鄧踐

（丹東市林業(yè)科學(xué)研究院，遼寧 丹東 118000）

軟棗獼猴桃“龍成2號(hào)”組培擴(kuò)繁技術(shù)研究

鄧踐

（丹東市林業(yè)科學(xué)研究院，遼寧 丹東 118000）

以“龍成2號(hào)”嫩莖段為外植體，研究外植體誘導(dǎo)擴(kuò)繁的最佳條件。結(jié)果表明：最佳初代培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1；最佳增殖培養(yǎng)基MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+ GA31.0 mg·L-1，增殖系數(shù)達(dá)5.0；最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.15 mg·L-1，生根率達(dá)94%。

軟棗獼猴桃“龍成2號(hào)”；初代培養(yǎng)；增殖培養(yǎng)

軟棗獼猴桃Actinidia arguta為獼猴桃科獼猴桃屬落葉藤本，是我國(guó)珍貴的抗寒果樹(shù)資源。主要生長(zhǎng)在中國(guó)東北地區(qū)，是當(dāng)今世界新興果樹(shù)，在國(guó)際上享有很高聲譽(yù)。軟棗獼猴桃果實(shí)酸甜可口，柔軟多汁，含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，維生素C含量高達(dá)430.8 mg/l00 g，總氨基酸含量達(dá)800～1500 mg/l00 g，可用于鮮食和加工等[1-2]。軟棗獼猴桃“龍成2號(hào)”是經(jīng)遼寧省林業(yè)廳認(rèn)定的優(yōu)良品種，具有極大的發(fā)展?jié)摿屯茝V價(jià)值?！褒埑?號(hào)”樹(shù)勢(shì)生長(zhǎng)旺盛、能早期豐產(chǎn)，果實(shí)外形美觀、略帶紅暈，長(zhǎng)卵圓形，果個(gè)較大，完全成熟后甜酸適度、有奶香風(fēng)味，是品味極佳的優(yōu)良晚熟軟棗獼猴桃品種。本文以“龍成2號(hào)”為試材，對(duì)“龍成2號(hào)”組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了深入研究，為該品種組培快繁及推廣應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

6月上旬，“龍成2號(hào)”軟棗獼猴桃苗木正處于生長(zhǎng)旺盛階段，選擇當(dāng)年生較為健壯、稍嫩的枝條，剪取20～30 cm長(zhǎng)的莖尖，作為試驗(yàn)材料。

1.2 消毒方法

將剪取的枝條用清水洗凈，剪成2 cm長(zhǎng)并帶有1～2個(gè)芽的莖段，放入小燒杯中罩紗布后，在自來(lái)水下沖洗30 m in，置于超凈工作臺(tái)上，采用75%酒精和0.1%HgCl2進(jìn)行消毒處理，具體操作為75%酒精30 s+0.1%HgCl24 m in+75%酒精30 s+0.1%HgCl24 m in，最后用無(wú)菌水沖洗5～7次。

1.3 培養(yǎng)方法

1.3.1 初代培養(yǎng)

將消毒滅菌的帶嫩芽莖段剪去兩端多余部分后約2 cm帶芽莖段，在無(wú)菌環(huán)境下接種于初代培養(yǎng)基中。MS為基本培養(yǎng)基，添加不同質(zhì)量濃度的6-BA、NAA、IBA（表1），蔗糖30 g·L-1，瓊脂7.5 g·L-1，pH值6.0。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)接種10瓶，每瓶接種2個(gè)，觀察腋芽萌發(fā)及生長(zhǎng)情況。

1.3.2 增殖培養(yǎng)

待莖段腋芽伸長(zhǎng)生長(zhǎng)至3～4 cm后，將其從基部剪下，剪成長(zhǎng)約1.5 cm的一芽一葉一段，分別轉(zhuǎn)接于增殖培養(yǎng)基中培養(yǎng)。MS為基本培養(yǎng)基，添加6-BA 1.0 mg·L-1、IBA 0.1 mg·L-1，6-BA 0.8 mg·L-1、IBA 0.08 mg·L-1，6-BA 0.6 mg·L-1、IBA 0.06 mg·L-1，6-BA 0.5 mg·L-1、IBA 0.05 mg·L-1、GA31.0 mg·L-1，6-BA 0.4 mg·L-1、IBA 0.04 mg·L-1、GA31.0 mg·L-1，分別記為1、2、3、4、5，蔗糖30 g·L-1，瓊脂7.5g·L-1，pH值6.0。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)接種10瓶，每瓶接種2個(gè)。

1.3.3 生根培養(yǎng)

將高度5 cm以上的健壯新梢苗轉(zhuǎn)到1/2MS中，添加IBA 0.1、0.15、0.2、0.25 mg·L-1。每個(gè)處理3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)接種10瓶，每瓶接種2個(gè)。

1.3.4 煉苗移栽

移栽前，將生根后的試管苗培養(yǎng)瓶移入到溫室內(nèi)，在常溫、自然光下逐漸揭開(kāi)組培瓶蓋適應(yīng)3～5 d，初期每天噴霧3次，逐漸減少噴霧次數(shù)。7 d左右取出健壯的生根苗，用清水洗凈苗根部培養(yǎng)基，在溫室內(nèi)移栽到配好的基質(zhì)中。

1.3.5 培養(yǎng)條件

白天溫度（25±1）℃，夜間溫度（20±1）℃，光照14 h，黑暗10 h，光照強(qiáng)度2 000～3 000 lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體的誘導(dǎo)

外植體在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)第7天腋芽開(kāi)始萌動(dòng)；約14 d莖段長(zhǎng)出綠色細(xì)長(zhǎng)小葉。誘導(dǎo)培養(yǎng)20 d后的結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同處理對(duì)外植體誘導(dǎo)的影響

從表1可以看出，不同濃度的激素處理均能誘導(dǎo)外植體腋芽萌發(fā)。其中6-BA 2.0 mg·L-1、IBA 0.2 mg·L-1和6-BA 1.5 mg·L-1、NAA 0.1 mg·L-1的誘導(dǎo)效果最好，萌發(fā)率較高，苗壯且高。觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基添加NAA較添加IBA時(shí)根量多，葉片過(guò)大，木質(zhì)化程度高，長(zhǎng)有較多白色茸毛的無(wú)效根，添加IBA較添加NAA長(zhǎng)勢(shì)快、好且植株高，葉片趨于正常，所以IBA是腋芽萌發(fā)的最佳生長(zhǎng)素，當(dāng)質(zhì)量濃度為0.2 mg·L-1時(shí)，萌發(fā)率達(dá)到85%，平均株高達(dá)3.1 cm，顯著優(yōu)于其它處理。所以“龍成2號(hào)”軟棗獼猴桃腋芽萌發(fā)的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 2 mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1。

2.2 芽苗的增殖培養(yǎng)

增殖培養(yǎng)1周后，腋芽開(kāi)始萌發(fā)，第20天觀察記錄生長(zhǎng)情況，每個(gè)組合隨機(jī)抽取10瓶測(cè)量株高，計(jì)算增殖系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可以看出，當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度高于0.5 mg·L-1時(shí)，植株易分化出較多叢生芽，植株高生長(zhǎng)較慢，葉片扭曲、偏大；當(dāng)6-BA質(zhì)量濃度低于0.5 mg·L-1時(shí)，基本無(wú)叢生芽，大多為單芽生長(zhǎng)，長(zhǎng)勢(shì)較快，當(dāng)6-BA為0.5 mg·L-1時(shí)，表現(xiàn)效果顯著優(yōu)于其它處理，所以芽苗增殖的最佳培養(yǎng)基為：MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1。

表2 不同處理對(duì)芽苗增殖的影響

2.3 生根培養(yǎng)

生根培養(yǎng)1周后，芽苗基部陸續(xù)出現(xiàn)根狀突起，呈放射線狀。30 d后觀察發(fā)現(xiàn)IBA濃度大于0.15mg·L-1時(shí)，部分植株變黃，植株基部出現(xiàn)愈傷，且隨IBA濃度增大愈傷增多，而愈傷上長(zhǎng)出的根較長(zhǎng)、細(xì)弱，容易脫落，根系生長(zhǎng)情況見(jiàn)表3。

表3 不同處理對(duì)苗木根系生長(zhǎng)情況的影響

由表3可以看出，IBA濃度為0.15 mg·L-1時(shí)生根率最高，達(dá)94%，且無(wú)愈傷組織產(chǎn)生，產(chǎn)生的根較壯且多，所以“龍成2號(hào)”軟棗獼猴桃最適的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.15 mg·L-1。

2.4 煉 苗

苔蘚基質(zhì)有較好的保水性和透氣性。本試驗(yàn)煉苗基質(zhì)為消毒殺菌后加工打碎的苔蘚基質(zhì)，將苗取出，用清水洗去根部培養(yǎng)基，再用1 000～1 500倍的多菌靈溶液浸泡10 s，用塑料膜覆蓋1周以增加空氣濕度，1周后逐漸揭開(kāi)塑料膜，棚內(nèi)溫度控制在15～28℃，濕度控制在70%以上，定期噴施低濃度的殺菌劑，苗木移栽成活率達(dá)到80%。

3 結(jié)論與討論

以“龍成2號(hào)”軟棗獼猴桃嫩莖段為外植體，研究激素種類與濃度對(duì)外植體誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)的影響，結(jié)果表明：“龍成2號(hào)”軟棗獼猴桃的嫩莖段誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1。增殖培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.05 mg·L-1+GA31.0 mg·L-1，增殖系數(shù)達(dá)5.0。生根培養(yǎng)最佳培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 0.15 mg·L-1，生根率達(dá)94%。

目前國(guó)內(nèi)外已有許多軟棗獼猴桃優(yōu)良品種的人工繁殖獲得成功[3-5]，我國(guó)野生獼猴桃品種資源豐富，雖然市場(chǎng)上已有一些人工繁殖并開(kāi)發(fā)利用的品種，但是仍滿足不了市場(chǎng)需求，且“龍成2號(hào)”軟棗獼猴桃具有果個(gè)大、口感好的優(yōu)勢(shì)，在市場(chǎng)上比較稀有，本試驗(yàn)通過(guò)研究“龍成2號(hào)”軟棗獼猴桃的組培繁殖技術(shù)，為“龍成2號(hào)”這一優(yōu)良品種的開(kāi)發(fā)利用和工廠化育苗奠定了基礎(chǔ)。

［1］胡皓.軟棗獼猴桃“魁綠”品種組培微繁技術(shù)研究［J］.吉林農(nóng)業(yè)，2011，（2）：1-2.

［2］郭志欣，顧地周，閆中雪，等.軟棗獼猴桃優(yōu)良品系“2008-07”組織培養(yǎng)繁殖技術(shù)研究［J］.西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，42（11）：1-3.

［3］劉小剛.野生軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)及褐變處理［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（19）：113-119.

［4］隆前進(jìn)，吳延軍，謝鳴.‘紅陽(yáng)’獼猴桃葉片和帶芽莖段的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)［J］.浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，22（4）：429-432.

［5］田新華，盧慧穎，吳捷.軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)的研究［J］.林業(yè)科技，2008，33（6）：1-3.

（責(zé)任編輯：張素清）

S722.37

A

1001-1714（2017）02-0038-03

2017-02-23

鄧踐（1968-），男，工程師，從事林業(yè)栽培與育種研究。E-mail：371473898@qq.com。