文/徐 哲 吳 斌 楊志平

梅奇酵母C14菌株的生化組成分析

文/徐 哲 吳 斌 楊志平

通過(guò)對(duì)梅奇酵母C14菌株的生化組成進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)梅奇酵母C14菌株具有水產(chǎn)動(dòng)物餌料生物的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。但是，該菌株缺乏多不飽和脂肪酸EPA和DHA，作為幼體餌料使用時(shí)，需要添加富含這兩種多不飽和脂肪酸的藻類作為補(bǔ)充。

酵母菌菌體富含蛋白質(zhì)、核酸、維生素、多糖和維生素等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并且可以利用成本低廉的農(nóng)副產(chǎn)品進(jìn)行大量培養(yǎng)以生產(chǎn)單細(xì)胞蛋，因此，酵母菌作為生物餌料已被廣泛應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。海洋紅酵母（Rhodotorula sp.）可以替代單胞藻進(jìn)行刺參浮游幼體的培育；德巴利酵母(Debaryomyces sp.)MY3、克魯維酵母(Kluyveromyces sp.)MY32和蟲道酵母(Ambrosiozyma sp.)MY33以不超過(guò)50%的比例替代球等鞭金藻(Isochrysis galbana)，對(duì)海灣扇貝(Argopecten irradians)幼貝的生長(zhǎng)和存活基本沒有影響；沼澤生紅冬孢酵母(Rhodosporidium paludigenum) 能夠促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)的生長(zhǎng)；清酒假絲酵母(Candida sake )S165、漢遜德巴利酵母(D. hansenii) S8和熱帶假絲酵母(Candida tropicalis )S186 是印度明對(duì)蝦(Fenneropenaeus indicus)有效的免疫增強(qiáng)劑。除了海洋酵母在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的成功應(yīng)用外，一些學(xué)者也對(duì)酵母本身的生化成分進(jìn)行了分析。梅奇酵母(Metschnikowia sp.) C14菌株是從健康刺參腸道分離篩選的，實(shí)驗(yàn)證明，該菌株可提高刺參幼參生長(zhǎng)、消化作用和免疫功能。為了進(jìn)一步了解其生化成分，本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了C14菌株的生化組成，為擴(kuò)大開發(fā)利用該酵母菌提供參考。

一、材料與方法

1.菌株

梅奇酵母C14從健康刺參腸道分離獲得。將C14種到Y(jié)PD液體種子培養(yǎng)基，其配方為：蛋白胨20g，酵母粉10g，葡萄糖20g，陳海水1000mL,自然pH。于25℃下150r/分鐘培養(yǎng)過(guò)夜，將得到的種子液接種到Y(jié)PD液體培養(yǎng)基，在相同條件下培養(yǎng)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，以4000r/分鐘離心10分鐘獲得細(xì)胞，用生理鹽水重懸，離心，保存在－80℃冰箱備用。

2.基本營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

粗蛋白測(cè)定采用凱氏定氮法（GB/T 5009.5-2010），糖分測(cè)定采用分光光度計(jì)法（參照GB/T 9695.31-2008）進(jìn)行，粗脂肪測(cè)定采用索氏抽提法（GB/T 5009.6-2003），灰分測(cè)定采用馬弗爐焚燒法（GB/T 5009.4-2010）。

3.氨基酸測(cè)定

按GB/T5009.124—2003的方法，取適量樣品經(jīng)水解后，利用氨基酸全自動(dòng)分析儀進(jìn)行分析（譜尼測(cè)試科技股份有限公司）。

4.脂肪酸測(cè)定

取菌體細(xì)胞10g加入2%的2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚甲醇溶液，使用Folch的方法提取脂質(zhì)。將得到的脂質(zhì)用0.5mol/L的KOH-甲醇在70℃水解1h后，使用Metcalfe等的方法來(lái)制備脂肪酸甲酯，利用石油醚萃取后濃縮，進(jìn)行氣相色譜分析，脂肪酸的定量分析采用面積歸一法計(jì)算而得。

二、結(jié)果與討論

1.梅奇酵母C14菌株的基本營(yíng)養(yǎng)成分

C14菌株的基本營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定結(jié)果如表1所示。結(jié)果表明，該菌株的粗蛋白含量為42.12%，為酵母菌的主要成分，在已報(bào)道海洋酵母的蛋白質(zhì)含量范圍（23%～57%）之內(nèi)。該菌株的蛋白質(zhì)含量相對(duì)于水產(chǎn)養(yǎng)殖上刺參對(duì)生物餌料的蛋白需求較高。糖分是刺參新陳代謝的主要能量來(lái)源，梅奇酵母C14菌株的糖分含量為28.15%。來(lái)源于酵母細(xì)胞壁的葡聚糖對(duì)刺參有免疫刺激作用。梅奇酵母C14菌株的粗脂肪含量為12.17%，高于其他海洋酵母。由于刺參對(duì)脂肪需求量并不高，因此，該菌株的脂肪含量高于刺參對(duì)脂肪的需求量。刺參生長(zhǎng)需要少量的礦物質(zhì)，不同海洋酵母灰分含量差別很大（5.35%～13%），梅奇酵母C14菌株的灰分含量為9.14%與Dipodascus capitatusACM 4779的接近。

表1 梅奇酵母C14菌株的基本營(yíng)養(yǎng)成分（%干重）

2.梅奇酵母C14菌株的氨基酸的組成和含量

C14菌株的氨基酸成分測(cè)定結(jié)果如表2所示。該菌株的谷氨酸、天門冬氨酸和亮氨酸含量較高，并含有豐富的必需氨基酸。已報(bào)道海洋酵母含有16種～18種氨基酸，梅奇酵母菌株C14菌株含16種氨基酸，與沼澤生紅冬孢酵母的類似。刺參體壁中也含有這16種氨基酸，包括7種必需氨基酸分別是異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、蘇氨酸和纈氨酸。梅奇酵母菌株C14菌株具備這些必需氨基酸(表2)。生物餌料中的必需氨基酸組成與動(dòng)物本身氨基酸組成相近似可視為該動(dòng)物的最適飼料。該菌株的必須氨基酸指數(shù)（EAAI）值為1.06可作為優(yōu)質(zhì)蛋白源應(yīng)用于刺參養(yǎng)殖。

3.梅奇酵母C14菌株的脂肪酸的組成和含量

不同海洋酵母脂肪酸組成含量變化很大。C14菌株的脂肪酸成分測(cè)定結(jié)果如表3所示。結(jié)果顯示，C14菌株亞油酸(18∶2n-6)含量高達(dá)30.96%，其次是18∶1、16∶0、16∶1和18∶3n-3，其余含量相對(duì)較低。不過(guò)，該菌株不含水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)所必需的多不飽和脂肪酸EPA(20∶5n-3)和DHA(22∶6n-3)，與前人研究結(jié)果一致。因此，在水產(chǎn)動(dòng)物幼體培育中，建議使用海洋酵母餌料時(shí)可添加一定比例的藻類使?fàn)I養(yǎng)上得到互補(bǔ)。

表3 梅奇酵母C14菌株的脂肪酸組成和含量(%)

三、結(jié)論

梅奇酵母C14菌株具有蛋白和糖分含量較高，必需氨基酸組成豐富等優(yōu)點(diǎn)，表明該菌株具有用作水產(chǎn)動(dòng)物餌料的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。但是，該菌株其缺乏多不飽和脂肪酸EPA和DHA，作為幼體餌料添加劑時(shí)，需要添加富含這兩種多不飽和脂肪酸的藻類作為補(bǔ)充。

作者單位：遼寧省大連匯新鈦設(shè)備開發(fā)有限公司