戴維德，陳秀華，馬娜，王川予，吳明曉，陳嵐，何淑蓉，韓秀婕，郭發(fā)金

(北京醫(yī)院，a 超聲科,b 病理科,北京 100730)

·論著·

超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢查對甲狀腺癌的診斷價值

戴維德a，陳秀華a，馬娜a，王川予a，吳明曉a，陳嵐b，何淑蓉b，韓秀婕a，郭發(fā)金a

(北京醫(yī)院，a 超聲科,b 病理科,北京 100730)

目的 探討超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢查對于甲狀腺癌的診斷價值。方法 對54例甲狀腺結節(jié)患者進行超聲引導下細針穿刺抽吸，所獲得標本送細胞學檢查和組織塊免疫組織化學檢測。將穿刺病理結果與術后病理結果或隨訪結果進行回顧性分析及對比。結果 穿刺取材成功率為96.3%(52/54)。52例患者中，47例細胞學檢查與細胞塊免疫組織化學檢測聯(lián)合診斷結果與隨訪結果相符，臨床診斷符合率為90.4%(47/52)。細胞塊免疫組織化學檢測結果：甲狀腺癌36例，良性病變11例。術后病理或臨床隨訪結果：甲狀腺癌39例，良性病變13例。該技術對甲狀腺癌的診斷敏感度為92.3%(36/39)，特異度為100%(11/11)。結論 超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢測技術對甲狀腺癌的診斷簡便實用、安全可靠、準確率高。

甲狀腺腫瘤；活組織檢查，細針；免疫組織化學；超聲檢查

甲狀腺癌(TC)是最為常見的頸部惡性腫瘤[1]。如果能早期發(fā)現、早期治療，對于TC治療有重要的臨床意義。超聲引導細針穿刺細胞學檢查(UG-FNAC)是一種成熟的TC診斷方法[2]，具有快速、簡便、有效的特點。但仍有10%～40%的結節(jié)無法通過這項檢查得到明確診斷。因此探索新的TC診斷方法，從而提高TC的診斷水平，成為本研究領域的研究熱點。隨著分子診斷技術的進步，甲狀腺結節(jié)分子標志物檢測對于TC的診斷、預后甚至選擇合適的治療方案都具有重要的意義[3]。本研究通過對54例甲狀腺結節(jié)患者進行超聲引導細針抽吸細胞學檢查的同時制作細胞塊，對其進行分子標志物的免疫組織化學檢測，評價該技術對于TC的診斷價值。

1 對象和方法

1.1 研究對象 選取2016年1月至2016年12月在我院門診及病房就診的甲狀腺結節(jié)患者54例，其中男13例，女41例；年齡23～65歲，平均年齡(43.6±3.2)歲。本組病例中甲狀腺結節(jié)直徑在0.3～1.5 cm。細針穿刺活檢實施指征：具有超聲可疑惡性征象中的一個或數個(形態(tài)不規(guī)則、縱橫比大于1、邊界模糊不清、極低回聲、微鈣化、中央型血流)。在行甲狀腺穿刺前常規(guī)檢測凝血功能、血常規(guī)；醫(yī)生向患者或其家屬詳細交代超聲引導穿刺的方法、目的、注意事項及可能的并發(fā)癥，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 設備器材 百勝Mylab90型彩色多普勒超聲成像系統(tǒng)，探頭頻率5～12 MHz。穿刺器材：10 mL一次性注射器和25G空針各2支。

1.2.2 超聲引導下穿刺取材 患者取仰臥位或側臥位，充分顯露穿刺部位，先進行常規(guī)甲狀腺超聲檢查，選擇最佳穿刺點、測量進針深度并完成體表定位。穿刺部位常規(guī)消毒鋪巾，2%利多卡因局部麻醉后，手持10 mL注射器接25G針頭，在彩色多普勒超聲引導下避開大血管、神經及氣管等重要組織和臟器，進針到達腫塊邊緣。穿刺入腫塊內后，提拉注射器針芯至2 mL刻度處，使注射器保持負壓狀態(tài)，反復旋轉抽吸3～5次后改變進針方向，使針頭在腫塊內呈扇形朝不同方向抽吸，當注射器乳頭內出現吸取物后，去負壓退針。一部分吸取物常規(guī)涂片2～3張，置入95%乙醇固定液中送檢。一部分注入液基薄層細胞學檢測(TCT)小瓶中并送檢。穿刺部位無菌紗布覆蓋并以適當力量壓迫穿刺點10 min。觀察20 min無不良反應方可離開。

1.3 免疫組織化學 抗體選用細胞周期l蛋白(CyclinDl)和CD117。將細胞塊脫蠟和水化，胰酶抗原修復，阻斷內源性過氧化物酶。先加入CyclinD1/CD117抗體,再加入加酶標聚合物。隨后顯色、復染、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠和蓋玻片封片。

1.4 結果判讀標準 Cyclin D1的陽性表達定位于細胞核。CD117的陽性表達定位于細胞漿。陽性細胞著色特征為棕黃色或棕褐色細顆粒樣分布。評分標準采用半定量積分法，將染色強度分3級：無著色記1分，淺著色記2分，棕黃色或棕褐色記3分；陽性細胞百分數≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。上述兩項評分的乘積為最后得分：0～1分為陰性(-)；2～3分為陽性(+～++)；≥4分為強陽性(+++)。

1.5 統(tǒng)計學處理 統(tǒng)計病例取材成功率、臨床診斷符合率。評價超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學技術對于TC診斷的敏感度、特異度。

2 結果

2.1 超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢測結果 本組病例穿刺取材成功率為96.3%(52/54)。穿刺細胞塊免疫組織化學結果：TC 36例，甲狀腺良性病變11例，5例無法診斷。術后病理或臨床隨訪結果：TC 39例，良性病變13例。

2.2 超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢測評價TC 超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢測對TC的診斷敏感度為92.3%(36/39)，特異度為100%(11/11)。臨床診斷符合率為90.4%(47/52)。見表1。

表1 超聲引導細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢測診斷TC(例)

3 討論

甲狀腺結節(jié)是一種常見疾病，臨床發(fā)現的甲狀腺結節(jié)有5%～10%為TC[4]，占癌癥死亡病例的0.4%。FNAC簡便、快速、準確，已經成為臨床診斷甲狀腺結節(jié)的首選檢查方法，TC有其典型的細胞學特征，包括核溝、核內包涵體、核重疊、及核異型等細胞核改變，而具備這些特征對于TC的明確診斷具有決定意義。但仍有少部分FNAC檢查結果模棱兩可，無法對結節(jié)性質予以確診。隨著分子診斷技術的不斷提高，對與TC相關的分子標志物的研究也越來越深入，這些標志物對于TC的診斷、預后、治療方案的選擇發(fā)揮重要作用[5]。本研究在超聲引導下，行甲狀腺結節(jié)細針穿刺并制作細胞塊，對其進行CyclinDl和CD117的免疫組織化學檢測，研究其在TC診斷與鑒別診斷方面的診斷價值和臨床意義。

CyclinD1屬于細胞周期蛋白家族，是一種重要的細胞周期正性調控因子。它主要在細胞周期G1進人S期過程中發(fā)揮調節(jié)作用。正常生理狀態(tài)下，CyclinD1在細胞進入S期后會快速裂解。如未發(fā)生裂解而表現為過表達，細胞周期的正常發(fā)展過程隨之會受到影響；表現為細胞增殖加快，從Gl期快速進入S期，最終發(fā)生癌變。研究發(fā)現 CyclinD1的過表達與TC的發(fā)生、發(fā)展及不良預后密切相關，可作為鑒別甲狀腺結節(jié)良、惡性及評估TC侵襲、轉移能力的分子指標[6-8]。CD117是Ⅲ型跨膜酪氨酸激酶受體家族成員，在人體多種細胞中表達。CD117在胃腸道間質腫瘤、精原細胞瘤、腺樣囊性癌等多種腫瘤的診斷與鑒別診斷中發(fā)揮重要作用。研究表明，CD117在TC的表達率顯著降低，其表達水平與CyclinD1完全相反[9]。兩者聯(lián)合可以顯著提高TC良惡性鑒別的準確性。

細胞塊作為細胞學診斷重要手段之一，與傳統(tǒng)的細胞涂片相比，細胞集中，背景清晰。克服了傳統(tǒng)涂片細胞堆積重疊擁擠、厚薄不均等現象，進一步提高了細胞學診斷的陽性率。細胞塊可以連續(xù)切片，標本易于保存，能做免疫組織化學染色、特殊染色或分子病理學檢測。而免疫組織化學技術是應用免疫學基本原理—抗原抗體反應，即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內抗原，對其進行定位、定性及相對定量的研究，結果準確、客觀。近年來，免疫組織化學技術逐步發(fā)展成為臨床病理診斷不可缺少的技術手段[10-13]。

本研究中，超聲引導細針抽吸取得的細胞塊，選取CyclinD1和CD117進行免疫組織化學標記染色，可進一步明確甲狀腺結節(jié)的良惡性 。本研究中，細針取材僅有2例不滿意，成功率為96.3%。47例細胞塊免疫組織化學檢測結果與隨訪結果相符，臨床診斷符合率為90.4%。細胞塊免疫組織化學結果與手術病理或臨床隨訪結果比較，該技術對TC的診斷敏感度為92.3%(36/39)，特異度為100%(11/11)。表明細針抽吸細胞塊免疫組織化學檢測技術對TC的術前診斷和鑒別診斷具有較高的應用價值，尤其適用于單純FNAC診斷不明確的病例。

總之，UG-FNAC標本細胞學檢查結合細胞塊免疫組織化學檢查技術簡便實用、安全，患者依從性好，具有較高的臨床診斷符合率和敏感度。

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The evaluation of ultrasound-guided fine needle aspiration cytology combined with cell block immunohistochemistry in the diagnosis of thyroid carcinoma

Dai Weide*,Chen Xiuhua,Ma Na,Wang Chuanyu,Wu Mingxiao,Chen Lan，He Shurong，Han Xiujie，Guo Fajin

(*Department of Ultrasound,Beijing Hospital,Beijing 100730,China)

GuoFajin,Email:guofajinbh@163.com

Objective To evaluate the clinical value of ultrasound-guided fine needle aspiration cytology combined with cell block immunohistochemistry in diagnosing thyroid carcinoma.Methods Thyroid nodules of 54 patients were punctured and aspirated by using fine needle under ultrasound-guided.The obtained samples were tested for cytology and cell block was detected by immunohistochemistry.The conclusions and the follow-up results were retrospectively analyzed and compared.Results The puncture success rate of this group was 96.3%(52/54).Among 52 patients,the results of the cytology combined with cell block immunohistochemistry of 47 cases were consistent with follow-up results.The coincidence rate of clinical diagnosis was 90.4%(47/52).The diagnose results of cytology combined with cell block immunohistochemistry:36 cases of thyroid carcinoma,11 cases of benign lesion.The pathology diagnoses results after operation or follow-up:39 cases of thyroid carcinoma,13 cases of benign lesion.The sensitivity and specificity of diagnose was 92.3%(36/39) and 100%(11/11),respectively.Conclusion Ultrasound-guided fine needle aspiration cytology combined with cell block immunohistochemical diagnosis of thyroid carcinoma is simple,practical,safe and reliable.

Thyroid neoplasms；Biopsy,fine-needle;Immunohistochemistry；Ultrasonography

國家科技支撐計劃課題(2014BAI08B03)

戴維德，主任醫(yī)師，Email：dai.weide@126.com

郭發(fā)金，主任醫(yī)師，碩士生導師，Email:guofajinbh@163.com

R736.1

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2017.03.001

2017-01-13)