王子雄，王勤章，錢彪

(石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，新疆石河子832000)

經(jīng)尿道灌注SCL基因重組慢病毒的DCP豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞數(shù)量、分布及超微結(jié)構(gòu)觀察

王子雄，王勤章，錢彪

(石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，新疆石河子832000)

目的 觀察經(jīng)尿道灌注干細(xì)胞白血病(SCL)基因重組慢病毒的糖尿病膀胱病(DCP)豚鼠膀胱Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞(ICC)的數(shù)量、分布及超微結(jié)構(gòu)變化。方法 構(gòu)建SCL基因重組慢病毒且標(biāo)定滴度。選擇雄性豚鼠70只，單次腹腔注射鏈尿佐菌素12周后構(gòu)建DCP豚鼠模型，將成功造模的27只豚鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組、陽性對(duì)照組、空白對(duì)照組，每組9只。實(shí)驗(yàn)組、陽性對(duì)照組、空白對(duì)照組豚鼠分別經(jīng)尿道灌注(轉(zhuǎn)染)SCL基因重組慢病毒、空慢病毒和等量PBS液。分別于轉(zhuǎn)染后7、14、28 d每組各處死3只豚鼠，取膀胱組織，制作切片，激光共聚焦顯微鏡下觀察GFP表達(dá)、膀胱ICC數(shù)量及分布變化，透射電鏡下觀察膀胱ICC的超微結(jié)構(gòu)變化。結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長，ICC數(shù)量逐漸增多(P均<0.01)，分布越發(fā)密集，但綠色熒光逐漸減退；空白組和對(duì)照組未見綠色熒光，隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長，ICC數(shù)量逐漸減少(P均<0.05)，分布稀疏；轉(zhuǎn)染14、28 d時(shí)，實(shí)驗(yàn)組ICC數(shù)量較空白組和對(duì)照組增加(P均<0.01)。實(shí)驗(yàn)組隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長，ICC細(xì)胞器數(shù)量增多，形態(tài)趨于正常，細(xì)胞內(nèi)空泡減少，胞周突起延長變多，ICC超微結(jié)構(gòu)處于不斷恢復(fù)之中；而陽性對(duì)照組和空白對(duì)照組ICC超微結(jié)構(gòu)病理變化逐漸加重。結(jié)論 經(jīng)尿道灌注SCL基因重組慢病毒轉(zhuǎn)染DCP豚鼠膀胱后，膀胱ICC數(shù)量增多，分布更加密集，細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)得到修復(fù)，提示SCL基因?qū)CP可能有一定治療效果。

干細(xì)胞白血病基因；Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞；糖尿病膀胱病

糖尿病是嚴(yán)重危害人體健康的多發(fā)病及常見病[1]。糖尿病膀胱病(DCP)又稱糖尿病神經(jīng)源性膀胱(DNB)，是糖尿病常見并發(fā)癥之一，發(fā)生率為19%～84%[2]，早期表現(xiàn)為尿頻、尿急，后期表現(xiàn)為尿不盡、殘余尿增多等膀胱功能失代償征象[3]。糖尿病患者常因膀胱功能障礙、排尿異常導(dǎo)致生活質(zhì)量嚴(yán)重下降[4]。目前，DCP的發(fā)病機(jī)制和治療措施在不斷探索之中。研究[5，6]發(fā)現(xiàn)，人類、豚鼠、小鼠、大鼠等多種動(dòng)物的膀胱逼尿肌有一特殊間質(zhì)細(xì)胞，形態(tài)與胃腸道Cajal樣間質(zhì)細(xì)胞(ICC)類似，稱為膀胱ICC。膀胱逼尿肌的收縮受膀胱ICC的調(diào)控[7]。ICC細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中存在一特異性酪氨酸蛋白激酶生長因子受體c-kit[8]，c-kit與其配體干細(xì)胞因子(SCF)結(jié)合后可激活SCF/c-kit信號(hào)通路，該通路在維持ICC生理特性和表型中發(fā)揮重要作用[9，10]。然而，DCP會(huì)使膀胱ICC逐步衰退和減少，進(jìn)而使SCF/c-kit信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路受阻[11]。干細(xì)胞白血病(SCL)基因是c-kit上游的重要調(diào)控基因，SCL過表達(dá)能使c-kit表達(dá)增強(qiáng)，促進(jìn)DCP中ICC功能和表型恢復(fù)[12]。本研究設(shè)計(jì)通過尿道灌注SCL基因重組慢病毒轉(zhuǎn)染DCP豚鼠膀胱，觀察ICC形態(tài)變化，為進(jìn)一步利用SCL基因重組慢病毒治療DCP提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與主要材料 選取英國種普通級(jí)雄性豚鼠70只，鼠齡3～6個(gè)月，體質(zhì)量350～450 g，購自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心。攜帶綠色熒光蛋白(GFP)的SCL基因重組慢病毒由上海吉?jiǎng)P基因化學(xué)技術(shù)有限公司協(xié)助制作，鏈尿佐菌素購自美國Sigma公司，恒冷冰凍切片機(jī)，大鼠抗小鼠c-Kit抗體購自美國Millipore公司，兔抗大鼠羅丹明標(biāo)記熒光抗體購自Sigma公司，醋酸雙氧鈾購自美國TED PELLA公司，激光共聚焦顯微鏡，透射電子顯微鏡。

1.2 SCL基因重組慢病毒的構(gòu)建與鑒定 對(duì)SCL基因質(zhì)粒進(jìn)行PCR擴(kuò)增，上游引物序列為5′-GAGGATCCCCGGGTACCGGTCGCCACCATGACCGAGCG-GCCGCCGAG-3′，下游引物序列為5′-TCACCATG-GTGGCGACCGGCCGAGGGCCGGCTCCATC-3′。將P-CR擴(kuò)增產(chǎn)物提純后與GV287-EGFP結(jié)合，形成重組質(zhì)粒GV287-EGFP/SCL，通過PCR法進(jìn)行基因擴(kuò)增，分裝后測(cè)序。選擇293T細(xì)胞為包裝細(xì)胞，制備編碼慢病毒重組病毒質(zhì)粒，以pHelper1.0與pHelper2.0載體質(zhì)粒作為輔助包裝原件。用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑盒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，以GV287-5EGFP空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞作為陰性對(duì)照。收集培養(yǎng)上清取得慢病毒，檢測(cè)GFP以測(cè)定滴度，慢病毒滴度為5×108TU/mL。

1.3 構(gòu)建DCP豚鼠模型

1.3.1 糖尿病豚鼠模型的建立 70只豚鼠用全價(jià)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，喂養(yǎng)過程中死亡2只。將鏈尿佐菌素(STZ)溶于新鮮配制的枸櫞酸緩沖液(pH 4.4、濃度0.1 mol/L)中。給豚鼠單次腹腔注射200 mg/kg的STZ，3只在注射STZ后4～10 d內(nèi)死亡。飼養(yǎng)6周后禁食12 h，采用剪耳法為豚鼠測(cè)定血糖，每周1次，連續(xù)4周，隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L為糖尿病模型誘導(dǎo)成功，共31只豚鼠進(jìn)入下步實(shí)驗(yàn)。34只豚鼠誘導(dǎo)失敗，已剔除。

1.3.2 DCP豚鼠模型的建立 根據(jù)前期研究[13]結(jié)果，STZ單次腹腔注射豚鼠12周后，88.89%的糖尿病豚鼠發(fā)生失代償期DCP，從而確定豚鼠失代償期DCP發(fā)生的時(shí)間窗口，可建立較為可靠的DCP豚鼠動(dòng)物模型。將“1.3.1”中誘導(dǎo)成功的糖尿病豚鼠繼續(xù)飼養(yǎng)2周后建立DCP模型，期間4只豚鼠死亡，從研究中剔除；剩余27只符合DCP診斷標(biāo)準(zhǔn)(膀胱殘余尿大于膀胱容量的10%，逼尿肌收縮力下降，膀胱容量及順應(yīng)性增加等[14，15])，進(jìn)入后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.4 SCL基因重組慢病毒灌注(轉(zhuǎn)染)方法 將DCP豚鼠按體質(zhì)量大小編號(hào)，用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組，其中實(shí)驗(yàn)組9只、空白對(duì)照組9只、陽性對(duì)照組9只。準(zhǔn)備各組灌注液：實(shí)驗(yàn)組為5×108TU/mL的SCL慢病毒40 μL加ENi.S.至400 μL混勻后分成兩等份；陽性對(duì)照組為5×108TU/mL的空慢病毒40 μL加ENi.S.至400 μL混勻后分成兩等份；空白對(duì)照組為2等份200 μL的PBS液。將各組豚鼠禁食水12 h，100 mg/mL水合氯醛按200 mg/kg進(jìn)行腹腔注射麻醉；將豚鼠四肢固定于操作臺(tái)上暴露陰莖，碘伏消毒后鋪一次性洞巾，插入尿管(硬膜外導(dǎo)管改良而成)8～10 cm后見尿液流出；放空尿液，用注射器反復(fù)抽吸0.4 mL生理鹽水進(jìn)行膀胱沖洗，待液體清亮后，實(shí)驗(yàn)組、陽性對(duì)照組、空白對(duì)照組分別于當(dāng)天和第3天灌注SCL慢病毒、空慢病毒、PBS液，每次200 μL，灌注完畢后結(jié)扎尿管1～2 h，待豚鼠蘇醒后撥除尿管，回籠繼續(xù)飼養(yǎng)。

1.5 膀胱ICC數(shù)量計(jì)算及分布觀察 各組分別于轉(zhuǎn)染后7、14、28 d采用頸部脫臼法各處死3只豚鼠，無菌環(huán)境下取膀胱組織標(biāo)本，經(jīng)OCT包埋后置入恒冷冰凍切片機(jī)進(jìn)行切片，每個(gè)膀胱標(biāo)本制作4張冰凍切片，厚度為20 μm。將新鮮切片在100%丙酮中固定15 min，1% PBS漂洗3次；用0.03% H2O2溶液將內(nèi)源性過氧化物酶密封處理30 min，1%PBS漂洗3次；用1∶100胎牛血清封閉，室溫孵育30 min，滴加1∶200特異性一抗(大鼠抗小鼠c-kit抗體)，在4 ℃環(huán)境中孵育2 h后放入-4 ℃冰箱內(nèi)繼續(xù)孵育12 h，1% PBS漂洗3次；加濃度1∶100二抗(兔抗大鼠羅丹明標(biāo)記熒光抗體)，置于25 ℃濕盒內(nèi)避光孵育60 min，1% PBS漂洗3次；最后用50%甘油封片，置于激光共聚焦顯微鏡下觀察，沿單孔板垂直于每張切片水平連續(xù)觀測(cè)20個(gè)視野(200×)，觀察GFP表達(dá)、ICC數(shù)量及分布變化。激光共聚焦顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)正常膀胱ICC呈梭形或紡錘形，細(xì)胞核未被抗體標(biāo)記、無熒光著色，呈橢圓形，位于細(xì)胞中央，每個(gè)細(xì)胞兩端有特征性的長突起(圖1)。

圖1 激光共聚焦顯微鏡下正常豚鼠膀胱ICC形態(tài)

1.6 膀胱ICC超微結(jié)構(gòu)觀察 將“1.5”中取到的膀胱組織置于滴加3%戊二醛的玻片上，切割為1 mm3的組織塊，置于3%戊二醛固定液中固定48 h，再置入0.1%鋨酸中固定2 h，移至1%醋酸鈾內(nèi)在室溫下染色2 h；將組織塊脫水后浸泡于丙酮和中性樹膠混合液中，37 ℃烘箱內(nèi)過夜；將標(biāo)本包埋、修塊后置于超薄切片機(jī)上切割制作2 μm厚切片，甲苯藍(lán)染色后置于光學(xué)顯微鏡下定位；在超薄切片機(jī)上切割制作100 nm的超薄組織切片，用飽和醋酸雙氧鈾和檸檬酸鉛雙重電子染色15 min；于透射電鏡下觀察ICC超微結(jié)構(gòu)。根據(jù)ICC超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)定位。ICC多為單個(gè)，也有成對(duì)的，呈梭型或星形，胞體長度約為20 μm；細(xì)胞核呈橢圓形，體積較大，可見染色質(zhì)邊聚現(xiàn)象，少量胞質(zhì)圍繞細(xì)胞核分布；胞質(zhì)內(nèi)見較多的線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細(xì)胞器，細(xì)胞內(nèi)無肌纖維；胞體常形成2個(gè)或更多細(xì)胞突起，ICC間可以通過細(xì)胞突起相互連接。

2 結(jié)果

2.1 各組豚鼠膀胱ICC數(shù)量及分布變化 實(shí)驗(yàn)組鏡下可見GFP發(fā)出的綠色熒光，證明SCL基因轉(zhuǎn)染成功。實(shí)驗(yàn)組隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長，ICC數(shù)量逐漸增多，分布越發(fā)密集，但綠色熒光逐漸減退；空白組和對(duì)照組未見綠色熒光，隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長，ICC數(shù)量逐漸減少，分布稀疏。實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染7 d時(shí)見少量ICC呈零星分布，綠色熒光很強(qiáng)；轉(zhuǎn)染14 d時(shí)ICC數(shù)量較7 d時(shí)明顯增多(P<0.01)，ICC散在分布于膀胱平滑肌束間，綠色熒光較強(qiáng)；轉(zhuǎn)染28 d時(shí)ICC數(shù)量較14 d時(shí)增加(P<0.01)，分布較為密集，綠色熒光較弱?？瞻讓?duì)照組和陽性對(duì)照組豚鼠膀胱ICC中無GFP表達(dá)，未見綠色熒光；轉(zhuǎn)染7、14 d時(shí)ICC數(shù)量少，在膀胱平滑肌束間呈零星分布；轉(zhuǎn)染28 d時(shí)ICC數(shù)量更少，偶爾可見單個(gè)ICC出現(xiàn)，較轉(zhuǎn)染7、14 d時(shí)數(shù)量減少(P均<0.01)。轉(zhuǎn)染14、28 d時(shí)，實(shí)驗(yàn)組ICC數(shù)量較空白組和對(duì)照組增加(P均<0.01)。見表1。

表1 轉(zhuǎn)染不同時(shí)間后各組豚鼠膀胱ICC數(shù)量比較

注：與同組轉(zhuǎn)染7 d時(shí)相比，*P<0.05；與同組轉(zhuǎn)染14 d時(shí)相比，#P<0.01；與同時(shí)點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組相比，△P<0.01。

2.2 各組豚鼠膀胱ICC超微結(jié)構(gòu)變化 實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染7 d時(shí)ICC內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量少，線粒體腫脹，有空泡樣變，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，胞周突起少而短；轉(zhuǎn)染14 d時(shí)ICC核質(zhì)比例大，細(xì)胞核大，染色質(zhì)多，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脫顆粒，胞質(zhì)廣泛溶解、有大量空泡形成，細(xì)胞周突起少而長；轉(zhuǎn)染28 d時(shí)ICC內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量增多，形態(tài)趨于正常，胞內(nèi)稀少空泡，胞周突起明顯多且長?？瞻讓?duì)照組和陽性對(duì)照組轉(zhuǎn)染7、14 d時(shí)ICC內(nèi)細(xì)胞器數(shù)量減少，形態(tài)欠規(guī)則，胞內(nèi)空泡樣少，胞周突起少且短；轉(zhuǎn)染28 d時(shí)ICC細(xì)胞器數(shù)量少，形態(tài)不規(guī)則，線粒體腫脹、空泡樣變甚至溶解，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)少且明顯擴(kuò)張，大量空泡沿質(zhì)膜分布，胞周突起稀少(見圖2)。

圖2 各組豚鼠膀胱ICC超微結(jié)構(gòu)

3 討論

在豚鼠DCP模型及體外高糖環(huán)境下培養(yǎng)膀胱ICC中發(fā)現(xiàn)，伴隨ICC數(shù)量的減少、形態(tài)及電生理功能的改變，ICC中c-kit mRNA及c-kit蛋白表達(dá)明顯降低[16]。因此，高糖環(huán)境引起c-kit mRNA及c-kit蛋白表達(dá)下調(diào)是導(dǎo)致ICC數(shù)量減少、形態(tài)和功能損害的主要原因。由此推測(cè)，如果通過某方式恢復(fù)或者上調(diào)c-kit的表達(dá)，就可能促進(jìn)膀胱ICC增殖，進(jìn)而重塑受損的ICC表型及功能，逐漸恢復(fù)膀胱功能，達(dá)到治療DCP的目的。對(duì)于SCL功能和慢病毒的研究探索使我們對(duì)DCP的基因治療研究的可行性大大提升。糖尿病導(dǎo)致的高血糖環(huán)境使ICC表達(dá)c-kit信號(hào)分子減少，從而影響SCF/c-kit的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能[17]。相關(guān)研究表明，SCL基因結(jié)合位點(diǎn)在c-kit轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)，SCL主要是通過作用于c-kit基因啟動(dòng)子發(fā)揮功能，從而調(diào)節(jié)c-kit表達(dá)；SCL過表達(dá)能上調(diào)c-kit表達(dá)且恢復(fù)SCF的反應(yīng)性[18]。鑒于SCL的上述作用，本課題組設(shè)想通過基因治療的手段將SCL基因重組慢病毒轉(zhuǎn)染DCP豚鼠膀胱，逆轉(zhuǎn)受損ICC的功能和表型，為DCP的基因治療提供思路。

多項(xiàng)研究[19～22]表明，基因治療可能會(huì)為DCP的治療方式帶來新的進(jìn)展。基因治療是將目的基因?qū)牖颊叩陌薪M織細(xì)胞進(jìn)行表達(dá)，從而補(bǔ)償或糾正基因異常或基因缺陷，達(dá)到治療的目的[23]。要將外源基因運(yùn)送至特定的靶細(xì)胞，需要合適的載體負(fù)載目的基因。病毒載體是一種常用工具，能將目的基因轉(zhuǎn)入細(xì)胞。目前常用的病毒載體包括慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、腺病毒載體和腺病毒相關(guān)病毒載體等。慢病毒載體因其具有高效穩(wěn)定的轉(zhuǎn)移效率成為常用的載體工具[24～26]，廣泛用于疾病的基因治療相關(guān)臨床試驗(yàn)與研究[27，28]。本研究制作了SCL基因重組慢病毒載體，經(jīng)尿道灌注DCP豚鼠膀胱。由于膀胱是半開放性器官，在實(shí)驗(yàn)操作中可利用天然孔道采取無創(chuàng)和微創(chuàng)方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，我們通過插尿管將重組慢病毒直接灌入膀胱，避免實(shí)驗(yàn)過程中對(duì)組織的直接損傷，也避免了慢病毒的過量使用造成的浪費(fèi)及慢病毒在全身的蔓延分布。我們鏡下發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組GFP蛋白表達(dá)，表明SCL基因已成功轉(zhuǎn)染至豚鼠膀胱組織，為下一步實(shí)驗(yàn)提供了前提。

我們?cè)诩す夤簿劢癸@微鏡下觀察ICC數(shù)量及分布改變，發(fā)現(xiàn)隨著轉(zhuǎn)染時(shí)間延長，發(fā)紅色熒光的膀胱ICC數(shù)量逐漸增多，分布密集程度增加，但GFP發(fā)出的綠色熒光會(huì)逐漸減弱，這可能與膀胱組織自身新陳代謝有關(guān)；而陽性對(duì)照組和空白對(duì)照組隨轉(zhuǎn)染時(shí)間延長，ICC數(shù)量逐漸減少，分布稀疏。上述結(jié)果提示，SCL基因重組慢病毒灌入DCP膀胱后，能夠使ICC數(shù)量得到提升和恢復(fù)，增加了ICC密集程度。我們?cè)谕干潆婄R下觀察ICC超微結(jié)構(gòu)改變，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染SCL基因后ICC細(xì)胞器數(shù)量增多、形態(tài)趨于正常、細(xì)胞內(nèi)空泡減少、胞周突起延長變多，ICC超微結(jié)構(gòu)處于不斷恢復(fù)之中；而陽性對(duì)照組和空白對(duì)照組ICC超微結(jié)構(gòu)病理變化逐漸加重。上述結(jié)果說明，SCL基因的導(dǎo)入使得ICC的超微結(jié)構(gòu)處于不斷的恢復(fù)之中，反之，隨著病情的延長，ICC的超微結(jié)構(gòu)在不斷損傷。

綜上所述，經(jīng)尿道灌注SCL基因重組慢病毒轉(zhuǎn)染豚鼠DCP膀胱后，膀胱ICC數(shù)量、分布及超微結(jié)構(gòu)得到不同程度的恢復(fù)，提示SCL基因可能對(duì)DCP有一定治療效果，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為DCP的治療提供了新的手段和思路。但本實(shí)驗(yàn)也存在不足，如豚鼠尿管是通過硬膜外導(dǎo)管改良制成，豚鼠個(gè)體差異導(dǎo)致尿管與尿道的吻合程度有偏差，在灌注SCL基因重組慢病毒時(shí)，有個(gè)別豚鼠會(huì)出現(xiàn)少量病毒液從管壁旁滲出現(xiàn)象，這會(huì)導(dǎo)致慢病毒灌注量有一定偏差。

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Observation on number, distribution and ultrastructure of interstitial cells of Cajal in guinea pig with DCP after transurethral perfusion of SCL recombinant lentiviral vector

WANGZixiong,WANGQinzhang,QIANBiao

(TheFirstAffiliatedHospitalofShiheziUniversityMedicalCollege,Shihezi832000,China)

Objective To observe morphological changes in the number, distribution and ultrastructure of interstitial cells of Cajal (ICC) in guinea pig with diabetic cystopathy (DCP) after transurethral perfusion of stem cell leukemia (SCL) gene recombinant lentiviral vector. Methods We constructed the recombinant lentiviral vector of SCL gene and demarcated its titer. Seventy guinea pigs were selected and a single intraperitoneal injection of streptozotocin (STZ) was used to construct the DCP models of guinea pigs at the end of the 12th week. Twenty-seven successful DCP models of guinea pigs were randomly divided into the experimental group, positive control group and blank control group (n=9 in each group). The experimental group, the positive control group and the blank control group were injected with SCL gene recombinant lentivirus, empty lentivirus and the same amount of PBS solution, respectively. On day 7, 14 and 28 after transfection, 3 guinea pigs were sacrificed from each group to obtain the bladder tissue to make the section. The expression of GFP, bladder ICC number and distribution was observed under laser confocal microscope, and the ultrastructural changes of bladder ICC were observed by transmission electron microscope. Results In the experimental group, the number of ICC increased with the increase of transfection time (P<0.01), and the distribution was more and more intensive, but the green fluorescence decreased gradually. The blank group and the control group had no green fluorescence, and the number of ICC decreased with the increase of transfection time (P<0.05) and the distribution was sparse; on day 14 and 28, the number of ICC in the experimental group was higher than that in the blank group and the control group (allP<0.01). In the experimental group, with the transfection time prolonged, the number of ICC cells increased, morphology tended to normal, intracellular vacuole decreased, and the ultrastructure of ICC continuously recovered; however, in the positive control group and blank control group, ICC pathological ultrastructure changes gradually aggravated. Conclusions After the SCL gene is transfected into the bladder of DCP guinea pig, the number of ICC increases, the distribution becomes more intensive, and the ultrastructure of the cells is repaired. It suggests that SCL gene might have a certain therapeutic effect on DCP.

stem cell leukemia (SCL) gene; interstitial cells of Cajal; diabetic cystopathy

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81360120)。

王子雄(1988-)，男，碩士研究生在讀，主要研究方向?yàn)槊谀蛲饪茖W(xué)。E-mail: 115141179@qq.com

王勤章(1969-)，男，博士，教授，主要研究方向?yàn)槊谀蛲饪茖W(xué)。E-mail: wqz1969@sina.com

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.15.007

R587.2

A

1002-266X(2017)15-0026-05

2016-11-01)