唐英，潘海平，欒迪

1.青島市中心血站檢驗(yàn)科，山東青島 266071；2.青島市李滄區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青島 266001

TP-ELISA、TPPA及FQ-PCR 3種方法用于梅毒螺旋體檢測(cè)的研究

唐英1，潘海平1，欒迪2

1.青島市中心血站檢驗(yàn)科，山東青島 266071；2.青島市李滄區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東青島 266001

目的探究在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用TP-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）、TPPA（明膠顆粒凝集法）及FQ-PCR（熒光定量PCR法）3種方法檢測(cè)的價(jià)值。方法選取2014年1月—2015年6月收治的50例一期梅毒患者的血清標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)選取50例非梅毒患者血清標(biāo)本作為對(duì)照組，對(duì)這2組標(biāo)本均采用TP-ELISA、TPPA及FQ-PCR 3種方法進(jìn)行梅毒螺旋體的檢測(cè)，對(duì)比其檢測(cè)結(jié)果的差異性。結(jié)果FQ-PCR在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用，其檢測(cè)的敏感度（92.00%）明顯高于TTPA檢測(cè)的敏感度（66.00%）以及TP-ELISA檢測(cè)的敏感度（68.00%）（P＜0.05）。結(jié)論FQ-PCR在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用，具有較高的特異性以及敏感性，應(yīng)用價(jià)值較高。

酶聯(lián)免疫吸附法；明膠顆粒凝集法；熒光定量PCR法；梅毒螺旋體

梅毒主要是由TP（梅毒螺旋體蒼白亞種）引起的傳染性疾病，患者在疾病早期以皮膚黏膜損傷為主要的臨床表現(xiàn)，晚期則會(huì)對(duì)其中樞神經(jīng)、心血管、眼部、骨骼等重要的臟器造成損傷，具有較為復(fù)雜的病程以及較強(qiáng)的傳染性，可通過(guò)性以及母嬰的方式傳播[1-2]。WHO報(bào)道顯示，90%以上的梅毒患者發(fā)生于發(fā)展中國(guó)家，在部分地區(qū)，梅毒已經(jīng)是較為常見的性病[3]。因此，采取有效措施對(duì)梅毒患者進(jìn)行疾病檢測(cè)以及治療干預(yù)來(lái)改善其預(yù)后意義重大。該文主要對(duì)梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用TP-ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）、TPPA（明膠顆粒凝集法）及FQ-PCR（熒光定量PCR法）3種方法檢測(cè)的價(jià)值作分析，內(nèi)容如下文。

1 資料與方法

1.1 基本資料

選取2014年1月—2015年6月收治的50例一期梅毒患者作為實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)選取50例非梅毒患者作為對(duì)照組。

實(shí)驗(yàn)組一期梅毒患者中，男女之比為20/30，年齡在17～62歲之間，年齡均值為（29.62±2.10）歲。

對(duì)照組患者中，男女之比為25/25，年齡在18～60歲之間，年齡均值為（30.20±2.09）歲。

兩組標(biāo)本進(jìn)行年齡、性別等基本資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

1.2 方法

FQ-PCR儀器為Cobas S201核酸檢測(cè)系統(tǒng)，試劑盒為Cobas Taqsreen MPX試紙盒；TPPA檢測(cè)儀器為全自動(dòng)生化分析儀OLYMPUS AU400；TP-ELISA檢測(cè)儀器為Freedom evoclinical全自動(dòng)加樣儀。

采用無(wú)菌棉拭子采集兩組的局部滲出液、分泌物以及局部淋巴結(jié)抽出液進(jìn)行FQ-PCR。采用真空采血管采集靜脈血5mL作為血液樣本，將其置于無(wú)菌的試管中，并進(jìn)行離心處理，取血清備用。所有檢測(cè)的操作均按照試劑盒的說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行操作。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)實(shí)驗(yàn)組一期梅毒患者和對(duì)照組非梅毒患者經(jīng)TP-ELISA、TPPA及FQ-PCR 3種方法檢測(cè)的結(jié)果進(jìn)行觀察分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

研究數(shù)據(jù)錄入SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行分析用[n（%）]表示。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

FQ-PCR在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用，其檢測(cè)的敏感度（92.00%）明顯高于TTPA檢測(cè)的敏感度（66.00%）以及TP-ELISA檢測(cè)的敏感度（68.00%）差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。FQ-PCR在梅毒螺旋體檢測(cè)中的特異度（100.00%）與TTPA檢測(cè)的特異度（98.00%）以及TP-ELISA檢測(cè)的特異度（96.00%）相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05)。如表1。

表1 TP-ELISA、TPPA及FQ-PCR 3種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

3 討論

梅毒是傳染性疾病的一種，其主要的傳播途徑為性傳播，梅毒已經(jīng)對(duì)我國(guó)新生兒和成人的身體健康造成了嚴(yán)重的影響，因此，采取有效措施對(duì)梅毒進(jìn)行防治意義重[4]大。目前，并不存在霉素的特異性疫苗，早期對(duì)其疾病進(jìn)行發(fā)現(xiàn)和治療已經(jīng)是對(duì)梅毒傳播進(jìn)行控制的主要措施。

目前，對(duì)梅毒螺旋體進(jìn)行檢測(cè)的方法主要包括分離培養(yǎng)法、直接鏡檢法、血清法、PCR法、金標(biāo)法等，其中直接鏡檢法包括鍍銀染色法、暗視野顯微鏡法、直接熒光抗體實(shí)驗(yàn)等，直接鏡檢法檢測(cè)的準(zhǔn)確率較低，且對(duì)檢驗(yàn)人員的要求較高[5]；分離培養(yǎng)法在檢測(cè)的過(guò)程中，需要采集家兔的睪丸部位進(jìn)行接種，檢測(cè)較為復(fù)雜，臨床開展存在一定的局限性[6]；血清學(xué)檢測(cè)主要是對(duì)梅毒螺旋體進(jìn)行檢測(cè)，包括VDRL（玻片試驗(yàn)）、USR（反應(yīng)素玻片試驗(yàn)）、RPR（快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)）、TPPA、TRUST、FTA-ABS（熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)）等，但是梅毒早期患者的體內(nèi)并不存在梅毒抗體，因此，檢測(cè)存在一定的局限性[7]。

PCR法可以對(duì)梅毒螺旋體中的核酸進(jìn)行檢測(cè)，在梅毒早期患者檢測(cè)中應(yīng)用，具有一定的優(yōu)勢(shì)。本文研究結(jié)果顯示，F(xiàn)Q-PCR在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用，其檢測(cè)的敏感度（92.00%）明顯高于TTPA檢測(cè)的敏感度（66.00%）以及TP-ELISA檢測(cè)的敏感度（68.00%）（P＜0.05）。但是該次研究受到引物設(shè)計(jì)的影響，應(yīng)在兩周后再次采集患者的血清進(jìn)行檢測(cè)，從而對(duì)患者的疾病進(jìn)行確診。

TPPA檢測(cè)法是特異性試驗(yàn)的一種，主要是以梅毒螺旋體作為抗原，雖然其具有較高的特異性，但是其在梅毒早期患者診斷中應(yīng)用，敏感性較低，且檢測(cè)試劑的成本較高，檢測(cè)的過(guò)程較為復(fù)雜，且在檢測(cè)結(jié)果認(rèn)讀的過(guò)程中，存在一定的主觀性，在大樣本的檢測(cè)中應(yīng)用，較易因自凝現(xiàn)象而出現(xiàn)誤診的情況[8-9]。梅毒患者接受正規(guī)治療之后，其TPPA陽(yáng)性會(huì)終身保持，因而將TPPA試驗(yàn)作為對(duì)梅毒患者進(jìn)行初診的方法較為合理。

TP-ELISA在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用，也存在一定的假陽(yáng)性情況，在檢測(cè)的過(guò)程中，在一定程度上需要憑借臨床醫(yī)療人員的經(jīng)驗(yàn)來(lái)作判斷[10]。

綜上所述，TP-ELISA、TPPA及FQ-PCR 3種方法在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用，均具有一定的價(jià)值，其中，F(xiàn)QPCR在梅毒螺旋體檢測(cè)中應(yīng)用的敏感性與特異性更高，可以較好對(duì)梅毒患者的疾病早期進(jìn)行發(fā)現(xiàn)，從而對(duì)其臨床疾病治療提供依據(jù)，改善梅毒患者的預(yù)后，應(yīng)用價(jià)值較高。

[1]張曉紅,張倩,周學(xué)紅，等.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒特異性抗體在臨床篩查試驗(yàn)中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2014,17 (10):780-783.

[2]武強(qiáng),章雙虎,柯文才，等.化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)梅毒特異性抗體進(jìn)行梅毒篩查的可行性評(píng)價(jià)[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志,2014,24 (3):769-771.

[3]褚雪蓮,嚴(yán)麗英.梅毒螺旋體抗體在診斷新生兒梅毒中的應(yīng)用和討論[J].中國(guó)性科學(xué),2016,25(5):87-89.

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[6]郭家權(quán),洪敏,林永前，等.酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)與甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)在梅毒檢驗(yàn)中應(yīng)用價(jià)值的比較[J].廣東醫(yī)學(xué),2014,35(5):738-740.

[7]易黎鴻.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)與梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)在梅毒檢測(cè)中的應(yīng)用效果對(duì)比[J].現(xiàn)代診斷與治療,2015,26(13):3015-3016.

[8]Glatz,M.,Juricevic,N.,Altwegg,M，et al.A multicenter prospective trial to asses a new real-time polymerase chain reaction for detection of Treponema pallidum,herpes simplex-1/2 and Haemophilus ducreyi in genital,anal and oropharyngeal ulcers[J].Clinicalmicrobiology and infection:European Society of Clinical Microbiology and Infectious Diseases,2014,20(12): 1020-1027.

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R446.6

A

1672-5654（2017）05（b）-0054-02

2017-02-18）

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.14.054

唐英（1978-），女，山東青島人，本科，主管技師，研究方向：血液檢測(cè)。