摘 要：綠僵菌作為重要的生物農(nóng)藥制劑，研究及應(yīng)用非常廣泛。本研究通過(guò)試驗(yàn)探索了固體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌株的最佳培養(yǎng)基配方及工藝條件，進(jìn)行了田間試驗(yàn)示范推廣，為有效利用綠僵菌進(jìn)行田間合理的防治提供了科學(xué)參考。

關(guān)鍵詞：綠僵菌；菌劑培養(yǎng)；生物防治

中圖分類(lèi)號(hào)：S476.1 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A DOI：10.11974/nyyjs.20170533028

綠僵菌（Metarhizium anisopliae）是重要的昆蟲(chóng)病原真菌之一[1]，將其作為主要生物活性成分的制劑，具有不污染環(huán)境、無(wú)殘留、易生產(chǎn)、致病力強(qiáng)、持效期長(zhǎng)、應(yīng)用效果好、對(duì)非靶標(biāo)生物安全等優(yōu)點(diǎn)，其寄主范圍廣，可在8目30科200余種農(nóng)林害蟲(chóng)上寄生，其應(yīng)用前景非常廣闊[2，3]。近年來(lái)，由于化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，食品安全和健康問(wèn)題、環(huán)境保護(hù)問(wèn)題倍受重視，生物農(nóng)藥的研發(fā)及推廣具有深刻意義[4]。

目前，綠僵菌生物農(nóng)藥的生產(chǎn)普遍采用液固雙相發(fā)酵工藝，其固體載體多為大米和稻殼，國(guó)外綠僵菌生產(chǎn)的固體載體多為稻米[5]。綠僵菌制劑的劑型主要有粉劑、可濕性粉劑等，其助劑的成分和配比是當(dāng)前研究熱點(diǎn)。本研究為了大量生產(chǎn)綠僵菌菌劑用于田間農(nóng)作物害蟲(chóng)的防治，先采用液體發(fā)酵培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌劑，再采用固體發(fā)酵培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌粉，進(jìn)行田間試驗(yàn)示范推廣，可為有效利用綠僵菌防治農(nóng)作物病害提供參考，為適應(yīng)綠色農(nóng)業(yè)的發(fā)展要求，減少高毒、高殘留化學(xué)農(nóng)藥的使用提供科學(xué)方法。

1 試驗(yàn)材料與方法

1.1 綠僵菌L8500-2x菌株固體發(fā)酵培養(yǎng)載體的篩選

1.1.1 試驗(yàn)材料

綠僵菌培養(yǎng)載體：麥麩、硅藻土、磷酸鈣、鋸末、谷糠、玉米粉；試驗(yàn)害蟲(chóng)是菜青蟲(chóng)2代幼蟲(chóng)。

1.1.2 試驗(yàn)方法[6]

利用麥麩、硅藻土、磷酸鈣、鋸末、谷糠、玉米粉等廉價(jià)物質(zhì)作為基質(zhì)進(jìn)行綠僵菌L8500菌劑的生產(chǎn)，觀察不同供試載體對(duì)綠僵菌菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)率的影響，經(jīng)對(duì)比試驗(yàn)，確定固體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌種的最佳培養(yǎng)基配方及工藝條件[7]。

1.2 綠僵菌L8500-2x菌劑田間生物防治試驗(yàn)

1.2.1 綠僵菌L8500-2x菌劑防治

馬鈴薯28星瓢蟲(chóng)藥效試驗(yàn)。

1.2.1.1 供試藥劑

綠僵菌L8500-2x菌劑13.5L（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院提供）、清水。

1.2.1.2 防治對(duì)象

馬鈴薯28星瓢蟲(chóng)第1代幼蟲(chóng)。

1.2.1.3 試驗(yàn)點(diǎn)基本情況

試驗(yàn)點(diǎn)設(shè)在山西靜樂(lè)縣王村鄉(xiāng)善應(yīng)村，屬黃土丘陵區(qū)，馬鈴薯品種為紫花白。

1.2.1.4 試驗(yàn)時(shí)間

2009年7月10日，這個(gè)時(shí)期是第1代幼蟲(chóng)為害盛期。

1.2.1.5 試驗(yàn)處理

試驗(yàn)設(shè)綠僵菌（L8500-2x）10倍菌劑、20倍菌劑及清水對(duì)照共3個(gè)處理。試驗(yàn)每處理重復(fù)3次，共9個(gè)小區(qū)，小區(qū)隨機(jī)組排列，小區(qū)面積667m2，試驗(yàn)面積共6003m2。

1.2.1.6 試驗(yàn)方法

將綠僵菌（L8500-2x）菌劑稀釋10倍、20倍，用手動(dòng)噴霧器均勻噴霧，藥液用量為30L/667m2（稀釋后）。

1.2.1.7 調(diào)查記錄和計(jì)算方法[8]

認(rèn)真調(diào)查藥后1d、3d、5d、7d各處理小區(qū)的殘存數(shù)量（頭/百株），調(diào)查采用對(duì)角線5點(diǎn)取樣法，每點(diǎn)查100株，算出平均數(shù)，并詳細(xì)記錄。計(jì)算防效，其公式為：

1.2.2 綠僵菌L8500-2x菌劑防治土蝗田間藥效試驗(yàn)

1.2.2.1 供試藥劑

綠僵菌（L8500-2x）菌劑（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院提供）40.5L、清水。

1.2.2.2 防治對(duì)象

蝗蝻（1～2齡）。

1.2.2.3 試驗(yàn)點(diǎn)基本情況

試驗(yàn)點(diǎn)設(shè)在靜樂(lè)縣段家寨鄉(xiāng)永安鎮(zhèn)村草灘，該地區(qū)是土黃重發(fā)區(qū)。

1.2.2.4 試驗(yàn)時(shí)間

2009年6月25日，這時(shí)蝗蝻大部分為1～2齡。

1.2.2.5 試驗(yàn)處理

試驗(yàn)共設(shè)3個(gè)大區(qū)，每個(gè)試驗(yàn)大區(qū)設(shè)綠僵菌L8500-2x菌劑10倍、20倍稀釋液及清水對(duì)照共3個(gè)處理。每處理重復(fù)3次，共9個(gè)小區(qū)，小區(qū)隨機(jī)組排列，小區(qū)面積667m2。該實(shí)驗(yàn)共27個(gè)小區(qū)，面積18009 m2。

1.2.2.6 試驗(yàn)方法[9]

小區(qū)提前10d用紗網(wǎng)圍嚴(yán)實(shí)，保證小區(qū)內(nèi)蝗蝻不遷移。將L8500菌劑按10倍、20倍稀釋后，用手動(dòng)噴霧器對(duì)各處理小區(qū)均勻噴霧防治，藥液用量為30L/667m2（稀釋后）。

1.2.2.7 調(diào)查記錄和計(jì)算方法

調(diào)查藥后3d、5d、7d各處理小區(qū)的蟲(chóng)口密度，并詳細(xì)記錄在表，計(jì)算防效，其公式為：

防效=×100%

1.2.3 固體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌粉防治土蝗田間試驗(yàn)

1.2.3.1 供試藥劑

固體培養(yǎng)的綠僵菌L8500-2x菌粉（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院提供）9kg、菌液9L及清水。

1.2.3.2 防治對(duì)象

蝗蝻（1～2齡）。

1.2.3.3 試驗(yàn)點(diǎn)基本情況

試驗(yàn)點(diǎn)設(shè)在靜樂(lè)縣段家寨鄉(xiāng)永安鎮(zhèn)村草灘，該地區(qū)是土黃重發(fā)區(qū)。

1.2.3.4 試驗(yàn)時(shí)間

2010年7月5日。

1.2.3.5 試驗(yàn)處理

試驗(yàn)共設(shè)綠僵菌L8500-2x菌劑10倍稀釋液、固體培養(yǎng)L8500菌粉10倍稀釋液及清水對(duì)照共3個(gè)處理。每處理重復(fù)3次，共9個(gè)小區(qū)，小區(qū)隨機(jī)組排列，小區(qū)面積667m2，面積6003m2。

1.2.3.6 試驗(yàn)方法

小區(qū)提前10d用紗網(wǎng)圍嚴(yán)實(shí)，保證小區(qū)內(nèi)蝗蝻不遷移。將菌液10倍稀釋?zhuān)幰河昧繛?0L/667m2（稀釋后）；L8500-2x菌粉用水10倍稀釋?zhuān)幏塾昧繛?kg/667m2，用手動(dòng)噴霧器對(duì)各處理小區(qū)均勻噴霧防治。

1.2.3.7 調(diào)查記錄和計(jì)算方法

調(diào)查藥后3d、5d、7d各處理小區(qū)的蟲(chóng)口密度（頭/m2），并詳細(xì)記錄在表，計(jì)算防效，其公式為：

防效=×100%

2 試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 綠僵菌L8500-2x菌株固體發(fā)酵培養(yǎng)載體的篩選結(jié)果與分析

表1實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，供試載體對(duì)綠僵菌菌絲生長(zhǎng)、產(chǎn)孢量和孢子萌發(fā)率都有影響，以硅藻土+谷糠+玉米粉對(duì)孢子活力保護(hù)最好，其次為硅藻土、碳酸鈣、高嶺土+稻殼+玉米粉，與對(duì)照相比其孢子萌發(fā)率、產(chǎn)孢量差異顯著。

以硅藻土+谷糠+玉米粉、高嶺土+稻殼+玉米粉2組供試載體為基礎(chǔ)，選出3種固體培養(yǎng)綠僵菌L8500菌種的培養(yǎng)基配方，經(jīng)對(duì)比試驗(yàn)，確定了固體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌種的最佳培養(yǎng)基配方及工藝條件。

培養(yǎng)基配比1：葡萄糖1%，硅藻土40%，谷糠25%，玉米粉15%，加水19%，裝袋中。

培養(yǎng)基配比2：葡萄糖1%，高嶺土40%，稻殼25%，玉米粉15%，加水19%，裝袋中。

培養(yǎng)基配比3：葡萄糖1%，硅藻土45%，谷糠15%，麥麩10%，玉米粉10%，加水19%，裝袋中。

經(jīng)方差分析，試驗(yàn)處理組間存在差異不顯著P >0.05。但從應(yīng)用效果及成本綜合考慮，選用培養(yǎng)基配比三既經(jīng)濟(jì)又合理，且防效率達(dá)到80.4%。

經(jīng)對(duì)比試驗(yàn)，確定了固體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌株的最佳培養(yǎng)基配方及工藝條件。培養(yǎng)基配比：葡萄糖1%，硅藻土45%，谷糠15%，麥麩10%，玉米粉10%，加水19%，裝袋中。溫度121℃，滅菌30min后，冷卻，用液體菌種L8500-2x接種，然后26～28℃培養(yǎng)10～15d，與等量已滅好菌的固體培養(yǎng)基混合，過(guò)篩備用，稀釋后田間噴撒。

2.2 綠僵菌L8500-2x菌劑田間生物防治試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 綠僵菌L8500-2x菌劑防治馬鈴薯28星瓢蟲(chóng)藥效試驗(yàn)結(jié)果與分析

根據(jù)計(jì)算結(jié)果（表3）綠僵菌L8500-2x菌劑10倍稀釋液、20倍稀釋液防治馬鈴薯28星瓢蟲(chóng)一代幼蟲(chóng)效果均明顯，7d后防效分別達(dá)82.4%、78%，在實(shí)際應(yīng)用中，考慮到經(jīng)濟(jì)成本核算，選綠僵菌菌劑20倍稀釋液用于大田試驗(yàn)示范推廣應(yīng)用。

2.2.2 綠僵菌L8500-2x菌劑防治土蝗田間藥效試驗(yàn)結(jié)果與分析

根據(jù)計(jì)算結(jié)果（表4-6），綠僵菌L8500-2x菌劑10倍液3個(gè)區(qū)平均防效達(dá)80%、20倍液3個(gè)區(qū)平均防效達(dá)75%，其中10倍液防治率最高達(dá)81%，2個(gè)處理防治蝗蝻（1～2齡）效果均顯著，達(dá)到了土蝗的防控目標(biāo)，建議防治低齡蝗蝻用20倍菌液，防治大齡爆發(fā)性土蝗用10倍菌液。

2.2.3 固體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌粉防治土蝗田間試驗(yàn)結(jié)果與分析

結(jié)果表明，液體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌劑防治蝗蟲(chóng)效果比固體培養(yǎng)L8500-2x菌粉的防治效果要高，但菌液不好保存，固體發(fā)酵菌粉好保存，防治效果也明顯。所以綠僵菌生物農(nóng)藥的生產(chǎn)目前普遍采用液固雙相發(fā)酵工藝。

3 試驗(yàn)結(jié)論與討論

通過(guò)本研究探索了固體培養(yǎng)綠僵菌L8500-2x菌株的最佳培養(yǎng)基配方及工藝條件，進(jìn)行了田間試驗(yàn)示范推廣，為有效利用綠僵菌合理防治防治馬鈴薯28星瓢蟲(chóng)及防治田間蝗蝻（1～2齡）提供科學(xué)參考。

生物農(nóng)藥代替化學(xué)農(nóng)藥的呼聲日益高漲[10]、其利好也不言而喻，但是目前一些國(guó)家的生物農(nóng)藥產(chǎn)量已經(jīng)達(dá)到10%，而我國(guó)產(chǎn)量?jī)H為1%。所以加大對(duì)生物農(nóng)藥科學(xué)規(guī)范的研究、對(duì)防治效果提供科學(xué)的數(shù)據(jù)資料，才能為生物農(nóng)藥的推廣和宣傳創(chuàng)建有力保障[11]。

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作者簡(jiǎn)介：楊文彬（1964-），山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院高級(jí)工程師，研究方向：毒理學(xué)及藥效學(xué)研究。