劉榮利+韓寧娟+李亮??

摘要：氟喹諾酮是一種人工合成的廣譜抗生素，在防治動物及人類的感染性疾病中具有重要應(yīng)用。由于抗生素藥物的不合理使用，導(dǎo)致在動物源性食品中殘留超標(biāo)，長期食用將嚴(yán)重危害人體健康，因此，對于動物源性食品中氟喹諾酮殘留檢測具有重要的意義。有關(guān)氟喹諾酮殘留的檢測方法大致可分為微生物法、免疫法、色譜法和光譜法等。

關(guān)鍵詞：氟喹諾酮藥物 檢測方法 研究進展

中圖分類號：S859文獻標(biāo)識碼：A文章編號：1009-5349（2017）09-0189-02

一、前言

氟喹諾酮（fluoroquinolones，F(xiàn)QS）是一系列由人工合成的含有4-喹諾酮母核結(jié)構(gòu)，母核6位C上被氟取代的一類廣譜抗菌藥物，抗菌作用強，對革蘭氏陽性菌與陰性菌均有作用。具有吸收快，體內(nèi)分布廣，血藥濃度高，血漿半衰期長，合成簡便，藥品價格低廉等特點，常用于動物及人感染性疾病的治療。

FQS藥物在家畜、家禽的飼養(yǎng)中應(yīng)用廣泛，抗生素的不合理使用，導(dǎo)致其在動物性食品中的殘留超標(biāo)，如果人體長時間攝入該類食物，不僅會引起人體對FQS藥物產(chǎn)生耐藥性，而且藥物殘留通過食物對人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，胃腸道等器官危害較大，嚴(yán)重威脅人類健康。關(guān)于乳、肉制品中FQS抗生素的殘留全球都有嚴(yán)格規(guī)定。因此，對于動物源性食品中FQS藥物殘留檢測具有重要的意義?，F(xiàn)將FQS藥物殘留的檢測方法進行綜述。

二、FQS藥物的檢測方法

（一）微生物法

微生物檢測利用FQS藥物對微生物生理代謝的抑制作用，進行FQS藥物殘留的測定。該方法經(jīng)濟方便，但靈敏度和特異性較低，難以進行藥物殘留的準(zhǔn)確定性定量分析，適用于大量樣品的篩選，可對藥物殘留進行初步檢測。邢應(yīng)壽[1]等建立了環(huán)丙沙星、諾氟沙星、恩諾沙星三種藥物在肉雞組織中殘留的微生物檢測法，結(jié)果發(fā)現(xiàn)24h后，環(huán)丙沙星殘留量較大。

（二）免疫法

1.酶聯(lián)免疫法

酶聯(lián)免疫法（ElISA） 基于抗原抗體的免疫反應(yīng)及酶的催化反應(yīng)有機結(jié)合而發(fā)展起來的一項技術(shù)，采用酶標(biāo)抗體檢測FQS藥物殘留，特異性強，方便快速，可用多種該類藥物殘留的篩選測定。

2.免疫親和色譜法

免疫親和色譜法（HPIAC）將免疫技術(shù)和色譜技術(shù)相結(jié)合，通過合適的方法將抗體或抗原結(jié)合在載體上，通過抗體與抗原之間反應(yīng)的特異性和可逆性進行色譜分離，目標(biāo)物經(jīng)抗體洗脫后，將所得提取物采用氣相或者高效液相色譜方法進行定量檢測分析。Holtzapple等[3]通過HPIAC方法對牛血清中4種FQS藥物殘留進行了分析。將抗沙拉沙星抗體以共價鍵結(jié)合在免疫親和色譜柱上，氟喹諾酮與抗體結(jié)合后，在反相色譜柱上分離，熒光檢測后，得到4種樣品回收率均大于95%。

（三）色譜法

1高效液相色譜法

高效液相色譜法（HPLC）具有高靈敏度的紫外或熒光檢測器，選擇性好，分離能力強，廣泛應(yīng)用于各種藥物及其制劑的分析測定中。喬坤云[4]等采用HPLC法，2475熒光檢測器對雞肉中的4種FQS藥物殘留進行了檢測。雞肉樣品加入pH=7的磷酸緩沖液勻漿提取，離心、固相萃取C18小柱凈化后將收集的洗脫液經(jīng)膜過濾后進行分析檢測，結(jié)果表明，4種組分在濃度為0025-020μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.液相色譜-質(zhì)譜法聯(lián)用

液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）聯(lián)用較之于高效液相色譜其檢測靈敏度更高，可在色譜分離不完全的情況下減少液相色譜中雜峰的干擾，同時進行多種FQS藥物殘留的定性定量分析。楊朝琳[5]采用HPLC-MS/MS快速測定了雞蛋中8種FQS藥物的殘留情況。采用Eclipse plus C18柱分離，樣品經(jīng)提取、冷凍離心、旋蒸濃縮、除雜之后進行HPLC-MS/MS定性、定量分析。研究表明，8種藥物在2-50μg/kg范圍內(nèi)具有良好線性關(guān)系，所得檢出限為00005-022μg/kg。

（四）高效毛細管電泳

高效毛細管電泳，采用高壓電場，毛細管為分離通道，根據(jù)樣品中各組分之間的淌度及分配系數(shù)的差異，從而實現(xiàn)待測樣的分離。分離效果佳，分析速度快，使用成本低。孫漢文等[6]通過高效毛細管電泳對人體尿液中8種FQS藥物進行了快速有效的分離，以紫外檢測器在278nm時，對8種藥物同時進行檢測，回收率為8182%-10424%，檢出限為105-208 mg/L。

（五）光譜法

目前，紫外-可見分光法和熒光分光法是光譜法中常用的測定抗生素殘留的方法。其中熒光分光法操作檢便、分析快速，依據(jù)共振瑞利散射原理，可對待測物進行定性定量分析。李勤[7]等采用熒光分光光度法研究了FQS抗生素與赤蘚紅體系，發(fā)現(xiàn)赤蘚紅可分別與莫西沙星、加替沙星形成離子締合物，兩種離子締合物的均在568nm、342nm與378nm出現(xiàn)特征譜峰。在002-27μg/mL范圍內(nèi)莫西沙星線性良好，加替沙星在006-102μg/mL線性范圍良好。并對人體尿液中兩種藥物的殘留進行了檢測。

三、結(jié)語

除了采用微生物法、免疫法、色譜法、光譜法之外，還可通過電化學(xué)分析法對FQS藥物殘留進行分析檢測。比較發(fā)現(xiàn)，微生物法和酶聯(lián)免疫法適用于FQS藥物殘留定性分析，操作簡便，成本低，適用于大量樣品的篩選。高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜法聯(lián)用、高效毛細管電泳法、紫外-可見分光光度法、熒光分光光度法均可進行FQS藥物殘留的定性定量分析。隨著新技術(shù)的不斷涌現(xiàn)，F(xiàn)QS藥物殘留的檢測方法將不斷的提高與完善，以確保FQS藥物殘留的檢測更加靈敏快捷，為畜牧業(yè)與養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供指導(dǎo)，確保動物源性食品的質(zhì)量安全。

參考文獻：

[1]邢應(yīng)壽.三種FQS藥物在雞組織中殘留的微生物法檢測研究[D].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[2] 魏東，楊正濤，李穎，等.氟喹諾酮類藥物殘留免疫學(xué)檢測方法的研究[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2009，29（12）：1593-1598.

[3] Holtzapple C K，Buckley S A，Stanker L H.Determination of fluoroquinolones in serum using an on-line clean-up column coupled to high-performance immunoaffinity–reversed-phase liquid chromatography[J].Journal of Chromatography B： Biomedical Sciences and Applications，2001，754（1）： 1-9.

[4] 喬坤云，孫濤，劉圣紅，等.高效液相色譜熒光法檢測雞肉中4種氟喹諾酮藥物殘留[J].分析儀器，2015（6）：43-46.

[5]楊朝琳.高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法檢測動物源性食品中的抗生素[D].浙江師范大學(xué)，2016.

[6]孫漢文，趙偉，何攀.毛細管電泳有效分離和同時檢測8種氟喹諾酮[J].河北大學(xué)學(xué)報，2008，28（3）：152-157.

[7]李勤，周尚，楊季冬.FQS抗生素與赤蘚紅的共振瑞利散射光譜研究及其分析應(yīng)用[J].分析實驗室，2011，30（1）：36-40.

責(zé)任編輯：楊國棟