劉秋月 李 珂 齊永秀

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

HPLC法同時測定阿托伐他汀鈣、非洛地平和硫酸氫氯吡格雷制劑的含量

劉秋月 李 珂 齊永秀

(泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，山東 泰安 271016)

目的 建立同時測定阿托伐他汀鈣、非洛地平與硫酸氫氯吡格雷制劑含量的方法。 方法 采用高效液相色譜法:色譜柱:HypersilODS2-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流動相:甲醇-乙酸銨醋酸緩沖溶液(pH=4.0)(75:25)，流速:1.0 ml/min，檢測波長：254 nm，進(jìn)樣量：20 μl，柱溫：30 ℃，內(nèi)標(biāo)物:甲睪酮。 結(jié)果 阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷在5.0～40.0 μg/ml(r分別為0.9997、0.9999、0.9999)濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系；平均加樣回收率分別為101.52%(RSD=2.85%，n=9)、98.21%(RSD=2.94%，n=9)、96.45 %(RSD=2.64%，n=9)；標(biāo)示量百分含量分別為107.7%、98.15%、108.2%。結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，可用于同時測定阿托伐他汀鈣與非洛地平、硫酸氫氯吡格雷制劑的含量。

阿托伐他汀鈣；非洛地平；硫酸氫氯吡格雷；高效液相色譜法；含量測定

阿托伐他汀鈣為HMG-CoA還原酶抑制劑，以鈣鹽形式存在。研究表明阿托伐他汀鈣可減少房性心律失常的發(fā)作，具有很強(qiáng)的抗炎作用， 為臨床常用調(diào)血脂藥物[1-2]。非洛地平是對血管有極高選擇性作用的雙氫吡啶類鈣拮抗劑，對原發(fā)性高血壓、心絞痛都有一定的治療作用[3-4]。硫酸氫氯吡格雷除抗血栓作用以外，可能還有抗炎、抗動脈粥樣硬化、內(nèi)皮保護(hù)和抗血管生成等方面的作用[5-7]。HPLC法雖專一性強(qiáng)、靈敏度高，但采用外標(biāo)法易產(chǎn)生操作誤差。因此本次研究選用甲睪酮為內(nèi)標(biāo)，建立了HPLC[8-10]同時測定阿托伐他汀鈣、非洛地平與硫酸氫氯吡格雷制劑含量的方法。

1 實(shí)驗(yàn)材料

島津LC-10AT高效液相色譜儀；KQ-500E型醫(yī)用超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；TGL-16C臺式離心機(jī)﹙上海安亭科學(xué)儀器廠﹚。

阿托伐他汀鈣對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100590-201303，按三水合物計含量為95.0%)；非洛地平對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100717-201002 ，含量：99.9%)；硫酸氫氯吡格雷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：100819-201102 ，含量：99.5%)；內(nèi)標(biāo)：甲睪酮對照品(中國藥品生物制品檢定所)；阿托伐他汀鈣片劑(批號:100904，北京嘉林藥業(yè)股份有限公司)；非洛地平片劑(批號：20120101，江蘇聯(lián)環(huán)藥業(yè)股份有限公司)；硫酸氫氯吡格雷片(批號：20120712，規(guī)格：25 mg 深圳信立泰藥業(yè)股份有限公司)；甲醇為色譜純，乙酸銨、冰醋酸均為分析純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱Hypersil ODS2 C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)﹙依利特公司﹚；流動相甲醇-乙酸銨醋酸緩沖液pH4﹙75:25﹚；流速1.0 ml/min；檢測波長254 nm。混合對照品溶液中阿托伐他汀與其他兩種組分能達(dá)到基線分離，制劑輔料不干擾測定，各峰與相鄰組分的分離度大于1.5，理論塔板數(shù)按阿托伐他汀的峰計算為2000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷的對照品各5mg置25ml棕色容量瓶中，加流動相溶解混勻，定容至刻度，搖勻，即得200 μg/ml的對照品貯備液。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取甲睪酮對照品5 mg，精密稱定，用流動相溶解并定容至25 ml量瓶中，搖勻，配成質(zhì)量濃度為200 μg/ml的內(nèi)標(biāo)溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取阿托伐他汀鈣片、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷各20片，研磨至粉末，分別精密稱取細(xì)粉適量(約相當(dāng)于主成分5 mg)，置于棕色容量瓶中，用流動相溶解，超聲處理10 min ,稀釋定容至刻度。過濾，吸取上清液，離心﹙6000 r/min﹚，進(jìn)樣。

2.2.4 混合對照品溶液的制備 分別精密吸取阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷的對照品儲備液0.25 ml、0.5 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml置于10 ml棕色容量瓶中，再分別加入1 ml甲睪酮﹙內(nèi)標(biāo)物﹚溶液，加入流動相稀釋，混勻，超聲10 min，定容至刻度，混勻，即得濃度為5 μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml、30 μg/ml、40 μg/ml的系列混合對照品溶液。

2.2.5 空白溶液的制備 取處方量的空白輔料，按“2.2.3”項(xiàng)下方法制備成空白溶液，即得。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取混合對照品溶液(20.0 μg/ml)、供試品溶液、空白溶液適量，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄色譜，詳見圖1。由圖1可見，空白溶液色譜在對照品色譜相應(yīng)位置處無吸收峰，表明在該試驗(yàn)條件下，制劑輔料對測定結(jié)果均無干擾，專屬性較好。

A B C

圖1 高效液相色譜圖

A.空白溶液；B.混合對照品溶液；C.供試品溶液(1.阿托伐他汀鈣；2.非洛地平；3.硫酸氫氯吡格雷；4. 甲睪酮)

2.4 線性關(guān)系的考察

取“2.2.4”項(xiàng)下的系列混合對照品溶液，依次按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，每次20 μl，測定峰面積，以各組分峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積比值﹙Ai/As﹚對濃度C作標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性回歸，得回歸方程阿托伐他汀鈣y=0.0328x+0.0892(r=0.9997)， 非洛地平y(tǒng)=0.0392x+0.0166 (r=0.9999)，硫酸氫氯吡格雷y=0.0131x-0.0036 (r=0.9999)，表明阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷在5～40 μg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

分別精密吸取20g/ml阿托伐他汀、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷的對照品溶液，加入1.0 ml的內(nèi)標(biāo)溶液，分別在1 d內(nèi)重復(fù)測定6次和5 d內(nèi)重復(fù)測定3次，以測得的阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷與內(nèi)標(biāo)峰面積比計算測定方法的精密度。結(jié)果阿托伐他汀日內(nèi)RSD=0.86%(n=6)、日間RSD=5.4%(n=5)；非洛地平日內(nèi)RSD=0.83 %(n=6)、日間RSD=2.6%(n=5)；硫酸氫氯吡格雷日內(nèi)RSD=1.12 %(n=6)、日間RSD=2.5%(n=5)。表明本法有較好的精密度。

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

分別精密量取2.2.3項(xiàng)下的阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷的供試品溶液0.5 ml，共27份，分別置于10 ml容量瓶中，各加入甲睪酮1 ml。每份分別準(zhǔn)確加入低、中、高濃度的阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷對照品貯備液，每一濃度各3份。每瓶分別取樣，進(jìn)樣20 μl,重復(fù)進(jìn)樣3次。計算加樣回收率及RSD。阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷平均加樣回收率分別為101.52 %、98.21%、96.45%，RSD分別為2.85%(n=9)、2.94 %(n=9)、2.64%(n=9)，表明本方法準(zhǔn)確度良好。見表1。

表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.7 樣品含量測定

分別量取“2.2.3”項(xiàng)下的各供試品溶液0.5 ml、甲睪酮標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5 ml,置于10 ml棕色容量瓶中，用流動相稀釋定容至刻度，超聲處理10 min,每次進(jìn)樣20 μl，重復(fù)進(jìn)樣3次，記錄色譜圖，阿托伐他汀鈣、非洛地平、硫酸氫氯吡格雷的標(biāo)示量百分含量分別為107.7%、98.15%、108.2%。

3 討 論

本試驗(yàn)研究過程中，選擇考察了幾種流動相：選擇甲醇—水時，峰拖尾嚴(yán)重；選擇甲醇—0.5%磷酸時，峰分離度不好；選擇甲醇—乙酸銨醋酸緩沖液時，峰分離度較好，能達(dá)到基線分離，柱效較高，又考慮到磷酸易產(chǎn)生沉淀反應(yīng)，最后確定用甲醇—乙酸銨醋酸緩沖液作流動相。由于阿托伐他汀、非洛地平、甲睪酮、硫酸氫氯吡格雷對光和熱不穩(wěn)定，在操作過程中應(yīng)選用棕色容量瓶，保存時應(yīng)該在低溫避光條件下保存，并應(yīng)控制超聲時水浴溫度在30 ℃以下。同時要求超聲時間不宜過長，因?yàn)槌晻r間過長，由超聲震蕩會造成水浴溫度升高。流動相的pH值對四種組分的保留值和峰形有影響，酸性越強(qiáng)，其峰形越尖銳。但是，為了保護(hù)色譜柱，流動相的pH值應(yīng)接近4。

本研究建立的HPLC法適用于測定片劑中阿托伐他汀鈣、非洛地平和硫酸氫氯吡格雷制劑的含量。

[1] 王震宇,禹同生,王健,等.阿托伐他汀的藥理作用及臨床應(yīng)用進(jìn)展[J].中國新藥雜志，2010,19(18):1685-1687.

[2] TSAI CT，LAI LP，HWANG JJ,et al.Atorvastatin prevents atrialf ibrillation in patients with bradyar rhythmias and implanation ofan atrial-based or dual-cham-ber pacemak er;a prosp ective random izedtrial [J].Am H eart J,2008,156(1):65-70.

[3] 姜亞莉,袁曉晨,張昕,等. 依拉地平與非洛地平治療原發(fā)性高血壓的臨床效果觀察[J]. 臨床合理用藥雜志,2015,8(19):32-33.

[4] 吳增穎,李強(qiáng),楊斌武,等. 纈沙坦、苯那普利、非洛地平治療高血壓左室肥厚[J]. 中華高血壓雜志,2007,15(08):641-644.

[5] 劉瑤，楊莉萍，邵宏.氯吡格雷聯(lián)合阿托伐他汀治療缺血性心腦血管疾病的系統(tǒng)評價[J]. 中國藥房，2010,21(24):2283-2286.

[6] 胡君茹,姜華,劉效栓. 阿司匹林聯(lián)合氯吡格雷抗血小板治療的研究進(jìn)展[J]. 中國藥房,2013,24(08):750-753.

[7] 楊熠,何小云,趙專友,等. 硫酸氯吡格雷的藥理作用研究[J].中國新藥雜志,2000,9(10):712-714.

[8] 翁燕容,曹俊,伍曾利. HPLC法測定阿托伐他汀鈣片的含量[A]. 2009年學(xué)術(shù)會議論文集[C].2009:4.

[9] 汪秋蘭,王文清,施春陽,等. 高效液相色譜法測定阿托伐他汀鈣片中阿托伐他汀鈣的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報,2013,32(03):366-368.

[10] 王文剛,惲榴紅,王睿,等. 高效液相色譜法同時測定經(jīng)皮滲透液中美托洛爾和非洛地平的含量[J]. 中國藥學(xué)雜志,2006,41(02):143-146.

Simultaneous determination of atorvastatin, felodipine and clopidogrel hydrogen sulfate by HPLC

LIU Qiu-yue LI Ke QI Yong-xiu

(Dept. of Pharmacy，Taishan Medical University，Taian 271016，China)

Objective:To establish a method for simultaneous determination of atorvastatin, felodipine, and clopidogrel hydrogen sulfate. Methods:HPLC method was used as follow: chromatographic column: HypersilODS2-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 μm),mobile phase: methanol-ammonium acetate (pH=4.0) (75:25) , the flow rate :1.0 ml/min, detection wavelength : 254 nm, column temperature:30 ℃, the internal standard :Methyltestosterone. Results: The linear ranges for atorvastatin, felodipine and clopidogrel hydrogen sulfate was 5.0～40.0 μg/ml(r=0.9997，0.9999，0.9999); the average recoveries were 101.52%(RSD=2.85%，n=9)、98.21 %(RSD=2.94%，n=9)、96.45%(RSD=2.64%，n=9)；the content of the marker was 107.7%, 98.15%, 108.2% respectively. Conclusion: The method is simple, accurate, rapid and has good repeatability, and can be used for the simultaneous determination of atorvastatin, felodipine, and clopidogrel hydrogen sulfate.

atorvastatin; felodipine; clopidogrel hydrogen sulfate; HPLC; content determination

劉秋月(1991—)，女，在讀研究生。

齊永秀(1968—)，女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：體內(nèi)藥物分析。E-mail：yxqi@tsmc.edu.cn。

R927.2

A

1004-7115(2017)06-0626-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2017.06.009

2017-03-18)