賈東升，崔施展，謝曉亮，溫春秀，李榮喬，劉靈娣，田偉

（河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

黑枸杞花色苷對酒精性肝損傷的保護(hù)作用

賈東升，崔施展，謝曉亮*，溫春秀，李榮喬，劉靈娣，田偉

（河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，藥用植物研究中心，河北石家莊050051）

研究黑枸杞花色苷（black wolfberry anthocyanins，BWA）對酒精性肝損傷的保護(hù)作用。將受試小鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、BWA低中高劑量組及陽性對照組，連續(xù)灌胃30 d后，除空白組外，均給予體積分?jǐn)?shù)56%乙醇溶液16 mL/kg灌胃，建立急性酒精性肝損傷模型，在模型建立12 h后，脫臼處死，測定血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspartate transaminase，AST）活性及腫瘤壞死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì)胞介素6（Interleukin-6，IL-6）水平，肝組織中丙二醛（Malonaldehyde，MDA）、還原型谷胱甘肽（Reduced glutathione，GSH）水平及超氧化物歧化酶（SuperoxideDismutase，SOD）活性。結(jié)果顯示，BWA可顯著降低血清中ALT、AST活性及TNF-α、IL-6水平（P<0.05）；降低肝組織中MDA水平（P<0.05），提高SOD活性及GSH水平（P<0.05）。BWA對酒精誘發(fā)的酒精性肝損傷具有較好的保護(hù)作用。

黑枸杞；花色苷；酒精性肝損傷；保護(hù)作用

長期酗酒或一次性大量飲酒均可造成肝臟損傷，誘發(fā)酒精性肝病，主要包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎及酒精性肝硬化，酒精性肝病已經(jīng)成為僅次于病毒性肝炎的第二大肝病[1]。目前針對酒精引起的肝臟疾病除戒酒外尚無其他功效確切的治療及預(yù)防方法，但當(dāng)代社會工作及生活的需要，戒酒在一定程度上存在困難，因此尋求一種純天然、安全可靠、無成癮性及依賴性的食品或藥品，用于預(yù)防或改善酒精性肝損傷，就顯得極為迫切。

黑枸杞營養(yǎng)豐富，味美多汁，具有較高的食用價值，較普通枸杞含有大量的原花青素及花色苷，具有抗氧化、抗衰老、抗腫瘤、降低血脂等多種生物學(xué)功能[2-3]。黑枸杞花色苷（Blackwolfberryanthocyanins，BWA）是以黑枸杞為原料制備的純天然植物提取物，具有安全可靠、無毒副作用等特點(diǎn)，本研究通過觀察BWA對酒精性肝損傷模型小鼠的干預(yù)作用，研究BWA的保肝護(hù)肝作用，為后期開發(fā)具有緩解肝損傷，保護(hù)肝臟功效的功能性食品或普通食品提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

ICR小鼠（雄性，體重20 g～25 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動物合格證：SCXK（京）2016-0017），室溫20℃～25℃，全價飼料，飲食及飲水不限，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d。

1.2 材料與試劑

黑枸杞：采摘自河北省農(nóng)林科學(xué)院實(shí)驗(yàn)園；聯(lián)苯雙酯：美國Sigma；藥用乙醇（批號：160524）：華北制藥集團(tuán)有限責(zé)任公司；生理鹽水（批號：20160526）：石家莊制藥集團(tuán)有限公司；水為高純水；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.3 儀器與設(shè)備

ALT、AST、MDA、GSH、SOD、TNF-α、IL-6測定試劑盒：購于南京建成生物工程研究所；電子天平（萬分之一）：梅特勒托利多；752PC型紫外光可見分光光度計：上海光譜儀器有限公司。

1.4 BWA的制備[4]

稱取黑枸杞10 g，加入150 mL 80%乙醇溶液（體積比），40℃避光超聲提取30 min，4 000 r/min，離心15 min，取上清，40℃水浴避光旋蒸濃縮，減壓干燥，即得BWA。

1.5 動物給藥及分組

選取雄性的ICR級小鼠60只，隨機(jī)分為6組：空白組、模型組、BWA低中高劑量組（50、100、150 mg/kg）、陽性對照組（聯(lián)苯雙酯，150 mg/kg），連續(xù)灌胃30 d后，除空白組外，均給予體積分?jǐn)?shù)50%乙醇溶液16 mL/kg灌胃，建立酒精性肝損傷模型。

1.6 測定指標(biāo)

造模12 h后取小鼠眼球靜脈血0.8 mL～1.0 mL，分離血清，測定ALT、AST活性及TNF-α、IL-6水平，斷髓處死小鼠，迅速剖腹取出肝臟，取肝組織100 mg，加入9倍量生理鹽水制備10%組織勻漿，離心取上清，4℃保存，測定肝組織勻漿中MDA、GSH及SOD水平及活性，所有操作按試劑盒說明書完成。

1.7 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，各組間差異顯著性采用ANOVA檢驗(yàn)，組間差異比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BWA對小鼠血清AST、ALT活性的影響

與空白組比較，模型組AST、ALT活性及TNF-α、IL-6水平均顯著升高（P<0.01），表明造模成功。與模型組比較，BWA低劑量AST、ALT活性及TNF-α、IL-6水平無顯著性差異（P＞0.05）；BWA中高劑量組與模型組比較AST、ALT活性及TNF-α、IL-6水平差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；與陽性對照組比較，BWA高劑量組對AST、ALT活性的調(diào)節(jié)功能相近，BWA各劑量組對炎性因子的調(diào)節(jié)作用優(yōu)于陽性對照組。BWA對AST、ALT活性及TNF-α、IL-6水平的調(diào)節(jié)作用具有一定的劑量效應(yīng)，結(jié)果見表1。

2.2 BWA對小鼠肝臟MDA、GSH水平及SOD活性的影響

與空白組比較，模型組MDA、GSH含量及SOD活性具有顯著性差異（P<0.01），BWA各劑量與模型組比較均可顯著的降低酒精所致肝損傷小鼠肝組織中MDA含量（P<0.05）；BWA低劑量與模型組比較GSH含量不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；BWA中高劑量可顯著提高肝勻漿中GSH含量（P<0.01）；BWA各劑量與模型組比較均可顯著提升小鼠肝組織中SOD活性（P< 0.01）；與陽性對照比較，BWA對MDA、GSH含量及SOD活性的調(diào)節(jié)作用不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見表2。

表1 BWA對酒精性肝損傷小鼠血清AST、ALT活性及炎性因子水平的影響（±s）Table 1 Effect of BWA on serum AST，ALT activity and inflammatory factors in mice with alcoholic liver injury（±s）

表1 BWA對酒精性肝損傷小鼠血清AST、ALT活性及炎性因子水平的影響（±s）Table 1 Effect of BWA on serum AST，ALT activity and inflammatory factors in mice with alcoholic liver injury（±s）

注：與空白組比較，**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05、△△P<0.01。

組別 劑量/（mg/kg） AST/（U/L） ALT/（U/L） TNF-α/（pg/mL） IL-6（pg/mL）空白組 0 56.38±8.31 46.21±9.42 21.2±1.77 7.3±0.68模型組 0 73.58±9.82** 63.47±8.75** 104.3±8.64** 49.2±3.97** BWA低 50 68.72±7.48 58.69±8.34 92.8±8.67 38.7±4.16 BWA中 100 58.93±6.93△△ 50.47±9.24△ 80.9±7.22△ 34.6±3.14△BWA高 150 57.27±8.37△△ 47.39±7.43△△ 62.5±5.47△△ 28.1±3.01△△陽性對照 150 58.57±7.23△△ 47.34±7.92△△ 93.2±8.15 44.2±3.02

表2 BWA對小鼠肝臟MDA、GSH水平及SOD活性的影響（±s）Table 2 Effects of BWA on MDA，GSH levels and SOD activity in mice liver（±s）

表2 BWA對小鼠肝臟MDA、GSH水平及SOD活性的影響（±s）Table 2 Effects of BWA on MDA，GSH levels and SOD activity in mice liver（±s）

注：與空白組比較，*P<0.05、**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05、△△P< 0.01。

組別 劑量/（mg/kg）MDA/（nmol/mg）GSH/（nmol/mg） SOD/（U/mg）空白組 0 2.22±0.14 5.43±1.02 58.74±3.37模型組 0 3.89±0.18** 2.74±1.05** 32.17±2.85** BWA低 50 3.54±0.16△ 3.25±1.07 39.25±2.94△△BWA中 100 2.81±0.21△△ 4.12±1.14△△ 48.71±3.04△△BWA高 150 2.24±0.17△△ 4.86±1.08△△ 56.83±3.17△△陽性對照 150 2.23±0.13△△ 4.88±0.96△△ 57.12±3.53△△

3 討論

肝臟是體內(nèi)酒精代謝的主要場所，酒精通過乙醇脫氫酶（ADH）脫氫最終生成CO2及H2O排除體外，當(dāng)機(jī)體長期或一次性大量攝入后，會對肝細(xì)胞線粒體造成損傷，使三羧循環(huán)和脂肪酸氧化受阻從而影響脂肪代謝，造成脂肪的過度堆積，同時體內(nèi)超氧陰離子及自由基大量產(chǎn)生，引起機(jī)體的脂質(zhì)過氧化[5-6]。體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高，使抗氧化物質(zhì)GSH含量降低，SOD活性的降低，脂質(zhì)過氧化代謝終產(chǎn)物MDA含量增加，同時脂質(zhì)過氧化引起肝細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)變化，增加細(xì)胞膜的通透性，使原本在肝細(xì)胞漿內(nèi)的可溶性酶ALT、AST大量釋放到血液內(nèi)，故血清ALT、AST水平，肝組織勻漿中的MDA、GSH含量及SOD活性的變化為判定肝細(xì)胞損傷重要指標(biāo)[7]。

花色苷為一類水溶性的類黃酮化合物，具有較好的抗氧化、抗炎、抗腫瘤、預(yù)防糖尿病、保護(hù)視力等多種生物功能，同時對血管彈性及關(guān)節(jié)柔韌性具有改善作用[8]，花色苷的抗氧化活性，遠(yuǎn)強(qiáng)于VC和VE[9-10]，其含有的酚羥基能夠切斷自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，從而有效清除活性氧簇。黑枸杞中含有較為豐富的花色苷，具有抗氧化、激活巨噬細(xì)胞、抗衰老等作用，同時可有效改善肝臟的脂質(zhì)過氧化，對肝臟具有較好的保護(hù)作用[11]。本研究利用酒精性肝損傷模型小鼠，探究黑枸杞花色苷對酒精性肝損傷的保護(hù)作用。研究結(jié)果顯示，BWA可減輕小鼠酒精性肝損傷程度，降低血清中AST、ALT水平及MDA含量，提高肝組織中GSH含量及SOD活性，同時BWA還可以有效的降低炎性因子水平，起到抗菌消炎的作用。BWA能有效改善酒精性肝損傷，其作用機(jī)制可能是通過清除自由基及炎性因子，降低氧化應(yīng)激水平，抑制脂質(zhì)過氧化及改善脂代謝有關(guān)。

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Protective Effect of Anthocyanin from Black Wolfberry on Alcoholic Liver Injury

JIA Dong-sheng，CUI Shi-zhan，XIE Xiao-liang*，WEN Chun-xiu，LI Rong-qiao，LIU Ling-di，TIAN Wei
（Center of Medicinal Plant Research，Institute of Cash Crops of Hebei Academy of Agriculture and Forestry Sciences，Shijiazhuang 050051，Hebei，China）

To study the protective effect of black wolfberry anthocyanins（BWA）on alcoholic liver injury.The mice were randomly divided into blank group，model group，BWA low dose group and positive control group. After 30 days of continuous gavage，in addition to the blank group，were given 56%ethanol solution volume of 16 mL/kg orally，the establishment of acute alcoholic liver injury model，after the model was established 12 h，the rats were killed by dislocation，the levels of alanine aminotransferase（ALT），aspartate aminotransferase（AST）and tumor necrosis factor-α（TNF-α）and interleukin-6（IL-6）in serum and the levels of malondialdehyde（MDA）reduced glutathione（GSH）and superoxide dismutase（SOD）activity were measured.The results show，BWA can significantly reduce serum ALT，AST activity and TNF-α，IL-6，（P<0.05），reduce the livertissue MDA level（P<0.05），improve the SOD activity and GSH level（P<0.05）.BWA has a good protective effect on alcoholic liver injury induced by alcohol.

black wolfberry；anthocyanins；alcoholic liver injury；protective effect

10.3969/j.issn.1005-6521.2017.12.036

2016-12-13

河北省農(nóng)林科學(xué)院青年基金項目（A2015050101）；河北省科技計劃項目（17227101D）；河北太行山區(qū)特色功能保健食品的開發(fā)研究（11231005D）；河北省中藥材產(chǎn)業(yè)體系項目（11232025D）；河北省農(nóng)林科學(xué)院財政項目（F17R02-01）

賈東升（1982—），男（漢），副研究員，碩士研究生，主要從事中藥功能食品研究。

*通信作者：謝曉亮（1962—），男，研究員，博士，主要從事中藥資源、中藥加工研究。