【摘要】 目的 探討精子DNA碎片率與體外受精（IVF）實驗室結(jié)局的關(guān)系。方法 對IVF治療的男性患者開展常規(guī)精液檢查、精子DNA碎片率檢查以及精子核蛋白不成熟度檢查。分析精子DNA碎片率與IVF優(yōu)胚率的關(guān)系。結(jié)果 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關(guān)（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運動精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無明顯相關(guān)性（P>0.05）。精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運動精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無明顯相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 開展精子DNA碎片率檢測， 可對IVF優(yōu)胚率起到一定的預(yù)測作用。

【關(guān)鍵詞】 體外受精；精子DNA碎片率；優(yōu)胚率

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2017.12.040

精子DNA碎片率可對機體遺傳物質(zhì)DNA所受的損傷進(jìn)行有效反映， 對精子DNA碎片率開展檢測， 可對精子的功能狀況進(jìn)行有效預(yù)測[1-5]。本次研究就通過對開展IVF治療的男性患者開展常規(guī)精液檢查、精子DNA碎片率檢查以及精子核蛋白不成熟度檢查， 探討精子DNA碎片率與體外受精實驗室結(jié)局的關(guān)系。報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 選取2016年1～3月本院收治的患有不育癥， 開展體外受精-胚胎移植（IVF-ET）治療的患者， 共112對。男112例， 年齡23～41歲， 平均年齡（31.5±5.1）歲；女112例， 年齡20～40歲， 平均年齡（29.6±3.8）歲。對少弱精子癥較為嚴(yán)重的患者， 或獲卵數(shù)<5個進(jìn)行排除。

1. 2 研究方法 首先對男性患者的精液進(jìn)行采集以及處理。按照WHO實驗室手冊上的相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行操作。采集精液前禁欲2～7 d， 采集方法為手淫法， 采集后置于恒溫板， 溫度控制37℃， 于1 h內(nèi)開展檢測。采用計算機對精子濃度， 以及前向運動百分率進(jìn)行分析， 采用Diff-Quik然后對精子的形態(tài)學(xué)開展分析。采用染色質(zhì)擴散法對精子DNA碎片開展檢測， 于預(yù)制載玻片上涂抹含精瓊脂糖精液， 通過變性、去核蛋白、脫水、染色后， 借助顯微鏡對精子進(jìn)行觀察。如精子存在大、中暈環(huán)， 則為正常精子， 其余為碎片異常精子。以碎片精子數(shù)與計數(shù)總數(shù)（500個）之比為精子DNA碎片率[6]。精子核蛋白不成熟度采用苯胺藍(lán)染色法進(jìn)行檢測， 檢測試劑購自山東德惠生物技術(shù)有限責(zé)任公司， 檢測方法參照試劑盒說明書進(jìn)行。按照常規(guī)方法， 為患者開展降調(diào)節(jié)， 同時開展促排卵， 于卵口取IVF常規(guī)法授精， 授精完成16～18 h， 對受精情況進(jìn)行觀察。第3天對胚胎發(fā)育情況進(jìn)行觀察。如胚胎的評分為6Ⅰ、6Ⅱ、7Ⅰ、7Ⅱ、8Ⅰ、8Ⅱ， 則為優(yōu)質(zhì)胚胎。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析， 雙測檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 影響精子DNA碎片率的相關(guān)因素 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關(guān)（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運動精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無明顯相關(guān)性（P>0.05）。見表1。

2. 2 影響精子核蛋白不成熟度的相關(guān)因素 精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運動精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無明顯相關(guān)性（P>0.05）。見表2。

3 討論

目前臨床上對精子DNA損傷的檢測手段主要包括兩種， 一種是直接法， 另一種是間接法。直接法是通過將探針直接結(jié)合入精子DNA發(fā)生損傷的部位， 對DNA的斷裂進(jìn)行直接檢測[7]。間接法是通過對碎片化DNA易于變性的特點進(jìn)行利用， 對碎片化DNA的變性易感性進(jìn)行檢測[8]。精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析（SCSA）法的檢測基礎(chǔ)為流式細(xì)胞技術(shù)， 可測定樣本量大， 測定結(jié)果穩(wěn)定性強， 更為可靠。但該檢測方法成本高， 花費昂貴， 普及度不高。因此本次研究采用的是精子染色質(zhì)擴散試驗（SCD）法， 該方法檢測結(jié)果同SCSA相關(guān)性良好， 且花費低， 耗時短[9-11]。

本次研究結(jié)果顯示， 精子DNA碎片率與男性年齡呈正相關(guān)（r=0.184， P=0.019<0.05）， 與前向運動精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.219， P=0.008<0.05）， 與優(yōu)胚率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.220， P=0.008<0.05）， 與精子濃度、正常精子百分率、IVF受精率無明顯相關(guān)性（P>0.05）。與相關(guān)的研究結(jié)果相符[2]。有學(xué)者通過設(shè)置生育對照組， 并未發(fā)現(xiàn)精子DNA碎片率與年齡呈相關(guān)性， 提示年齡對于精子DNA碎片率所起的并非主要作用[3]。同時本次研究結(jié)果顯示， 精子核蛋白不成熟度與精子濃度呈負(fù)相關(guān)（r=-0.327， P=0.001<0.05）， 與正常精子百分率呈負(fù)相關(guān)（r=-0.226， P=0.008<0.05）， 與男性年齡、前向運動精子百分率、優(yōu)胚率、IVF受精率無明顯相關(guān)性（P>0.05）。和前人的研究結(jié)果相符[12-14]。

綜上所述， 開展精子DNA碎片率檢測， 可對IVF優(yōu)胚率起到一定的預(yù)測作用。

參考文獻(xiàn)

[1] 陳泯燕， 黃國寧， 王亞平， 等. 精子DNA碎片與體外受精結(jié)局的關(guān)系. 生殖與避孕， 2010， 30（11）：732-737.

[2] 方小武， 韋劍洪， 陳捷， 等. 精子DNA碎片率與體外受精實驗室結(jié)局的關(guān)系. 中國優(yōu)生與遺傳雜志， 2014， 2（6）：125-126.

[3] 張丹， 吳尊鳳， 龐敏. 精子DNA碎片率與精液相關(guān)參數(shù)、體外受精胚胎移植結(jié)局的關(guān)系. 新疆醫(yī)學(xué)， 2016， 3（5）：531-533.

[4] 陳泯燕. 精子DNA碎片與體外受精結(jié)局關(guān)系的研究. 重慶醫(yī)科大學(xué)， 2011.

[5] 方力. 精子DNA碎片率與男性年齡、精子活動力和體外受精結(jié)局關(guān)系的研究. 浙江大學(xué)， 2012.

[6] 蔡昭煒. 精子DNA碎片率與體外受精結(jié)局的相關(guān)性研究. 深圳中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2016， 26（17）：15-16.

[7] 方力， 樓麗君， 葉英輝， 等. 精子DNA碎片率與男性年齡、精子活動力和體外受精結(jié)局關(guān)系的研究. 中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志， 2011， 28（4）：432-435.

[8] 崔險峰， 丁攀， 張云山，等. 精索靜脈曲張對精子DNA碎片和體外受精結(jié)局的影響. 山東醫(yī)藥， 2011， 51（44）：17-19.

[9] 唐亮， 朱元， 吳興武， 等. 精子DNA碎片指數(shù)對體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局的影響. 江西醫(yī)藥， 2016， 51（12）：1299-1301.

[10] 張帥， 孟嘯寅， 卓勝楠， 等. 精子DNA碎片對IVF-ET結(jié)局的影響. 天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 2013， 19（2）：124-126.

[11] 程立子， 韋劍洪， 于文娟， 等. 優(yōu)選后精子DNA碎片指數(shù)及與體外受精的關(guān)系. 檢驗醫(yī)學(xué)與臨床， 2016， 13（4）：448-450.

[12] 徐步芳， 孫貽娟， 陸小溦， 等. 精子DNA碎片率對常規(guī)體外受精-胚胎移植結(jié)局的影響. 中國男科學(xué)雜志， 2011， 25（8）：23-26.

[13] 黃智勇， 王立雅， 謝春雨， 等. 精子DNA碎片指數(shù)對體外受精-胚胎移植妊娠結(jié)局預(yù)測價值的研究. 中國當(dāng)代醫(yī)藥， 2016， 23（4）：97-99.

[14] 曾玖芝， 袁華， 龔衍， 等. 精子DNA損傷與常規(guī)體外受精—胚胎移植結(jié)局關(guān)系研究. 廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報， 2015， 32（4）：564-567.

[收稿日期：2017-02-09]