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        γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核診斷中的價值

        2017-06-06 12:00:03田瑞雪馬麗萍武紅莉侯洪艷張麗萍
        臨床薈萃 2017年6期
        關(guān)鍵詞:檢測

        田瑞雪,馬麗萍,武紅莉,侯洪艷,張麗萍

        (1.北京大學(xué)第三醫(yī)院海淀院區(qū)北京海淀醫(yī)院 呼吸科,北京 100086; 2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院 結(jié)核二病區(qū),北京 101149)

        ·論著·

        γ-干擾素釋放試驗在結(jié)核診斷中的價值

        田瑞雪1,馬麗萍2,武紅莉1,侯洪艷1,張麗萍1

        (1.北京大學(xué)第三醫(yī)院海淀院區(qū)北京海淀醫(yī)院 呼吸科,北京 100086; 2.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院 結(jié)核二病區(qū),北京 101149)

        目的 評價γ-干擾素釋放試驗的酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)法(T-SPOT.TB)在結(jié)核病輔助診斷中的價值。方法 選擇活動性結(jié)核病患者130例(包括肺結(jié)核112例,肺外結(jié)核8例),陳舊肺結(jié)核患者89例,非結(jié)核呼吸系統(tǒng)疾病患者137例。所有患者在抗結(jié)核之前均進(jìn)行痰液抗酸桿菌涂片及T-SPOT.TB檢測。按照痰液抗酸桿菌涂片結(jié)果,將肺結(jié)核患者分為涂片陽性組和陰性組。按照年齡分為中青年組和老年組。比較T-SPOT.TB對活動性結(jié)核病、陳舊肺結(jié)核診斷效能。結(jié)果T-SPOT.TB診斷結(jié)核病的敏感度為82.307%,特異度為75.182%;T-SPOT.TB對活動性結(jié)核病,陳舊肺結(jié)核,非結(jié)核的診斷比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.580,P=0.032);陳舊肺結(jié)核組陽性率比非結(jié)核組明顯升高。肺結(jié)核T-SPOT.TB敏感度為86.60%,特異度75.00%,痰涂片檢測的敏感度為65.17%,特異度98.33%。二者敏感度和特異度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.001)。中青年T-SPOT.TB診斷的敏感度高于老年(χ2=4.782,P=0.029)。結(jié)論T-SPOT.TB檢測快速便捷,有著較高的敏感度和特異度,可用于結(jié)核病尤其是涂陰性肺結(jié)核。對陳舊結(jié)核陽性率高,不適合鑒別陳舊肺結(jié)核和活動性結(jié)核。

        結(jié)核,肺;干擾素γ;酶聯(lián)免疫斑點測定

        近年來建立和發(fā)展起來的γ-干擾素釋放試驗(interferongammareleaseassays,IGRAs)為結(jié)核病的早期快速診斷提供了新途徑。IGRAs可彌補(bǔ)結(jié)核菌素純蛋白衍化物(PPD)試驗的不足,目前多個國家已將其用于診斷結(jié)核分枝桿菌(MTB)潛伏感染(LTBI)[1]。國內(nèi)外研究結(jié)果表明IGRAs診斷活動性結(jié)核病,具有一定的輔助診斷價值,尤其在發(fā)達(dá)國家[2]。本研究回顧性分析經(jīng)IGRAs的酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)法(T-SPOT.TB)方法檢測的130例活動結(jié)核病及89例陳舊性肺結(jié)核臨床資料,旨在評價T-SPOT.TB在活動性結(jié)核病診斷中的臨床應(yīng)用價值。探討IGRA在陳舊性肺結(jié)核、痰涂片陽性、陰性和不同年齡結(jié)核病輔助診斷中的價值,結(jié)果報告如下。

        1 資料與方法

        1.1 病例選擇 回顧性分析2015年6月至2016年6月首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京胸科醫(yī)院、北京海淀醫(yī)院收治的確診結(jié)核患者130例,男77例,女53例,平均年齡(49.0±17.54)歲,其中肺結(jié)核112例(痰涂片菌陽性肺結(jié)核73例,痰涂片菌陰肺結(jié)核39例),肺外結(jié)核18例;入選標(biāo)準(zhǔn):所有病例均無結(jié)核病史,在抗結(jié)核治療前行T-SPOT.TB檢測;涂片抗酸桿菌陽性,MTB培養(yǎng)陽性,病理結(jié)果提示肉芽腫性炎伴凝固性壞死。符合典型結(jié)核病臨床及影像學(xué)表現(xiàn),但未獲得病原學(xué)及病理學(xué)證實,疑似結(jié)核病患者經(jīng)診斷經(jīng)抗結(jié)核治療治愈隨訪觀察,臨床可排除其他非結(jié)核性疾病。陳舊肺結(jié)核組89例,男51例,女38例,平均年齡(53.0±18.52)歲,患者X線或CT表現(xiàn)為陳舊肺結(jié)核表現(xiàn)纖維化病變和鈣化。疾病對照為非結(jié)核組137例,來自北京市海淀醫(yī)院,男82例,女55例,平均年齡(57.0±14.37)歲: 病理結(jié)果明確為腫瘤、炎癥或其他疾病,且排除結(jié)核感染、陳舊肺結(jié)核、艾滋病毒感染等臨床診斷為其他疾病的患者,經(jīng)相應(yīng)治療或隨訪排除MTB感染,患者隨訪1年。

        1.2T-SPOT.TB檢測 使用結(jié)核感染T細(xì)胞檢測試劑盒(免疫斑點法,英國OxfordImmunotec公司,批號:TEC009156)進(jìn)行檢測,結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn):①空白對照孔斑點數(shù)為0~5個時,任何1個檢測孔斑點數(shù)減去空白對照孔斑點數(shù)>6判定為陽性;②空白對照孔斑點數(shù)≥6時,任何1個檢測孔斑點數(shù)≥2倍空白對照孔斑點數(shù)判定為陽性。

        1.3 痰涂片抗酸染色方法 痰標(biāo)本采集:痰液留取參照中國防癆協(xié)會《結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗規(guī)程》,無痰患者可采取霧化引痰或通過纖維支氣管鏡取痰,痰液不合格者,需進(jìn)一步指導(dǎo)后重新留取標(biāo)本送檢。痰涂片鏡檢:痰涂片按照《痰涂鏡檢標(biāo)準(zhǔn)化操作及質(zhì)量保證手冊》的要求處理,采用萋-尼染色法鏡檢。

        1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。組間率的比較采用χ2檢驗,采用診斷性試驗四格表計算敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值、陽性似然比、陰性似然比。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié) 果

        2.1T-SPOT.TB對結(jié)核病的檢測 130例確診結(jié)核及137例非結(jié)核病例進(jìn)行T-SPOT.TB檢測,結(jié)果顯示T-SPOT.TB對結(jié)核診斷的敏感度為82.307%,特異度為75.182%。見表1 。

        表1 T-SPOT.TB對結(jié)核診斷結(jié)果(%)

        2.2T-SPOT.TB對活動性結(jié)核病例、陳舊肺結(jié)核檢測 各組陽性率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,與非結(jié)核組比較,活動性結(jié)核組及陳舊肺結(jié)核組陽性率明顯增高。見表2。

        表2 T-SPOT.TB 在活動性結(jié)核和陳舊肺結(jié)核結(jié)果比較[例(%)]

        注:χ2=7.580,P=0.032;與非結(jié)核組比較,P<0.05

        2.3 活動性肺結(jié)核痰涂片和T-SPOT診斷比較 在診斷(包括確診和臨床診斷)為活動性肺結(jié)核病的112例患者中,73例經(jīng)病原學(xué)證實為痰涂片菌陽性結(jié)核病,T-SPOT.TB檢測敏感度高于痰涂片,特異度低于痰涂片。見表3。

        表3 痰涂片和T-SPOT.TB對肺結(jié)核診斷比較(%)

        2.4 不同年齡T-SPOT.TB檢測 中青組(18~59歲)確診肺結(jié)核病例88例,非結(jié)核組病例86例,老年組(60~89歲)確診肺結(jié)核病例42例,非結(jié)核組51例,中青年組T-SPOT.TB檢測敏感度高于老年組。見表4。

        表4 不同年齡結(jié)核感染T-SPOT.TB檢測結(jié)果比較(%)

        2.5T-SPOT.TB診斷活動性肺結(jié)核 在診斷(包括確診和臨床診斷)為活動性肺結(jié)核的112例中,73例經(jīng)病原學(xué)證實為痰涂片菌陽性結(jié)核病,其余39例為菌陰性結(jié)核病。T-SPOT.TB對菌陽和菌陰結(jié)核病檢測的敏感度及特異度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。見表5。

        表5 T-SPOT.TB診斷活動性肺結(jié)核比較(%)

        3 討 論

        結(jié)核病被列為我國重大傳染病之一,是嚴(yán)重危害人民群眾健康的呼吸道傳染病,僅活動性結(jié)核病患病率就高達(dá)459/10萬,且無癥狀肺結(jié)核患者比例明顯增加[3]。IGRAs作為一種快速、無創(chuàng)的診斷方法,是否可作為活動性結(jié)核的輔助診斷方法。尤其在我國這樣結(jié)核高感染、高發(fā)病率的國家,是否有對活動性結(jié)核病的輔助診斷意義尚不清楚[4]。目前國內(nèi)需要更加廣泛的應(yīng)用和評價。

        IGRAs采用MTB的RDl區(qū)基因編碼抗原多肽作為特異性抗原,抗原成分主要有相對分子質(zhì)量為6 000的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和相對分子質(zhì)量為10 000的培養(yǎng)濾液蛋白(CFP-10)抗原或抗原多肽,ESAT-6、CFP-l0抗原的蛋白編碼來源于MTB基因中的一個菌種特異性基因片段RD-1,而所有的BCG菌株和絕大多數(shù)非MTB(堪薩斯分枝桿菌、海分枝桿菌和蘇爾加分枝桿菌除外)不含RD-1,因此該試驗有著較高的特異度,且不受是否接種卡介苗的影響。國外文獻(xiàn)報道,T-SPOT.TB在中/低收入國家診斷肺結(jié)核的綜合敏感度為82%~91%,特異度為61%~74%[5-6]。國內(nèi)多數(shù)研究結(jié)果提示,T-SPOT.TB檢測對疑似肺結(jié)核的診斷敏感度為77%~95%,特異度為65.5%~85%[7-9]。本研究選擇了130例活動性結(jié)核患者,另選擇137例非結(jié)核患者作為對照。結(jié)果表明T-SPOT.TB檢測活動性結(jié)核病的敏感度和特異度為82.307%和75.182%,與文獻(xiàn)報道結(jié)果相似。本研究顯示在結(jié)核病高負(fù)擔(dān),卡介苗廣泛接種的國家,IGRAs有較好的敏感度和特異度可以作為結(jié)核病輔助診斷手段。

        IGRAs在陳舊肺結(jié)核患者中具體陽性率并不十分清楚,本研究探討IGRAs能否區(qū)別陳舊性肺結(jié)核和活動性結(jié)核,結(jié)果顯示IGRAs在陳舊肺結(jié)核陽性率51.69%,明顯高于非結(jié)核組,IGRAs在陳舊肺結(jié)核高陽性率與相關(guān)研究一致[10]。IGRAs在陳舊肺結(jié)核診斷的陽性率及假陽性率升高,導(dǎo)致陳舊肺結(jié)核誤診為活動性肺結(jié)核比例升高,故T-SPOT.TB不能很好區(qū)分陳舊肺結(jié)核和活動性肺結(jié)核。楊新婷等[11]應(yīng)用ESAT-6和ESAT-6/CFP-10抗原刺激后,分泌IFN-γ量在菌陰性肺結(jié)核組和陳舊性肺結(jié)核組之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。只有ESAT-6/CFP-10抗原刺激后,分泌IFN-γ的量在菌陽性肺結(jié)核組和陳舊性肺結(jié)核組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明在陳舊肺結(jié)核因感染過MTB,體內(nèi)MTB特異的記憶T淋巴細(xì)胞,在體外再次受到MTB特異抗原的刺激時,會釋放分泌IFN-γ。在結(jié)核病高發(fā)國家,T-SPOT.TB在陳舊肺結(jié)核和結(jié)核潛伏感染陽性率是一致的[12]。故T-SPOT.TB無法區(qū)分陳舊肺結(jié)核與LTBI。陳舊肺結(jié)核陽性率較活動性結(jié)核病減低,主要因為參與結(jié)核細(xì)胞免疫應(yīng)答的因子IFN-γ、TNF-p及IL4隨著病情的好轉(zhuǎn)顯著降低,隨著人體大量MTB被清除或者進(jìn)入休眠狀態(tài)后,人體免疫應(yīng)答水平可能相應(yīng)降低。因此,32%~46%活動性肺結(jié)核患者在抗結(jié)核治療后檢測IGRAs轉(zhuǎn)陰性,陽性率下降[13-14]。所以在結(jié)核高發(fā)國家,應(yīng)用IGRAs輔助診斷活動性肺結(jié)核,注意排除陳舊肺結(jié)核假陽性干擾。

        本研究中以臨床診斷結(jié)核病為標(biāo)準(zhǔn),T-SPOT.TB對肺結(jié)核檢測的敏感度高于痰涂片;T-SPOT.TB檢測的特異度低于痰涂片。由此可見,在肺結(jié)核診斷上,T-SPOT.TB檢測較痰涂片有著更高的敏感度。由于結(jié)核病是乙類傳染性疾病,應(yīng)早期發(fā)現(xiàn),早期隔離,減少疾病的傳播。與有癥狀的結(jié)核患者接觸及接觸時間是LTBI的危險因素,及時治療和隔離有癥狀的結(jié)核病患者可有效降低密切接觸者LTBI風(fēng)險[15]。Anderson等[16]研究發(fā)現(xiàn)對結(jié)核患者及時治療與隔離是減少結(jié)核病播散的最好手段。T-SPOT.TB作為高敏感度的診斷輔助實驗避免臨床工作漏診結(jié)核病,減少結(jié)核病傳播有重大的意義。

        與痰涂片比較T-SPOT.TB特異度降低主要原因可能為:IGRAs是基于檢測以MTB特異性抗原在體外刺激T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的原理為基礎(chǔ)的體外免疫診斷技術(shù),判斷的是受檢宿主T細(xì)胞是否對MTB特異性抗原有記憶,因此其臨床意義為檢測機(jī)體是否感染過MTB。機(jī)體的免疫系統(tǒng)啟動了對MTB蛋白的免疫應(yīng)答反應(yīng),對MTB產(chǎn)生了相應(yīng)的記憶T細(xì)胞,當(dāng)再次接觸相同蛋白(抗原)時,即會產(chǎn)生和釋放IFN-γ,IGRAs檢測呈現(xiàn)陽性結(jié)果。我國是結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國家,2010年第五次全國結(jié)核病流行病學(xué)抽樣調(diào)查結(jié)果顯示,我國結(jié)核病患病率為459/10萬[17],但我國感染MTB的人數(shù)卻超過5億,占總?cè)丝诘?4.5%,其中絕大多數(shù)是LTBI者[18]。當(dāng)患者機(jī)體隱性感染時,免疫系統(tǒng)啟動了對MTB蛋白的免疫應(yīng)答反應(yīng),故此我國特異度降低。痰涂片的高特異度,可以彌補(bǔ)T-SPOT.TB的低特異度,避免誤診。所以肺結(jié)核作為傳染性疾病,T-SPOT.TB高敏感度的診斷技術(shù)可以提高疾病診斷效率,減低漏診率。結(jié)核患者選擇全血IGRA輔助診斷結(jié)核病有著更高的價值,建議臨床推廣。

        我國肺結(jié)核患者中老年患者比例高,且隨著年齡增加逐步增高,75~79歲達(dá)到高峰[17]。本研究中,T-SPOT.TB對老年肺結(jié)核病例的診斷敏感度78.57%,顯著低于中青年。提示在中青年人群中T-SPOT.TB具有較好的輔助診斷價值,在老年人群中診斷性能相對降低。Bae等[19]采用QuantiFERON-TBGoldIT試驗(QFT-GIT)和T-SPOT.TB兩種IGRA試驗方法檢測結(jié)核患者,研究發(fā)現(xiàn)低于29歲的患者QFT-GITT和SPOT.TB敏感度為93.3%和96.7%,70歲患者敏感度降為68.3%和86%。進(jìn)行多因素分析發(fā)現(xiàn),GFT-GIT敏感度與年齡有相關(guān)性,T-SPOT.TB與年齡并無明顯的相關(guān)性??梢婋S著年齡增加,IGRA檢測敏感度下降,診斷效能降低。老年結(jié)核患者發(fā)病無典型癥狀,無癥狀者占28.7%。細(xì)菌學(xué)診斷結(jié)核病面臨諸多問題,老年肺結(jié)核患者痰涂片陽性率僅占31.9%~68.1%,而且不耐受創(chuàng)傷性檢測,確診率低。胸片輔助檢查不特異,PPD多呈一般陽性或陰性,強(qiáng)陽性僅占19.3%[20]。而吳研等[21]研究408例老年肺結(jié)核患者T-SPOT.TB檢測陽性檢出率高于痰涂片、痰培養(yǎng)和結(jié)核抗體檢測的陽性率,T-SPOT.TB診斷敏感度較其他檢查方法高,對于老年IGRAs的檢測結(jié)果應(yīng)該謹(jǐn)慎解讀,需結(jié)合臨床癥狀和其他檢測結(jié)果綜合診斷。老年患者IGRAs檢測敏感度下降,可能與老年病例的免疫力下降、營養(yǎng)不良、合并癥增多等有關(guān)。隨著年齡的增長,機(jī)體免疫力逐漸下降,對結(jié)核抗原的應(yīng)答能力也趨于下降,因此表現(xiàn)為結(jié)核抗原刺激后釋放IFN-γ的斑點數(shù)降低,甚至不反應(yīng)[22-23]。

        在涂陽肺結(jié)核患者中,全血IGRA檢測陽性率為94.52%;而在涂陰患者中,全血IGRA檢測陽性率為74.35%,而差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與相關(guān)研究一致[24]。提示全血IGRA檢測可以將有助病原學(xué)陰性肺結(jié)核的診斷。

        綜上所述,T-SPOT.TB檢測在臨床上可以作為結(jié)核病輔助診斷手段,敏感度提高有利于結(jié)核病診斷,避免漏診傳染源,不能區(qū)分陳舊肺結(jié)核與活動性結(jié)核病。對中青年疑似結(jié)核病病例具有更加突出的輔助診斷能力。對病原學(xué)陰性結(jié)核病提高診斷率。

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        DiagnosticvalueofT-SPOT.TBinterferon-γreleaseassayfortuberculosis

        TianRuixue1,MaLiping2,WuHongli1,HouHongyan1,ZhangLiping1

        1.DepartmentofRespiratoryMedicine,BeijingHaidianHospital,BeijngHaidianSectionofPekingUniversityThirdHospital,Beijing10080,China; 2.SecondWardofTuberculosis,BeijingChestHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing101149,China

        TianRuixue,Email:tianruixue2009@163.com

        ObjectiveToevaluatethevalueofinterferon-gammareleaseassay(IGRA)indiagnosisoftuberculosis.MethodsThestudyrecruited130casesofactivetuberculosisclinicallyprovedfromBeijingChestHospital,and89casesofoldhealedtuberculosisand137casesofnon-TBpatientsfromBeijingHaidianHospital.T-SPOT.TBtestandfluorescencestainingbeforeanti-tuberculosistherapywereperformedinallpatients.Accordingtotheresultofthefluorescencestaining,thepatientswithtuberculosisweredividedintopositivegroupandnegativegroup.Accordingtotheage,thepatientsweredividedintoyoungergroupandelderlygroup.ThediagnosticperformanceofT-SPOT.TBwascompared.ResultsThesensitivityofthetuberculosisfromT-SPOT.TBdiagnosiswas82.307%,thespecificitywas75.182%.ThepositiveratesofT-SPOT.TBamongpulmonarytuberculosis,oldhealedtuberculosisandnon-TBpatientsweresignificantlydifferent(χ2=7.580,P=0.032).ThepositiverateofT-SPOT.TBinoldhealedtuberculosiswassignificantlyhigherthanthatofnon-TBpatients.Thesensitivityofpulmonarytuberculosiswas86.60%,thespecificityofT-SPOT.TBwas75.0%,thesensitivityofthefluorescencestainingwas65.17%,thespecificityofthefluorescencestainingwas98.33%.Thecomparisonbetweenthetworesultshadremarkablestatisticalsignificance(P<0.001).Thesensitivityoftheyoungergroupwasobviouslyhigherthanthatoftheeldergroup(χ2=4.782,P=0.029).ConclusionT-SPOT.TBismorequickandconvenient.Italsohasahighersensitivityandnegativepredictedvalue.T-SPOT.TBisamorevaluableauxiliarydiagnosistoyoungerpatients.Itcanbeusedinthediagnosisofsmearnegativepulmonarytuberculosispatientsandisnotrecommendedinidentifyingoldhealedtuberculosisandactivetuberculosis.

        tuberculosis,pulmonary;interferon-gamma;enzyme-linkedimmunospotassay

        田瑞雪,Email:tianruixue2009@163.com

        R

        A

        1004-583X(2017)06-0507-05

        10.3969/j.issn.1004-583X.2017.06.014

        2017-03-08 編輯:王秋紅

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