馮曉友，黃毅，劉芳

（河南省正陽種豬場，河南正陽463612）

規(guī)模化豬場消毒效果的評估分析

馮曉友，黃毅，劉芳

（河南省正陽種豬場，河南正陽463612）

隨著養(yǎng)豬業(yè)的快速發(fā)展，規(guī)?；潭炔粩嗵岣?，在提高了養(yǎng)殖效益的同時，疫病的多發(fā)也成為困擾養(yǎng)殖場的重要問題。疫病的流行必須具備三個要素：傳染源、傳播途徑和易感動物。在養(yǎng)豬場，有時雖然沒有疫病的發(fā)生，但外界環(huán)境中存在傳染源，病原體就會通過空氣、飼料、人員、飲水等途徑入侵，進而引起豬群發(fā)病。因此采取有效的生物安全措施是切斷疫病傳播的途徑和防止疫病蔓延的有效措施。消毒是一項經(jīng)常性和基礎(chǔ)性的生物安全措施，選取有效的消毒劑和作用方式，是保證消毒效果的關(guān)鍵。

該研究通過評估某規(guī)?；i場中人員消毒、膠靴消毒、熏蒸消毒、環(huán)境消毒以及消毒液的有效時間和紫外線消毒效果的好壞，為實際生產(chǎn)應用提供參考。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

EP管（1.5 ml），大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA），麥康凱培養(yǎng)基，培養(yǎng)皿，棉簽，高壓鍋，操作臺，移液槍，槍頭等。

1.2 實驗方法

1.2.1 人員消毒（消毒間噴霧消毒效果檢驗）

噴霧消毒前采樣：用滅菌棉簽涂抹衣服表面5 cm×5 cm大小區(qū)域，之后將棉簽置于滅菌EP管中，蓋好管蓋，立即送檢或置于4℃冰箱保存。每份樣品設置兩個重復。

噴霧消毒后采樣：人員進入消毒通道前，消毒通道先提前進行氣化噴霧，待消毒通道內(nèi)充滿消毒劑氣霧時人員進入，待衣服上完全沾滿消毒劑氣霧（約99秒），走出噴霧消毒通道，消毒劑作用一段時間（依據(jù)使用消毒劑的說明書）后采樣。采樣方法同進入消毒通道前采樣，即用滅菌棉簽涂抹衣服表面5 cm×5 cm大小，之后將棉簽置于滅菌EP管中，蓋好管蓋，立即送檢或置于4℃冰箱保存。每份樣品設置兩個重復。

1.2.2 膠靴過消毒池效果

過消毒池前采樣：膠靴進入消毒池前選擇膠靴鞋底部分（鞋底無糞便），用滅菌棉簽涂抹，之后將棉簽置于滅菌EP管中，蓋好EP管管蓋，立即送檢或置于4℃冰箱保存。每份樣品設置兩個重復。

過消毒池之后采樣：膠靴過消毒池之后經(jīng)過一段時間（按消毒劑說明書規(guī)定的消毒時間），選擇與過消毒池前采樣臨近的部位進行采樣，采樣面積一致。每份樣品設置兩個重復。

1.2.3 熏蒸消毒

沖圈干燥后采樣：待空圈沖洗干凈并干燥后，分別選取地面、豬欄各2～3處作為采樣地點（采樣地點要包括角落、平面）。用滅菌棉簽涂抹地面或豬欄5 cm×5 cm大小區(qū)域，之后將棉簽置于滅菌EP管中，蓋好EP管管蓋，立即送檢或置于4℃冰箱保存。每個采樣地點設置兩個重復。

熏蒸后采樣：空圈沖洗干燥后進行熏蒸，熏蒸后選取同一地點相同體積進行采樣，采集方法同上。每份樣品設置兩個重復。

1.2.4 環(huán)境消毒

圈舍內(nèi)部帶豬噴霧消毒：地面、豬欄各選擇一處作為采樣地點，分別在消毒前和消毒后（按消毒劑說明書規(guī)定消毒藥作用時間）進行采樣，每次采樣在同一地方的不同地點，采樣面積應大小一致。

采樣方法：棉拭子采樣方法，用滅菌棉簽涂抹地面或豬欄5 cm×5 cm大小區(qū)域，之后將棉簽置于滅菌EP管中，蓋好EP管管蓋，立即送檢或置于4℃冰箱保存。消毒前和消毒后的采樣點設置兩個重復。

環(huán)境消毒（圈舍外部消毒）：在豬圈圈舍外區(qū)域任選1～2處作為采樣地點，分別在消毒前和消毒后（按消毒劑說明書規(guī)定消毒藥作用時間）進行采樣，每次采樣在同一地方的不同地點，采樣面積應大小一致。

采樣方法：棉拭子采樣方法，用滅菌棉簽涂抹地面或墻壁5 cm×5 cm大小區(qū)域，之后將棉簽置于滅菌EP管中，蓋好EP管管蓋，立即送檢或置于4℃冰箱保存。

1.2.5 消毒池消毒液有效時間檢測

分別在更換消毒液（燒堿）后0 d、1 d、2 d、3 d進行采樣。

采樣方法：用無菌注射器吸取消毒池底部消毒液1 ml，將注射器針頭掰彎并蓋上針頭帽，立即送檢或置于4℃冰箱保存。

1.2.6 紫外線消毒

消毒前采樣：紫外線照射前用滅菌棉簽涂抹衣服表面5 cm×5 cm大小區(qū)域，之后將棉簽置于滅菌EP管中，蓋好管蓋，立即送檢或置于4℃冰箱保存。

消毒后采樣：紫外燈分別照射30 min和60 min后按照照射前的采樣方法進行采樣，保存好后送檢。

表1顯示了不同消毒類別所使用的消毒劑的名稱和按照說明書確定的最佳消毒濃度和消毒方法。

表1 不同類型消毒方法使用的消毒劑名稱以及濃度和消毒方法

1.2.7 樣品的處理

向以上采集的裝有棉簽的EP管中加入1 ml滅菌生理鹽水，劇烈震蕩10 min。取0.2 ml樣品處理液加入滅菌TSA培養(yǎng)基中，涂菌棒涂布均勻，37℃培養(yǎng)24 h，記錄菌落生長情況。

1.2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

殺菌率的計算：用消毒前的菌落總數(shù)減去消毒后的菌落總數(shù)，再除以消毒前的菌落總數(shù)，乘以100%，即可得出不同消毒類型的殺菌率。

2 結(jié)果

2.1 人員消毒效果

對人員進出消毒間噴霧消毒效果進行評估，發(fā)現(xiàn)消毒前后菌落數(shù)差異不大。

2.2 膠靴過消毒池效果

通過對膠靴過消毒池前后消毒效果的驗證，發(fā)現(xiàn)消毒液對膠靴所攜帶細菌的平均殺菌率為56.7%。

2.3 熏蒸消毒效果

通過對圈舍的熏蒸消毒研究發(fā)現(xiàn)，圈舍沖洗干凈并熏蒸后的平均殺菌率要比只進行沖洗干燥的平均殺菌率顯著提高。

2.4 環(huán)境消毒效果

通過對圈舍內(nèi)外環(huán)境的消毒研究發(fā)現(xiàn)，圈舍內(nèi)外消毒前后的菌落數(shù)沒有明顯的變化，甚至出現(xiàn)消毒后菌落數(shù)相對于消毒前的菌落數(shù)增加的現(xiàn)象。

2.5 消毒池消毒液有效消毒時間的檢測

通過對消毒池中消毒液有效消毒時間的檢測，發(fā)現(xiàn)隨著時間的延長，在2 d的時候菌落數(shù)為30個，而在3 d后，菌落數(shù)增加到110個。

2.6 紫外線消毒效果

通過對紫外燈消毒前和分別消毒30 min和60 min后采樣來驗證消毒效果，發(fā)現(xiàn)紫外燈消毒30 min相對于消毒前的平均殺菌率為75%，紫外燈消毒60 min相對于消毒前的平均殺菌率為87.5%。

3 分析與討論

該研究從人員進出的消毒到圈舍的消毒等各個方面進行了研究，得出如下結(jié)論：①人員進出噴霧間噴霧消毒和紫外燈分別消毒30 min和60 min的效果不是太明顯，這可能和采樣有關(guān)。但是消毒后相對于消毒前菌落數(shù)是減少的，這表明消毒還是有效的；②膠靴過消毒池后，消毒液對細菌的平均殺菌率為56.7%，表明消毒有效。當膠靴過消毒池后，鞋底的贓物被清洗，膠靴上粘附的消毒液也有殺菌作用；③相對于沖圈前，沖圈干燥后豬欄的平均殺菌率為62.5%，而沖圈干燥又進行熏蒸后的平均殺菌率為100%，墻面的平均殺菌率分別為25%和78.4%，地面的平均殺菌率分別為55%和95%。這表明熏蒸消毒相對于沖圈后只進行干燥的殺菌效果更好；④環(huán)境消毒（圈舍外及豬舍內(nèi)環(huán)境）的消毒效果較差，甚至出現(xiàn)了消毒后菌落數(shù)增加的情況，這可能是由于環(huán)境太臟，污穢沉積過厚，未進行清掃就噴灑消毒藥，少量的消毒藥無法消滅細菌。這也提示我們，在進行噴灑消毒之前，一定要對環(huán)境進行徹底的打掃清洗；⑤對于消毒池的維持時間，在0 d和1 d時菌落數(shù)較少，但是2 d后細菌的數(shù)量就上升到30個，2 d后菌落數(shù)為110個。作為消毒池，自身不能有太多細菌，這次實驗結(jié)果也提示我們，消毒池的消毒液應2 d或1.5d更換一次。

消毒措施是豬場生物安全體系中的重要環(huán)節(jié)，在預防和控制傳染性疾病方面發(fā)揮著重要作用，不僅可以降低豬場環(huán)境中病原微生物的數(shù)量，而且還可以降低豬場微生物的污染程度，阻斷病原微生物從外部環(huán)境中傳入和在豬群內(nèi)部的群內(nèi)擴散，顯著降低了細菌性疾病及病毒性疾病的發(fā)生率。而有效的生物安全體系就是在傳染源和易感動物之間建立起一個隔離屏障。該研究從人員的進出消毒到圈舍的消毒等方面進行了細致的分析，從而為規(guī)?；?、集約化養(yǎng)豬業(yè)病原的防控提供參考依據(jù)。