較前減少；假手術(shù)組、干預(yù)組6、12、24 h水平均低于模型組(P<0.05)。假手術(shù)組TNF-α水平與模型組、干預(yù)組相比均明顯降低(P<0.05)；干預(yù)組 TNF-α水平較模型組降低(P<0.05)，見表1。

表1 各組不同時間點血清細胞因子TNF-α、 IL-2、IL-6水平

與模型組比較：1)P<0.05；與假手術(shù)組比較：2)P<0.05

2.3 各組各時點IL-2水平比較 模型組6 h、12 h IL-2水平明顯進行性增高，24 h達高峰；假手術(shù)組、干預(yù)組6 h、12 h及24 h水平均低于模型組(P<0.05)。假手術(shù)組IL-2水平與模型組、干預(yù)組相比均明顯降低(P<0.05)，見表1。

2.4 各組各時點IL-6水平比較 模型組6 h、12 h IL-6水平明顯進行性增高，24 h達高峰；假手術(shù)組6 h、12 h及24 h水平較模型組、干預(yù)組明顯減少(P<0.05)，見表1。

2.5 肺組織病理學觀察 模型組：肺泡隔增寬，肺間質(zhì)水腫，肺泡腔內(nèi)見中性粒細胞和大量紅細胞滲出。假手術(shù)組：肺泡結(jié)構(gòu)清晰，肺泡腔內(nèi)未見紅細胞。干預(yù)組：病變較模型組減輕，肺間質(zhì)血管擴張充血，肺泡腔內(nèi)見少量中性粒細胞滲出，見圖1。

圖1 三組大鼠肺組織光鏡下病理改變(HE，×200)

3 討 論

本實驗采用CLP法復(fù)制大鼠膿毒癥模型，通過盲腸的結(jié)扎和穿孔，使有菌的腸內(nèi)容物污染腹腔造成彌漫性腹膜炎，誘發(fā)廣泛的全身性炎性反應(yīng)。根據(jù)術(shù)后大鼠的表現(xiàn)及處死后解剖所見，符合膿毒癥動物模型的基本要求〔3〕，更能夠反映膿毒癥的病理生理變化。建立標準化的膿毒癥動物模型是探索膿毒癥病理生理學機制和防治措施的重要環(huán)節(jié)。膿毒癥動物模型目前常用的有內(nèi)毒素誘導(dǎo)、細菌注射、腹膜炎模型即盲腸結(jié)扎穿孔模型。內(nèi)毒素誘導(dǎo)及細菌注射方法因內(nèi)毒素及細菌毒力有所不同，且實驗動物對外源性致病因子抵抗力的不同，在多次建造模型中容易出現(xiàn)誤差。而使用CLP的方法使大鼠盲腸穿孔后，通過外科手術(shù)而引起腹腔感染，模型操作起來相對簡便，這與臨床上化膿性闌尾炎穿孔形成的腹膜炎相似〔4〕。本研究提示，TNF-α參與了膿毒癥的病理生理過程，是膿毒癥時起著非常重要作用的炎癥因子，是一個調(diào)節(jié)炎癥或與炎癥相關(guān)反

應(yīng)的強有力的中間介質(zhì)，也是炎癥反應(yīng)的最初啟動者〔5〕。膿毒癥時IL-6水平上升快，且與大鼠病情呈正相關(guān)，參與CLP后炎癥反應(yīng)的全過程，提示瑞舒伐他汀鈣有抑制膿毒癥大鼠炎癥因子釋放作用。Hilgendorff等〔6〕研究發(fā)現(xiàn)，在激活的人體單核細胞，他汀類藥物能夠阻止核轉(zhuǎn)錄因子(NF)-κB的信號通路，抑制NF-κB的活性，進而抑制炎癥反應(yīng)的編碼蛋白的表達。

1 Grion CM，Cardoso LT.Lipoproteins and CETP levels as risk factors for severe sepsis in hospitalized patients〔J〕.Eur J Clin Invest,2010;40(4):330-8.

2 耀 卿，李 磊．膿毒癥動物模型制作方略及應(yīng)用〔J〕.中華實驗外科雜志，2006;23(12):1433.

3 Gondon BR，Parker TS，Levine DM，etal.Relationship of hypolipidemia to cytokine concentrations and outcomes in critically ill surreal patients 〔J〕.Crit Care Med，2001;29(8):1563-8.

4 Mackenzie L，Lever A.Management of sepsis 〔J〕.BMJ，2007;335(4):879-83.

5 Dunham CM，F(xiàn)ealk MH，Sever WE，etal.Following severe injury，hypocholesterolemia improves with convalescence but persists with organ failure or onset of infection 〔J〕.Crit Care Med，2003;7(6):145-53.

6 Hilgendorff A，Muth H，Parviz B，etal.Statins differ in their ability to block NF-kappaB activation in human blood monocytes 〔J〕.Int J Clin Pharacolther，2003;41(9):397-401.

〔2015-12-21修回〕

(編輯 曹夢園)

王 偉(1968-)，男，碩士，主任醫(yī)師，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事急診危重病診治及研究。

王昆侖(1982-)，男，主治醫(yī)師，主要從事急診危重病的救治研究。

R459.7

A

1005-9202(2017)11-2632-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.11.013